滇龙胆GrSLS1基因的克隆与原核表达

以滇龙胆转录组为基础,采用RT PCR技术克隆了滇龙胆幼叶裂环番木鳖苷合酶基因,命名为GrSLS1（GenBank登录号KF941191）.序列分析结果显示,GrSLS1基因开放阅读框长1 560 bp,编码519个氨基酸;GrSLS1蛋白相对分子量为59.33 kD,pI为8.96.生物信息学分析结果表明,GrSLS1蛋白属于SLS家族成员,其N端含有一跨膜螺旋区域（10～32）;二级结构分析结果表明,GrSLS1蛋白主要由α螺旋和无规则卷曲组成;系统发育分析表明,GrSLS1与帽柱木MsSLS2蛋白亲缘关系最近.构建原核表达载体pGEX 4T GrSLS1,对GrSLS1基因进行原核表达,SDS PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致.该研究为进一步研究GrSLS1基因功能及通过在龙胆中过表达该基因提高龙胆苦苷含量奠定基础.

金花忍冬中一个新的二聚体环烯醚萜甙的2D NMR研究

从忍冬科药用植物金花忍冬 (Lonicerachrysatha)中首次分离得到一新的二聚体环烯醚萜甙———金花忍冬素 (chrysathain) .采用1 H 1 HCOSY、HMQC、HMBC及NOESY二维谱技术鉴定了此化合物的化学结构及构型 ,并对其1 H和1 3CNMR的谱峰进行了全归属 .

川西獐牙菜SmSLS2基因的克隆、生物信息学及表达分析

裂环马钱子苷合成酶(SLS)是环烯醚萜类化合物合成途径的限速酶。该研究根据川西獐牙菜转录组信息获得SmSLS2基因序列,对该基因进行克隆、生物信息分析、原核表达载体构建及蛋白体外诱导。结果表明SmSLS2 cDNA全长1 566 bp(GenBank编号MH535904),编码521个氨基酸,推测其蛋白相对分子质量为59. 79kDa,等电点为8. 92。结构域分析表明SmSLS2含一个跨膜结构域,SmSLS2的gDNA全长为2 576 bp,含5个外显子和4个内含子。SmSLS2蛋白与其他植物中SLS蛋白具有高度的相似性。进一步将SmSLS2构建到原核表达载体pET-28a-sumo上,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,在37℃、0. 5 mmol·L^(-1)IPTG条件下进行原核表达,诱导出与预测蛋白大小一致的目的蛋白。该研究成功从川西獐牙菜中克隆了SmSLS2,为进一步阐明该基因在环烯醚萜合成途径中的作用和通过基因工程手段改良环烯醚萜类化合物产量提供了理论基础。

芍药甙的结构修饰

芍药甙是从中药白芍、赤芍等中提取出来的一种单萜苷类化合物,它有1个蒎烷骨架及1个缩醛结构,这一结构在一定的酸性条件下可水解为成醛基。经水解后,芍药甙的主要功能基团与断马钱子苷(Secologanin)较为相似(都具有单萜及醛基的结构),而Secologanin即是合成单萜吲哚类生物碱的主要前体物。可以用芍药甙作为前体物,对其进行结构修饰,主要是与吲哚类(色氨酸,5-羟基色氨酸)作用,来合成一类全新的单萜吲哚类生物碱。此项工作将为进一步研究单萜吲哚类生物碱的丰富结构提供依据,并为新药的研制与开发提供一个新的思路。

UPLC-QqQ-MS/MS同时测定热毒宁注射液中6个活性成分

目的采用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法(UPLC-Qq Q-MS/MS)技术建立了同时测定热毒宁注射液中6个活性成分[japonicaside A(JA)、L-phenylalanion secologanin B(PSB)、木犀草苷、东莨菪内酯、(1S,6R,7R,10R)-6-羧基-10-甲基-α-亚甲基-1-(1-氧丁基)-环己烷丙烯酸(CMCA)、3α,5α-tetrahydrodeoxycordifoline lactam(TL)]的定性定量的检测方法。方法色谱条件为Agilent Zorbax SB-Aq C18色谱柱(150 mm×2.1 mm,3.5μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-甲醇,梯度洗脱:0.01~2.00 min,5%甲醇;2.00~4.00 min,5%~40%甲醇;4.00~11.00 min,40%~95%甲醇;11.00~13.00 min,95%甲醇;13.00~13.10 min,95%~5%甲醇;13.10~14.00 min,5%甲醇;体积流量0.5 m L/min;柱温20℃。质谱条件:采用电喷雾电离源(ESI),扫描方式为正、负离子多反应监测模式。其中,正离子监测模式的质谱条件为碰撞气(CAD)体积流量8 m L/min,气帘气(CUR)体积流量20 m L/min,雾化温度(TEM)500℃,喷雾电压(IS)4 500 V;负离子监测模式的质谱条件为碰撞气(CAD)体积流量8 m L/min,气帘气(CUR)体积流量20 m L/min,TEM 500℃,喷雾电压(IS)-4 500 V。结果热毒宁注射液中6个活性成分在测定的质量浓度范围内均具有良好的线性关系(r≥0.999 0),平均加样回收率分别为78.93%、114.65%、101.99%、90.98%、98.08%、115.58%;16批次热毒宁注射液中6个活性成分的平均质量浓度依次为2.00、26.63、52.63、5.29、34.64、9.69μg/m L。结论该方法简单准确,具有良好的重复性和稳定性,可为热毒宁注射液的质量标准的完善提供科学依据。

八仙花叶中环烯醚萜类化合物的结构鉴定

目的对八仙花Hydrangea macrophylla叶的化学成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱和HPLC等方法进行分离纯化,并通过1H-NMR、13C-NMR、MS等波谱学技术确定化合物结构。结果从八仙花叶提取物中分离得到11个环烯醚萜类化合物,分别鉴定为断马钱子苷乙基甲基缩醛(1)、断马钱子苷二甲基缩醛(2)、断氧化马钱子苷(3)、7-去氧马钱子酸(4)、马钱子酸(5)、8-表马钱子苷(6)、马钱子苷(7)、7-脱氢马钱子苷(8)、獐牙菜苷(9)、表断马钱子苷半缩醛内酯(10)、断马钱子苷半缩醛内酯(11)。结论化合物1为新化合物,命名为八仙花叶苷。化合物3、8为八仙花属植物中首次分离得到。