分泌型肿瘤坏死因子相关激活诱导因子融合蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化

目的 表达及纯化人分泌型肿瘤坏死因子相关激活诱导因子 (secretedformTNF relatedactivation in ducedcytokine,sTRANCE)蛋白。方法 将sTRANCE结构基因重组到含麦芽糖结合蛋白 (MBP)的融合蛋白原核表达载体 pMAL c2x中 ,在大肠杆菌中进行表达。 结果 经IPTG诱导表达出的MBP sTRANCE融合蛋白相对分子质量约 70 0 0 0 ,并经Westernblot分析证实。用直链淀粉琼脂糖凝胶 (amyloseresin)亲和层析纯化得到电泳均一的融合蛋白。结论 成功地获得sTRANCE蛋白 ,为进一步研究其生物学性能和用于肿瘤生物治疗的可能性打下了基础。

人分泌型肿瘤坏死因子相关激活诱导因子基因的克隆及测序

目的 克隆人分泌型肿瘤坏死因子相关激活诱导因子 (s TRANCE)的编码区 c DNA片段。 方法 从人淋巴结组织提取总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增人 s TRANCE基因编码区序列 ,将其克隆至 p MD18- T载体中 ,并行序列测定。 结果 克隆获得的 744 bp片段与文献报道的人 s TRANCE基因编码区 c DNA序列一致。 结论 本研究为进一步研究 s TRANCE的生物学性能和用于肿瘤生物治疗的可能性打下了基础。

过敏性紫癜患者血清中TRANCE和BLys的检测

目的了解TRANCE和BLys在过敏性紫癜发病中的作用。方法通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测过敏性紫癜患者血清中TRANCE和BLys的表达水平。结果过敏性紫癜患者血清中TRANCE和BLys的表达水平(2.83±0.96,90.48±2.64)与正常对照组(0.85±0.35,82.02±4.04)相比均升高(P<0.01),伴有肾脏损害患者血清中TRANCE,BLys的表达水平(4.09±0.45,93.92±2.07)与单纯型患者(2.44±0.70,89.42±1.75)相比显著增高(P<0.01)。患者血清中TRANCE与BLys的表达水平呈显著正相关(r=0.515,P<0.01)。结论过敏性紫癜患者血清中TRANCE,BLys的表达异常增高,可能与其发病有关。

携带溶瘤病毒的CIK细胞载体构建及其抗肝癌初步研究

目的:构建含肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)基因的重组腺病毒的细胞因子诱导杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞载体,并初步观察其抗肝癌能力。方法:分离外周血淋巴细胞,进行CIK细胞培养及表型鉴定;构建携带CD40L启动子的慢病毒载体pLentihCD40L-E1AB及重组腺病毒载体pAd5/F35-TRAIL,两步法感染CIK细胞;应用ELISA、MTT、小管形成实验及软琼脂克隆形成实验观察双病毒感染后CIK细胞的分泌功能、体外增殖能力变化以及对血管生成能力和对肝癌细胞集落形成能力的影响。结果:CIK细胞生长旺盛,双染色结果显示CD3、CD56、CD11a和CD226为阳性,CD8和CD305为阴性。成功获得了具有hCD40L启动子活性及腺病毒E 1基因的慢病毒pLenti-hCD40LE1AB,同时成功构建了重组腺病毒载体pAd5/35-TRAIL。功能学检测结果显示,感染Ad5/35-TRAIL和pLentihCD40L-E1AB两种病毒的CIK细胞中干扰素γ表达水平升高(P<0.05),血管生成及肝癌细胞集落形成能力受到明显抑制,但对CIK细胞自身增殖能力的影响较小。结论:成功构建了携带腺病毒并表达TRAIL基因的CIK细胞,并初步观察到该CIK细胞对肝癌细胞生长具有一定的抑制作用。