Research progress on chemical constituents in Sophora alopecuroides L.and their pharmacological activities

Sophora alopecuroides L.,a perennial plant belonging to Leguminosae family,is used as medicinal materials to treat a variety of skin diseases.Its chemical components are complex and diverse,mainly including alkaloids and flavonoids.Modern pharmacological studies have found that the isolated compounds from S.alopecuroides have a variety of pharmacological activities.In particular,alkaloids represented by matrine,aloperine and oxymatrine have significant anti-inflammatory,anti-viral,anti-tumor,anti-bacterial and immunomodulatory activities.This paper summarized the chemical constituents and pharmacological activities of S.alopecuroides,aiming to provide the basis for further research.

HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱、苦参碱和槐果碱的含量

目的:建立同时测定苦豆子总碱中槐定碱、苦参碱及槐果碱含量的 HPLC 测定法。方法:色谱柱为 Hypersil-NH_2柱(4.6mm×200mm,5μm),流动相为乙腈-磷酸缓冲液(1.0mL 磷酸加入到1000mL 水中,三乙胺调 pH 2.5)-无水乙醇(80:10:10),检测波长为220nm,柱温35℃,流速1.0mL·min^(-1),进样量20μL。结果:槐定碱、苦参碱、槐果碱分别在13.0～108.0mg·L^(-1)、11.4～95.2mg·L^(-1)和4.6～82.1mg·L^(-1)浓度范围内呈良好的线性关系,r 分别为0.9999,0.9996,0.9999。平均回收率(n=9)分别为99.41%,100.0%,100.6%。结论:可通过 HPLC 法同时测定苦豆子总碱中槐定碱、苦参碱和槐果碱的含量,并可用该方法进行苦豆子药材及含苦豆子的成药的质量控制。

苦豆子种子中生物碱的分离及lehmannine的结构确定

目的 研究苦豆子种子中生物碱的分离及槐果碱转移氢化制备苦参碱的研究。方法 利用离子交换、萃取和柱层 ,并结合转移氢化增大不同生物碱理化性质差异进行分离。结果 从苦豆子种子中分得 5种生物碱 ,其结构经元素分析、IR、MS、1 H NMR和 1 3CNMR光谱鉴定为氧化苦参碱、氧化槐定碱、苦参碱、槐定碱和 lehannine。结论 首次从苦豆子种子中分得 lehm

槐定碱预防小鼠内毒素性肝损伤的作用及对肝脏CD14、TLR4表达的影响

目的研究预防性给予槐定碱对小鼠内毒素血症急性肝损伤的影响及对CD14、TLR4表达的调节。方法观察槐定碱12、6、4mg/kg三个剂量预防性处理的小鼠,在给予内毒素后2、6、12、24h时各组小鼠一般状况、肉眼及光镜下肝组织的病理变化,赖氏法测定血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)浓度,RT-PCR与Western Blot分别检测肝组织CD14及TLR4的mRNA与蛋白表达,放免法检测血清TNF-α含量的变化。结果槐定碱三个剂量预防性给予,各个时间点结果均表明改善了内毒素血症模型小鼠的一般状况,减轻了肝组织病理改变;槐定碱三个剂量组的ALT值均低于同时间点的LPS模型组(P<0.01或P<0.05);槐定碱三个剂量组与同时间点LPS模型组比较,均下调肝组织CD14、TLR4 mRNA和蛋白的表达(P<0.01或P<0.05);槐定碱三个剂量组血清TNF-α水平均较同时间点LPS模型组降低(P<0.01或P<0.05),并在24h时均降至正常对照组水平。结论槐定碱12、6、4mg/kg三个剂量预防性给予,可抑制内毒素血症小鼠肝脏炎症反应,其机制可能与下调LPS识别受体CD14、TLR4表达,并进而抑制下游炎症因子分泌有关。

苦豆子提取物指纹图谱建立及其抗炎作用谱效关系研究

目的:建立苦豆子总黄酮、总生物碱、总多糖配伍后的指纹图谱,研究不同配伍的化学成分与细胞活力以及抗炎之间的关联性,明确不同配伍对细胞活力的影响以及抗炎作用的物质基础。方法:采用高效液相色谱(HPLC)建立苦豆子总黄酮、总生物碱、总多糖配伍后的指纹图谱,以LPS刺激RAW264.7建立炎症细胞模型,对不同配伍组合对炎症细胞模型肿瘤坏死因子(TNF-α)水平以及以细胞活力进行检测,采用正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)研究苦豆子化学成分与抗炎作用的谱效关系,筛选苦豆子抗炎作用的物质基础。结果:苦豆子生物碱类成分HPLC指纹图谱共有峰有8个,指认出5个共有峰,分别是槐果碱、槐定碱、苦参碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱;黄酮类成分HPLC指纹图谱共有峰有15个,指认出3个共有峰,分别为槲皮素、紫铆因和芹菜素。相关性分析结果表明,槐果碱、槐定碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱与脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)细胞释放的炎症因子TNF-α水平呈显著负相关,槲皮素与细胞活力呈负相关,紫铆因、芹菜素与细胞活力呈正相关,槐定碱、氧化苦参碱与细胞活力呈负相关,苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱与细胞活力呈正相关。结论:槐果碱、槐定碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱可能是苦豆子抗炎的物质基础,可为挖掘苦豆子的质量标志物以及药材质量控制提供参考。

槐果碱对感染CVB_3小鼠NK细胞活性和IL-2水平的影响

目的 :研究槐果碱对感染CVB3 小鼠NK细胞和IL - 2活性的影响。方法 :病毒接种法制备CVB3 病毒性心肌炎小鼠模型 ,用MTT比色分析法与ELISA法分别检测小鼠脾脏中NK细胞活性与IL - 2的诱生量。结果 :病毒模型组NK活性明显升高 ,IL - 2活性降低。槐果碱 5 0mg .kg-1.d-1和 2 5mg .kg-1.d-1两个剂量ig可明显升高正常小鼠NK活性。但槐果碱各治疗剂量对CVB3 心肌炎小鼠NK细胞活性无明显影响。槐果碱 5 0mg .kg-1.d-1ig治疗组可明显增加脾脏IL - 2诱生量。结论 :槐果碱升高CVB3 感染小鼠的IL - 2活性 ,这可能是其抗CVB3 免疫机理之一。

苦豆籽HPLC指纹图谱的建立及产区相关性分析

目的研究苦豆籽的HPLC指纹图谱,为科学评价及有效控制其质量提供依据。方法采用HPLCDAD方法,对不同主产区的21批苦豆籽进行指纹图谱研究,采用相似度评价分析所得图谱,同时运用聚类分析及主成分分析对其进行模式识别。结果确定苦豆籽指纹图谱有15个共有峰,并指认了6个色谱峰,不同批次间的相似度大于0.900。通过聚类分析和主成分分析将21批药材按不同产地分为3类。结论苦豆籽的指纹图谱特征性及专属性良好,可用于全面控制苦豆籽的质量,保证每批苦豆籽均一性。

HPLC同时测定苦豆子中槐定碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱的含量

目的:建立同时测定苦豆子中槐定碱、氧化槐果碱及氧化苦参碱含量的HPLC测定法。方法:色谱柱为Phenomenex Gemini C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇(A)-0.2%磷酸水(B)为流动相,检测波长205 nm,流速1 mL.min-1,柱温30℃。结果:在线性范围内3个对照品的标准曲线呈良好的线性关系(r≥0.999 7)。平均回收率分别为100.0%,97.0%,97.0%。结论:可通过HPLC同时测定苦豆子中槐定碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱的含量,并可用该方法进行苦豆子药材的质量控制。

Plackett-Burman与Box-Behnken试验设计优化苦豆子中氧化苦参碱提取工艺

目的:优选苦豆子中氧化苦参碱的最佳提取工艺。方法:通过单因素试验和Plackett-Burman试验设计确定各因素的最佳水平并筛选出关键因素,采用Box-Behnken响应面法优选氧化苦参碱的最佳提取工艺。结果:氧化苦参碱的最佳提取工艺为:料液比1∶25,提取时间60 min,浸提温度60℃,乙醇浓度60%,提取3次,氧化苦参碱的提取率可达80.83%。结论:利用该方法优化出的苦豆子氧化苦参碱的提取工艺稳定可靠,可为氧化苦参碱的开发利用提供参考。

苦豆子SaLDC密码子偏好性分析、优化及原核表达

目的研究苦豆子SaLDC密码子偏好性、优化及原核表达。方法运用EMBOSS在线程序中的CHIPS、CUSP和CodonW软件分析SaLDC密码子的偏好性,根据大肠杆菌密码子的偏好性对SaLDC密码子进行优化,并将优化后的基因命名为optSaLDC;构建重组表达载体pET⁃28a(+)⁃optSaLDC,转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导SaLDC蛋白表达,并对表达蛋白进行质谱分析。结果SaLDC有28个密码子的RSCU值>1.00,偏好使用以A/T结尾的密码子;SaLDC的密码子使用偏好性与拟南芥最接近,与大肠杆菌差别最大。优化后的optSaLDC在大肠杆菌中最佳表达条件为IPTG浓度1.0 mmol/L,诱导温度15℃,诱导时间16 h。LC⁃MS/MS鉴定诱导得到的SaLDC蛋白分子质量为48990.51 Da。结论诱导获得的optSaLDC纯化蛋白可用于后续体外SaLDC酶活性分析,为深入研究该基因的功能提供依据。

宁夏产苦豆子不同器官HPLC指纹图谱的分析研究

目的用HPLC指纹图谱的方式研究苦豆子不同器官中各生物碱的变化。方法采用HPLC检测方法,色谱柱Waters X-Brige C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.05 mol/L的磷酸二氢钾溶液(2.0ml/L三乙胺),进行梯度洗脱;检测波长为205 nm,进样量10μl,流速1.0 ml/min。结果 10批不同器官的苦豆子样品得到7个共有峰,通过与对照品比较,2、3、5、6、7号峰确定为野靛碱、槐定碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱。结论该指纹图谱的分析体现了不同器官的苦豆子样品所含各成分及各成分的含量变化较大。

Effects of Different Covering Ways on Emergence Rate of Sophora japonica L.Afforested by Direct Seeding

In order to maintain higher emergence rate with direct seeding in Shandong rocky mountain, effects of different covering ways on emergence rate of Sophora japonica L. direct seeding were studied. The results showed that both mulching film and grass cover could effectively increase the moisture content of the soil at the depth of 0-30 cm, contributing to soil moisture conservation and the inhibition of soil evaporation, which created favorable moisture environment for the growth of S. japonica seeds. Both the emergence rate and the seedling height under mulching film had greater improvement and partly enhanced by 26.65% and 6.85 cm respectively, and mulching film also helped S. japonica seeds emerge and ensured the seedling growth. The emergence rate and the seedling height under grass cover had been also raised in some degree, but they were much worse than those under mulching film. The emergence rate and the seedling height under block cover were not significantly increased. So when sowing S. japonica seeds in the spring, mulching film is the best covering way.

苦豆子在畜牧养殖中的开发与应用

苦豆子为豆科多年生草本植物,具有清热解毒、抗菌、抗病毒、消炎、止痛、抗肿瘤、杀虫等作用。许多研究者以苦豆子的不同化学成分转化为药理成分、畜禽饲料原材料等方式开发利用苦豆子资源。文章从苦豆子的生长特性、化学成分、应用价值以及其在畜牧养殖中的应用展开综述,以期为苦豆子资源在畜牧养殖业中的开发与利用提供参考。

苦豆子对脂多糖诱导的RAW 264.7细胞炎症的抗炎作用和机制研究

以RAW 264.7细胞为研究对象,探究苦豆子对脂多糖诱导的RAW 264.7细胞炎症的抗炎作用和机制。采用水煎煮、水超声、75%乙醇回流和75%乙醇超声分别制备苦豆子水煎煮提取物(water decocting extract,WDE)、水超声提取物(water ultrasonic extract,WUE),75%乙醇回流提取物(ethanol reflux extract,ERE)和75%乙醇超声提取物(ethanol ultrasonic extract,EUE),D101大孔树脂吸附法制备苦豆子总生物碱提取物(total alkaloids extract,TAE)和总黄酮提取物(total flavonoids extract,TFE),水提醇沉法制备苦豆子总多糖提取物(total polysaccharides extract,TPE),通过酸性染料比色法、NaNO 2-Al(NO 3)3-NaOH分光光度法、苯酚-硫酸法分别测定TA、TF和TP的含量,并采用正交法初步设计TAE、TFE和TPE 9种配伍组合(1∶1∶1、1∶2∶2、1∶3∶3、2∶1∶2、2∶2∶3、2∶3∶1、3∶1∶3、3∶2∶1、3∶3∶2),脂多糖(1μg/mL)诱导R AW 264.7细胞建立体外细胞炎症模型,利用细胞增殖检测试剂盒检测细胞活力,硝酸还原酶法检测一氧化氮的释放,酶联免疫吸附法检测细胞白介素-1β、白介素-6、肿瘤坏死因子-α的分泌,蛋白免疫印迹技术检测细胞p65 NF-κB、p-p65 NF-κB、IκBα、p-IκBα蛋白的表达。结果显示,TAE、TFE、TPE中TA、TF、TP的含量分别为94.79%、71.59%和73.51%。与模型组相比,WDE、WUE、E R E、EUE、TAE、TFE、TPE及其9种配伍组合显著降低了IL-1β、IL-6、TNF-α以及NO的释放,以TAE∶TFE∶TPE为2∶1∶2抑制效果最好,其极显著降低了IкBα和p65 NF-κB的磷酸化水平(P<0.01)。综上所述,苦豆子对脂多糖诱导的R AW 264.7细胞炎症具有一定的抗炎作用,以TAE∶TFE∶TPE为2∶1∶2抗炎效果最佳,其通过抑制NF-κB信号通路的激活及下游炎症介质的转录表达,缓解LPS诱导的R AW 264.7细胞的炎症反应。

苦豆子化学成分研究

通过硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、制备型高效液相等色谱方法分离纯化,采用NMR谱学技术鉴定其结构.从苦豆子中分离得到了16个化合物,分别鉴定为:咖啡酸(1)、阿魏酸(2)、咖啡酸乙酯(3)、羟基芫花素(4)、7,3′,4′-三羟基黄酮(5)、7,3′-二羟基-5′-羟甲基异黄酮(6)、7,3′,4′-三羟基异黄酮(7)、大豆苷元(8)、3′,4′-二羟基异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖(9)、赝靛黄素(10)、rothindin(11)、(-)-13,14-去氢槐定碱(12)、(-)-epibaptifoline(13)、槐定碱(14)、槐果碱(15)和氧化槐果碱(16).其中,化合物1~2、4~7、9~11、13为首次从该植物中分离得到.

模拟干旱和盐胁迫对苦豆子种子萌发的影响

为了探讨干旱和盐胁迫对苦豆子种子萌发的影响,本研究利用聚乙二醇(PEG-6000)和NaCl溶液分别模拟干旱和盐胁迫对苦豆子种子进行处理,测定种子的发芽率(Gp)、发芽势(Ge)、发芽指数(Gi)以及相对发芽势(RGe)和相对发芽指数(RGi)。结果表明,苦豆子种子的发芽率、发芽势和发芽指数均随PEG-6000和NaCl浓度的增加呈下降趋势;低浓度的PEG-6000(≤15%)干旱胁迫下,苦豆子种子的发芽率和发芽势均低于对照组,组间差异不显著(P>0.05),20%的PEG-6000干旱胁迫下苦豆子发芽率和发芽势显著低于对照组(P<0.05);不同浓度的PEG-6000干旱胁迫下,苦豆子发芽指数与对照组之间均存在显著差异(P<0.05);苦豆子种子在10%的PEG-6000干旱胁迫下的相对发芽势高于对照组,相对发芽指数高于任意处理组却低于对照组;15%和20%的PEG-6000干旱胁迫处理时,苦豆子种子的相对发芽势和相对发芽指数均随PEG-6000浓度的增大而降低。同样,利用不同浓度的NaCl胁迫处理苦豆子的种子,各组间发芽率均存在显著差异(P<0.05);与对照组相比,实验组种子发芽势和发芽指数均与其差异显著(P<0.05),但各实验组之间差异均不显著(P>0.05);苦豆子种子的相对发芽势和相对发芽指数均随NaCl浓度的增大而降低(低于对照组),当NaCl浓度超过0.3 mol/L时,苦豆子种子的相对发芽指数为0。研究结果为苦豆子耐旱和耐盐优异种质资源的筛选及引种栽培提供了参考依据。

苦豆子不同提取物的化学成分分析

目的比较苦豆子不同提取物中生物碱类、黄酮类和糖类等化学成分的差异。方法分别采用水煎煮、水超声、75%乙醇回流和75%乙醇超声制备苦豆子水煎煮提取物(water decocting extract,WDE)、水超声提取物(water ultrasonic extract,WUE),75%乙醇回流提取物(ethanol reflux extract,ERE)和75%乙醇超声提取物(ethanol ultrasonic extract,EUE),采用酸性染料比色法、NaNO2-Al(NO3)3-NaOH分光光度法、苯酚-硫酸法分别测定总生物碱、总黄酮和总多糖的含量,采用超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-QTOF-MS)对不同提取物中的成分进行分析。结果苦豆子WDE、WUE、EUE、ERE中总生物碱平均含量依次为EUE(27.84%)、ERE(24.31%)、WUE(23.21%)和WDE(15.59%),总黄酮平均含量依次为ERE(4.95%)、WUE(3.89%)、EUE(3.24%)和WDE(2.73%),总多糖平均含量依次为WDE(40.34%)、ERE(39.96%)、WUE(39.81%)和EUE(37.72%)。通过UPLC-QTOF-MS方法得到EUE、ERE、WUE、WDE中共有物质102种,含量在0.02%以上的物质83种,其中有蔗糖(sucrose)、蔗果三糖(1-kestose)糖类成分2种,烟酸(nicotinic acid)、5’-O-β-D-葡糖基吡哆醇(5’-O-beta-D-glucosylpyridoxine)维生素类2种,4-甲基七叶亭(4-Methyl-6,7-dihydroxycoumarin)、异补骨脂素(angelicin)、7-甲氧基香豆素(herniarin)、马栗树皮萃取(aesculetin)香豆素类4种,盐酸胡芦巴碱(trigonelline HCl)、胆碱(choline)、N-甲基野靛碱(caulophylline)等生物碱类8种,染料木苷(genistin)、金合欢素(acacetin)、维采宁-2(vicenin 2)等黄酮类42种,同时检测到ERE中特有物质黄芪苷(astragalin)、UDP-D-木糖(UDP-xylose),WUE中特有物质吡哆醛(pyridoxal)、金柑甘(fortunellin)以及ERE中缺少物质芸香柚皮苷(narirutin)、Β-玉米赤霉烯醇(beta-zearalenol),WUE中缺少物质芹苷元-7-葡萄糖苷(cosmosiin),WDE中缺少物质胡桃糖苷(hydrojuglone glucoside)、麦芽三糖(maltotriose)、4-氟苯胺(4-fluoroaniline)、Β-玉米赤霉烯醇(beta-zearalenol)。结论苦豆子不同提取物中化学成分存在一定的差异,可为苦豆子的深入研究提供参考。

不同预处理方式对苦豆子种子萌发及幼苗生长的影响

【目的】苦豆子(Sophora alopecuroides)是一种具有耐干旱、耐盐碱、抗风沙特性的豆科植物,是水土保持的优质植物资源,为提高苦豆子萌发效果,本文分析了两种打破种子休眠方式的交互处理方法对苦豆子种子萌发及幼苗生长的影响,为苦豆子植物资源利用提供科学依据。【方法】根据硫酸浸种和热水浸种两种常见的打破苦豆子种子休眠的方式,设计交互试验,统计发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数、鲜重、干重、含水率及幼苗生长相关指标。【结果】在20个处理组合中,65%×80℃处理和85%×20℃两种预处理方式在各指标方面均有较好表现。其中65%×80℃处理组在发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数方面均为20种处理中最高,85%×20℃处理组萌发效果次之。在萌发速率与幼苗生长中,65%×80℃、85%×20℃两组处理下种子萌发时滞较短、萌发速率较快,幼苗生长情况优于其他组别,并与0×20℃组差异显著。按浸种硫酸浓度分组,发芽效果由优到差为:85%>75%>65%>95%>0,80℃热水浸种20 min的处理效果优于其他温度浸种。【结论】65%×80℃、85%×20℃两种预处理方式对加速苦豆子种子萌发、促进幼苗生长具有较优效果。本研究可为苦豆子种子萌发、幼苗建植的相关研究及生产实践提供科学依据。

沙埋、干旱及盐碱胁迫对苦豆子种子萌发的影响

【目的】探究沙埋、干旱以及盐碱3种单因素胁迫如何影响苦豆子(Sophora alopecuroides)种子萌发特性,揭示3种胁迫在不同梯度变化下与苦豆子种子萌发特性的关系。【方法】以苦豆子为研究对象,首先将2种中性盐(NaCl、Na2SO4)和2种碱性盐(NaHCO3、Na2CO3)按一定摩尔比例分为A、B、C 3组进行混合,每组中碱性盐比例逐步提高,配置完成后,在每组处理内设置6个土壤含盐量水平,依次为:0(CK)、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%;干旱胁迫共设置5个梯度,按田间持水量百分比设置,分别为20%±5%、35%±5%、50%±5%、65%±5%、80%±5%;沙埋胁迫共设置4种沙埋深度,分别为0、2、4、6 cm。【结果】1)过深的沙埋会严重影响苦豆子种子萌发,6 cm的沙埋胁迫下无种子萌发,最适萌发条件为2 cm沙埋。2)干旱胁迫对苦豆子的发芽势有显著影响,但对发芽率和发芽指数无显著影响。3)中性、低碱性和高碱性3种盐碱类型对苦豆子萌发未见显著影响。4)苦豆子种子的发芽指数、发芽势和发芽率与沙埋深度和土壤含盐量呈显著负相关(P<0.05),但与土壤水分并无显著的相关性。【结论】苦豆子种子萌发受沙埋深度及土壤含盐量影响较大,沙埋深度以2 cm的轻度沙埋为宜,在水分条件较好的低盐碱土壤环境中苦豆子的种子萌发效果最佳。适当的胁迫条件能够对苦豆子种子萌发产生一定的积极作用,但需要注意合理控制胁迫程度,以期更好地发挥苦豆子作为生态修复植物所具有的生态和经济价值。

苦豆子药材提取过程中成分的量变规律研究

实验研究苦豆子药材提取过程中多种生物碱成分的量变规律。采用高效液相色谱法,以水作为提取溶媒,研究苦豆子药材在不同浸泡时间、不同提取时间和提取次数下提取液中7种生物碱成分量变规律。随着浸泡时间增加,氧化槐果碱、氧化苦参碱、槐定碱含量增加明显,在浸泡3 h达到最高,3 h后开始下降,浸泡时间不能超过3 h;随着提取时间的增加,除金雀花碱外其余6种生物碱在提取3 h的含量最高,提取时间不宜超过3 h;随着提取次数的增加,7种生物碱的量也在逐步增加,并逐步趋于稳定。表明苦豆子中生物碱类成分的含量,对提取工艺的各个因素比较敏感,7种生物碱成分的提取率与浸泡时间、提取时间呈先上升后下降的趋势,和提取次数呈正相关并随着提取次数的增加逐步趋于稳定,研究结果对苦豆子进一步研究提供参考。