5⁃羟色胺受体适配子的筛选及其抗抑郁功能

目的探索通过筛选获得的核酸适配子特异性结合5⁃羟色胺受体(5⁃HTR)从而阻断5⁃羟色胺(5⁃HT)摄取而达到拮抗抑郁的功效。方法小鼠5⁃HT_(1A)R基因被克隆、构建、表达并纯化后作为靶标,利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选能够特异性结合5⁃HT_(1A)R的ssDNA(单链脱氧核苷酸)适配子,并测定ssDNA的结合位点、相对结合力及识别位点;并在体外细胞水平和小鼠抑郁模型中验证ssDNA适配子对5⁃HT摄取的影响及抗抑郁的疗效。结果成功克隆构建了pET28a⁃5⁃HT_(1A)R质粒,质粒被转化入DH5ɑ细菌,IPTG诱导表达后通过6×组氨酸标签纯化5⁃HT_(1A)R蛋白;经肽指纹图谱分析其与小鼠5⁃HT_(1A)R蛋白一致;以此为靶标经过12轮的正向筛选和5轮的负向筛选,获得4个高亲和力和高特异性的适配子,且适配子能够识别相同位点。并在体外验证亲和力最高的18号适配子能够显著影响5⁃HT的摄取,且通过小鼠悬尾实验证明适配子静脉注射后对小鼠抑郁状态的改善。结论5⁃HTR适配子有望成为新型的抗抑郁药物,同时也为小分子拮抗剂的研究提供新思路。