虎纹捕鸟蛛毒的生物学活性鉴定

本文报道了采集广西产虎纹捕鸟蛛(Selenocosmia huwena)毒液的方法,并对粗毒进行了部分生物学活性的测定。该粗毒对小鼠和蜚蠊的LD_(50)分别为1.16mg/kg和300μg/g。该粗毒具有透明质酸酶、碱性磷酸酶、蛋白水解酶和脱氧核糖核酸酶活性。未测到磷脂酶A和胆碱脂酶活性。通过电生理实验发现该粗毒含有阻断蟾蜍神经肌肉接头传递的毒素,并观察到当小鼠接受腹腔注射致死剂量(5mg/kg)粗毒后便迅速出现呼吸麻痹。

虎纹捕鸟蛛毒素提取的研究

为探索提取广西产虎纹捕鸟蛛(Selenocosmia huwena)毒素的新方法,选取雌性虎纹捕鸟蛛225只,根据提取方法(直接咬软管法、直接咬瓶法、激怒咬渐法激怒咬瓶冲洗法)分为4组,结果表明,采用直接咬软管法提取虎纹捕鸟蛛毒素,平均每只蜘蛛可以获得冻干毒素2.28 mg,与采用直接咬瓶法所获得的2.19 mg没有显著差异(P>0.05)。采用激怒咬瓶冲洗法提取虎纹捕鸟蛛毒素,平均每只蜘蛛可以获得冻干毒素重量明显高于激怒咬瓶法[(3.41±0.40)mg,(2.99±0.35)mg,P<0.05],亦明显高于直接咬软管法和直接咬瓶法。该试验结果表明,激怒咬瓶冲洗法是一种提取虎纹捕鸟蛛毒素的有效方法。

虎纹捕鸟蛛毒素的提取及毒力的测定

报道了提取广西产虎纹捕鸟蛛 (Selenocosm ia huw ena) 毒素的方法。用冻干蛛毒对小鼠进行腹腔注射, 测定出虎纹捕鸟蛛毒素的LD50 为0.77 m g/kg, LD50的95% 可信限为0.72～0.82 m g/kg, 表明该毒素有很强的毒力。并观察到当用0.30 m g/kg 冻干蛛毒注射小鼠颅内时, 小鼠迅速抽搐5

虎纹捕鸟蛛(蜘蛛目:狒蛛科:捕鸟蛛亚科)的分类研究

研究了狒蛛科 (Theraphosidae)虎纹捕鸟蛛SelenocosmiahuwenaWangetal.,1993的分类地位 ,认为该种应隶属于捕鸟蛛亚科OrnithoctoninaePocock,1895的捕鸟蛛属OrnithoctonusPocock,1892。对虎纹捕鸟蛛Ornithoctonushuwena(Wangetal.,1993)

雌性和雄性虎纹捕鸟蛛粗毒蛋白质含量比较分析

自然界虎纹捕鸟蛛雌蛛数量远多于雄蛛数量,为了探究雌、雄蛛粗毒的差异,用不同方法比较了单个虎纹捕鸟蛛雌、雄蛛粗毒的特征.雌蛛单次螫毒量为(26.5±2.47)μL,冻干后粗毒质量为(5.01±0.78)mg,明显高于雄蛛单次螫毒量(10.83±1.35)μL,冻干后粗毒质量(2.05±0.17)mg;用Lowry法和Bradford法测定雌蛛和雄蛛粗毒的蛋白质含量,两种方法均表明雄蛛粗毒中蛋白含量高于雌蛛.用反相高效液相色谱分离雌蛛和雄蛛粗毒蛋白,并215 nm检测色谱图,发现大部分洗脱峰重叠,而雄蛛色谱图中多两个主峰.Tricine SDS-PAGE电泳分析表明雌蛛粗毒相对分子质量小于10 kD的蛋白质含量较高;而Tris SDS-PAGE电泳分析表明雌蛛粗毒相对分子质量大于10 kD的蛋白质含量较低,基于雌蛛和雄蛛粗毒蛋白含量的差异,有必要对虎纹捕鸟蛛雌、雄蛛粗毒进行独立研究.

病态虎纹捕鸟蛛器官元素特点分析

采用火焰原子吸收分光光度计,对不同病症的虎纹捕鸟蛛Selenocosmiahuwena(Wangetal.,1993)的4种器官组织中的6种元素(铁(Fe)、铜(Cu)、锌(Zn)、锰(Mn)、镁(Mg)、钙(Ca))的含量进行了测定。结果表明:这6种元素在病症蜘蛛中的含量与正常蜘蛛相比均有很大差异。本文首次从元素的缺乏或过多积累方面分析了蜘蛛的致病原因。为其人工繁育、开发利用和资源保护提供基础资料。

虎纹捕鸟蛛毒素的抗菌活性探讨

从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离得到 2种多肽毒素 ,huwentoxin -Ⅰ和huwentoxin -Ⅱ。抗菌实验结果表明 ,这 2种多肽毒素能抑制革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及啤酒酵母菌的生长 。

虎纹捕鸟蛛卵巢发育的组织学

根据卵巢的组织学和形态特征分析,虎纹捕鸟蛛的卵巢为若干由生殖上皮向卵巢腔内突起的卵巢小体构成.在卵细胞发育过程中,一直有滋养细胞形成的托柄向其供应养分.卵巢发育可分为5个时期:形成期、生长期、成熟期、排卵期和恢复期.在生殖季节里可多次产卵,为多次产卵类型.卵巢的大小重量与蛛体重量成正相关,而成熟的蜘蛛性腺指数仅随卵细胞的发育而变化,不随蛛体大小改变.

虎纹捕鸟蛛毒液中透明质酸酶的纯化和部分性质的研究

用分子筛（岛津ＤＩＯＬ－１５０柱）和阳离子交换（岛津ＷＣＸ－１柱）高效液相色谱从虎纹捕鸟蛛（Ｓｅｌｅｎｏｃｏｓｍｉａｈｕｗｅｎａ）毒液中分离提纯透明质酸酶（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ，ＥＣ３．２．１．３５）．经等电聚焦电泳为一条带，ｐＩ＝７．２．经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为４０ｋＤ，经凝胶过滤测得分子量为４０．７ｋＤ。以透明质酸为底物时在ｐＨ３．５─５．５范围内有较大活性，最适ｐＨ值为４．０；在ｐＨ４．５─６．０范围内稳定，在反应温度为３０─６０℃时有较大活性，最适温度为５０℃；对热稳定，０．１５ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ对酶活性有一定的稳定作用．３％的肝素、５００μｍｏｌ／Ｌ的Ｈｇ^（２＋）、Ｆｅ^（２＋）、Ｃｕ^（２＋）对酶活性有明显的抑制作用。

虎纹捕鸟蛛雄蛛的修订(蜘蛛目:捕鸟蛛科)

修订了王家福等所订虎纹捕鸟蛛Selenocosmia huwena Wang et al., 1993的雄蛛,并将近期所采得的该种雄蛛作了重新描述。

虎纹捕鸟蛛凝集素-I(SHL-I)的核磁共振氢谱谱峰的完全归属

描述了从虎纹捕鸟蛛毒液分离的凝集素ＳＨＬ－Ｉ的核磁共振氢谱谱峰的完全归属。通过分析二维ＤＱＦ－ＣＯＳＹ，ＣＯＳＹ，ＴＯＣＳＹ和ＮＯＥＳＹ谱，鉴别出全部３２个氨基酸残基自旋体系。然后由ＣＯＳＹ，ＮＯＥＳＹ谱指纹区的ｄαＮ连系推测出序列专一归属，并得到了ＴＯＣＳＹ和ＮＯＥＳＹ谱中ｄαＮ，ｄＮＮ的验证。从而明确分辨了除Ｃｙｓ２外所有主链质子和大于９６％的侧链质子。这一结果为最终确定ＳＨＬ－Ｉ的溶液构象奠定了基础。

虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅵ的分离纯化与鉴定

通过离子交换及反相HPLC ,从虎纹捕鸟蛛毒液中分离得到 1种新的哺乳类神经毒素 ,命名为虎纹捕鸟蛛毒素 -Ⅵ (Huwentoxin Ⅵ ,HWTX Ⅵ )。MALDI TOF质谱仪分析及氨基酸序列分析表明该多肽毒素分子量为 4 44 0 18kDa。序列为H2 N CIGEGVPCDENDPRCCSGLVVLKKTLHGIWIKSSYCYKCK COOH。其中 6个Cys形成 3对二硫键。小鼠脑内注射实验表明 ,HWTX Ⅵ对神经系统具有明显的致瘫作用 ,这种致瘫作用又具有可逆性。

广西虎纹捕鸟蛛毒成分的氨基酸测定及红外光谱定性分析

目的通过质量分析的方法初步鉴定蛛毒的毒素化学成分。方法采用氨基酸自动分析仪对蛛毒的多种氨基酸成分进行定性及定量的研究,并且辅以红外光谱法进行定性研究。结果通过氨基酸测定法从虎纹捕鸟蛛中鉴定到谷氨酸、胱氨酸、赖氨酸含量较多,分别为8.15%、7.86%、7.64%,氨基酸总量为55.93%;从样品粉末的红外光谱可知:该化合物可能含-C-H,-OH,NH,-CO-N-H,苯环等主要氨基酸基团。结论结果表明该鉴别方法操作简便、专属性强,可用于蛛毒的定性鉴别和含量测定,初步建立了虎纹蛛毒成分的定性鉴定研究方法。

虎纹捕鸟蛛的饲养与繁殖技术

本文简要介绍饲养、繁殖虎纹捕鸟蛛的技术，包括它的形态特征、生活习性、食物种类及饲养器具等，并介绍了在饲养和繁殖中应注意的一些问题。

虎纹捕鸟蛛毒腺cDNA文库的构建

从 2 5只虎纹捕鸟蛛 (Selenocosmia huwena)中得到约 0 .6g左右的毒腺 ,从中提取出5μg m RNA.以此 m RNA为模板 ,经反转录合成双链 c DNA.再经包装成 c DNA文库 .文库的滴度达到 3.2× 1 0 7pfu/m

虎纹捕鸟蛛雌蛛粗毒的毛细管区带电泳分离分析

采用毛细管区带电泳（ＣａｐｉｌａｒｙＺｏｎｅＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，简称ＣＺＥ）模式，以虎纹捕鸟蛛（Ｓｅｌｅｎｏｃｏｓｍｉａｈｕｗｅｎａ）雌蛛粗毒为样品进行电泳分离分析．对电泳缓冲溶液的ｐＨ、浓度以及有机试剂和两性离子添加剂的加入对粗毒分离的影响作了研究．结果表明，粗毒在ｐＨ１１．５，７５ｍｍｏｌ／Ｌ的磷酸盐缓冲液中可以得到最佳的分离．两性离子添加剂（三甲基氨基丙磺酸）能明显改善分离效果；并在实验中确定了虎纹毒素－Ｉ（Ｈｕｗｅｎｔｏｘｉｎ－Ｉ，简称ＨＷＴＸ－Ｉ）和虎纹凝集素－Ｉ（Ｓｅ－ｌｅｎｏｃｏｓｍｉａｈｕｗｅｎａｌｅｃｔｉｎ－ｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅ－Ｉ，简称ＳＨＬＰ－Ｉ）在粗毒电泳图谱中的位置．

广西虎纹捕鸟蛛毒的研究概况

在各种蜘蛛毒素中发现有多种酶类以及对哺乳动物,昆虫神经系统有选择性作用的一些神经毒素。虎纹捕鸟蛛是在云南、广西一带发现的一个捕鸟蛛科新种,其粗毒中主要含有HWTX-Ⅰ,HWTX-Ⅱ,HWTX-Ⅴ,HWTX-Ⅺ等几种神经毒素,还有一些多肽类(毒液的主要成分都为相对分子质量2×103～9×103的多肽)、蛋白质和低相对分子质量物质所构成的复杂混合物,具有多种活性及生理作用,在治疗癫痫病、癌症、脑溢血、神经肌肉疼痛等方面有着广泛应用前景,作者对虎纹捕鸟蛛的来源、毒性成分及其应用、毒性成分的药理及研究展望进行了文献整理。

广西虎纹捕鸟蛛毒诱导U251胶质瘤细胞凋亡及Caspase-3的激活

目的:探讨虎纹捕鸟蛛毒抑制体外脑胶质瘤细胞系U251生长并诱导其凋亡,激活半胱天冬酶-3(Caspase-3)的作用。方法:将U251细胞分为3组:空白组、顺铂组、加药组(虎纹捕鸟蛛毒素浓度为37.5,50,75,100,150 mg·L-1),毒素作用24,48 h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性并与顺铂组、空白组做对比;流式细胞仪AnnexinV-FITC检测细胞凋亡率;Caspase-3分光光度法检测Caspase-3的相对活性。结果:虎纹捕鸟蛛毒素剂量为37.5,50,75,100,150 mg·L-1时,对U251细胞的增殖有显著性抑制作用(P<0.05或P<0.01),IC50为53.48 mg·L-1。虎纹捕鸟蛛毒素可诱导U251胶质瘤细胞凋亡并呈浓度依赖关系。在剂量为150 mg·L-1诱导48 h,细胞早期凋亡率84.1%,晚期凋亡率4.48%。用不同浓度分别处理细胞,Caspase-3活性于48 h,150 mg·L-1时达高峰,对细胞中的执行分子Caspase-3的激活速度快,活化程度为9.23,并存在剂量依赖关系和浓度依赖性的升高。结论:虎纹捕鸟蛛毒素明显抑制U251细胞生长并诱导其发生凋亡,凋亡过程中有Caspase-3的激活。

广西虎纹捕鸟蜘蛛毒素对胶质瘤细胞株U251增殖抑制作用的研究

目的探讨广西虎纹捕鸟蜘蛛毒素对胶质瘤细胞株U251增殖抑制作用，并初步阐明其作用机制。方法以含lO％胎牛血清RPMI1640培养液湿化孵育培养U251细胞，采用MTT法通过抑制率评价蜘蛛毒素对胶质瘤细胞的细胞毒作用，应用倒置相差显微镜及HE染色观察细胞形态及细胞核变化，采用TUNEL法检测蜘蛛毒素对U251细胞凋亡的影响。结果蜘蛛毒素能够抑制胶质瘤细胞株U251的增殖．其48h及72h的半量抑制浓度为82．60μg／mL和71．12μg／mL，且呈明显的量效及时效关系。HE染色观察到胶质瘤细胞核固缩、碎裂的凋亡征象。TUNEL法染色可见凋亡的胶质瘤细胞核染成棕黄色。结论广西虎纹捕鸟蜘蛛毒素能够抑制胶质瘤细胞U251增殖，其抑制作用可能是通过诱导胶质瘤细胞凋亡实现。