A self-assembly/disassembly two-photo ratiometric fluorogenic probe for bacteria imaging

Fluorescence imaging has facilitated fluorescent probes to analyze the subcellular localization and dynamics of biological targets. In this paper, we reported a fluorogenic probe for bacteria imaging. The probe was an imidazolium-derived pyrene compound, which self-assembled to form nano-particles and the pyrene fluorescence was quenched by the aggregation effects. When the self-assembly nanoparticles interacted with anionic bacteria surfaces, synergistic effects of electrostatic interaction and hydrophobic force caused competing binding between bacteria surfaces and imidazoliums. This binding resulted in the disassembly of the aggregates to give fluorescence turn-on signal. Meanwhile, the probe bound bacteria surfaces and displayed both pyrene-excimer and pyrene-monomer fluorescence, which gave ratiometric signal. Then, fluorescent labeling by the probe enabled the two-photo ratiometric imaging of bacteria.

基于自淬灭探针的LAMP可视化快速检测方法

该研究拟筛选与自淬灭探针互补的寡核苷酸序列,利用双链DNA的荧光超淬灭机制,构建可视化反应体系,从而实现基于自淬灭探针的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)可视化快速检测。结果表明:添加与自淬灭探针完全互补的寡核苷酸序列,体系的背景荧光强度会出现显著下降(P<0.05)。当熔解温度(melting temperature,Tm)值高于室温时,缩短互补序列的长度(从3'端)不会影响其淬灭作用。基于互补序列的荧光超淬灭机制构建的LAMP可视化反应体系能够有效降低背景荧光,反应结束后表现出易于读取的可视化结果,并成功用于虹鳟鱼的快速检测。综上,合适的互补序列能够降低自淬灭探针的背景荧光,利用该互补序列和自淬灭探针建立低背景荧光的LAMP体系能够在可视化检测中表现出适用性。

自猝灭荧光探针法测定DNA

This paper describes a new fluorescence probe technique for the determination ofDNA, which is based on a self-quenching course of high concentration of o-hydroxybenzoicacid or o-aminobenzoic acid. Studies involving calf thymus (CT) DNA, salmon (SM) DNAand herring sperm(HS) DNA revealed that the differential value of fluorescence intensity inthe presence and absence of nucleic acid was proportional to the concentration of nucleic overthe range of about 15ng/mL^6.0μg/mL.

自身淬灭探针荧光定量PCR检测淋病奈瑟菌

目的利用自身淬灭探针技术建立敏感、特异、快速、价廉且能广泛应用的淋病奈瑟菌荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒pGEM-11Zf-CPPB作为标准品,自行设计自身淬灭探针,建立、优化定量PCR体系,并进行方法学评价及临床应用。结果所建立方法的线性检测范围为101～109拷贝/μL,灵敏度为10拷贝/μL,特异性为100%。天间变异系数(CV)为2.38%,批内CV为1.32%,批间CV为2.75%。该方法比培养方法更快速、灵敏。结论以自身淬灭探针技术为平台的淋病奈瑟菌荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,对淋病的早期快速诊断有较高价值。

自身猝灭探针定量PCR检测HCV方法的建立

目的建立自身猝灭荧光探针定量PCR技术检测HCV方法。方法构建重组质粒pMD18-T-HCV5′NCR作为标准品，并通过Sigma在线软件设计自身猝灭探针，优化定量PCR体系，并进行方法学评价。结果建立了自身猝灭荧光探针的定量PCR方法，线性为10^1-10^10copies／μl；灵敏度达50copies／μl；批内CV为6．1％，批间CV为6．5％，日间CV为6．8％；特异性为100％，与其他肝炎病毒无交叉反应。与紫外定量方法比较，结果差异无显著性，且高度相关。结论以自身猝灭荧光探针建立的HCV荧光定量PCR检测方法，灵敏度高、特异性强，为新型试剂盒的开发奠定了基础。

新型荧光定量PCR检测孕妇生殖道解脲脲原体方法的建立

目的 探讨建立自身淬灭探针荧光定量PCR方法检测解脲脲屏体（Uu）的可行性及价值。方法 根据Uu UreA基因序列设计合成引物和自身淬灭引物，采用基因克隆技术，将UreA基因片段插入到载体pMD18-T，以此作为标准品。优化PCR条件，建立以自身淬灭引物技术为平台的实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法，并对所建立的方法进行初步方法学评价。结果 成功构建了重组质粒pMD18-T-UreA；建立了以自身淬灭探针技术为基础的实时荧光定量PCR方法，其线性检测范围为10^1～10^9copies／μl；灵敏度为10copies／μl；重复性实验批内CV为2．35％，批间CV为3．68％，天间CV为4．92％；特异性好；通过初步临床应用发现，所建立的FQ-PCR方法与经典的培养方法相比，不仅能实时监测反应进程、绝对定量和快速检测，且检出率显著高于培养方法。结论自身淬灭探针荧光定量PCR方法检测Uu具有快捷、敏感、廉价等优点，可在临床诊断中应用。

含取代基的金属酞菁的合成与光伏效应

合成了含取代基的酞菁铜，如十六氯酞菁铜、十六氢酞菁铜、四硝基酞菁铜及四氨基酞菁铜等．测定了这些衍生物在铂电极上和砷化镓电极上的光伏效应．结果表明含拉电子取代基的酞菁铜比含推电子取代基的酞菁铜的光伏效应大．

自身淬灭探针荧光定量PCR检测BK多瘤病毒方法的建立与评价

目的利用自身淬灭探针技术建立一种敏感、特异、快速、价廉的BK多瘤病毒（BKV）荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒pGEM-11Zf-BK作为标准品，自行设计自身淬灭探针，优化定量PCR体系，并进行方法学评价及初步临床应用。结果成功构建了重组质粒pGEM-11Zf-BK，建立自身淬灭探针荧光定量PCR方法，其线性检测范围为10^3～10^9拷贝／ml；灵敏度为1000拷贝／ml；重复性：高拷贝样品的天间CV为3．06％，批内CV为1．49％，批间CV为3．27％；低拷贝样品的天间CV为2．55％，批内CV为0．65％，批间CV为3．36o．4，特异性为100．00％；用该方法检测52例肾移植受者的血、尿标本，结果发现肾移植受者血、尿BKVDNA的阳性率明显高于健康对照者，分别为15．38％、32．69％，尿BKVDNA的载量明显高于血BKVDNA的载量（P〈0．05）。结论首次建立了以自身淬灭探针技术为平台的BKV荧光定量PCR检测方法，该方法灵敏、特异，快速；该研究对应用自身淬灭探针技术开发其他病原体检测试剂有一定的参考价值。

结核分枝杆菌自身淬灭探针荧光定量PCR检测方法的建立

目的利用自身淬灭探针技术建立敏感、特异、快速、价廉且能广泛应用的结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒PET-32a(+)-16s rRNA作为标准品,自行设计自身淬灭探针,建立、优化定量PCR体系,并进行方法学评价及临床应用。结果所建立方法的线性检测范围为102～109copies/μL,灵敏度为1copy/μL,特异性为100%。高拷贝样品的天间CV为2.65%、批内CV为1.86%,低拷贝样品的天间CV为2.12%、批内CV为0.78%。该方法比培养方法更快速、灵敏。结论以自身淬灭探针技术为平台的结核分枝杆菌荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,对结核病的早期快速诊断有较高价值。

自身淬灭荧光定量PCR检测慢性粒细胞白血病bcr/abl mRNA

目的利用自身淬灭探针技术建立一种能检测慢性粒细胞白血病（CML）bcr／abl融合基因mRNA的实时荧光定量PCR方法，为CML的诊断、疗效观察以及微量残留白血病（MRD）的监测提供有效手段。方法用逆转录PCR方法（RT—PCR）扩增K562细胞的bcr／abl融合基因，A-T克隆法构建定量标准模板；设计自身淬灭荧光引物（探针），建立自身淬灭荧光定量逆转录PCR方法（FQ—RT—PCR），并对该方法的线性检测范围、灵敏度、重复性、稳定性进行检测；然后检测临床白血病患者骨髓标本bcr／abl mRNA。结果建立的FQ—RT—PCR方法可检测10copies／μl的bcr／abl重组质粒，并能从10^5个正常细胞中检出1个白血病细胞，该方法的批内、批间变异系数（CV）分别为2．1％、6．1％，线性检测范围为10^2-10^9copies／μl。25例CML患者bcr／abl融合基因mRNA表达量中位数为4．50×10^4[（0．45—89．00）×10^4]copies／μg RNA，其中11例慢性期初诊患者bcr／abl mRNA表达量中位数为5．45×10^4[（2．95—19．30）×10^4]copies／μg RNA，6例急变期患者bcr／abl mRNA表达量中位数为13．00×10^4[（4．10～89．00）×10^4]copies／μg RNA，8例慢性期治疗后复查患者bcr／abl mRNA表达量中位数为2．35×10^4[（0．45—5．12）×10^4]copies／μg RNA，CML急变期患者bcr／abl融合基因表达水平与慢性期患者之间差异有统计学意义（q=3．41，P〈0．05）。PCR产物经电泳分析，其中21例CML患者为b3a2型，4例CML患者为b2a2型；3例急性淋巴细胞白血病（ALL）患者中，1例有bcr／abl mRNA表达，为b2a2型。结论所建立的基于自身淬灭探针技术的实时荧光定量PCR检测方法灵敏、特异、重复性好，结果用拷贝数表示，准确可靠，利于标准统一。可广泛用于CML的诊断、疗效观察以及MRD的监测。