基于GEO和分子对接的荔枝核黄酮类化合物治疗冠状病毒肺炎机理研究和3CLpro抑制剂虚拟筛选

挖掘冠状病毒感染肺炎的潜在靶基因,以及筛选荔枝核中抑制冠状病毒3CL蛋白酶(3CLpro)的黄酮类化合物.利用GEO数据库下载SARS-CoV感染的小鼠肺炎的基因集,利用R语言筛选差异表达基因.通过文献筛选荔枝核的黄酮类化合物,采用SWISS数据库、DRAR-CPI服务器预测化合物潜在作用靶点.使用String数据库构建成分靶点-疾病靶点互作网络,通过Cytoscape的cytoHubba插件筛选核心靶点.通过DAVID进行GO和KEGG分析,预测冠状病毒感染肺炎的发病机制及荔枝核黄酮类化合物的作用机制.借助分子对接虚拟筛选治疗冠状病毒感染肺炎的黄酮类化合物.筛选得到761个差异基因作为冠状病毒感染肺炎的潜在关键基因,其中上调757个,下调4个,它们主要富集在单纯疱疹感染、PI3K-Akt信号通路、甲型流感、炎症免疫等信号通路.荔枝核中19个黄酮类化合物可作用于380个靶点,在成分靶点-疾病靶点互作网络中挖掘得到100个核心靶点,它们参与调控PI3K-Akt、HIF-1等多条信号通路.分子对接结果显示,柚皮芸香苷、柚皮苷、原花青素A2、原花青素、芦丁5个黄酮类化合物与3CLpro抑制剂位点的亲和力均高于阳性对照药利托那韦、达鲁纳韦.冠状病毒感染肺炎可能与PI3K-Akt信号通路、甲型流感、炎症免疫等信号通路异常有关.荔枝核中黄酮类化合物可通过作用于PI3K-Akt、TNF、HIF-1等多条信号通路,发挥抗炎和抗纤维化作用,其中柚皮芸香苷、柚皮苷、原花青素A2、原花青素、芦丁5个黄酮类化合物还可能是3CLpro的抑制剂.荔枝核黄酮类化合物具有治疗冠状病毒感染肺炎及后期引起的肺纤维化的潜力.

荔枝核拮抗2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗作用的药理学机制

目的 :研究荔枝核水提取物 (waterextractfromSemenLitchi ,以下简称荔枝核 )改善 2型糖尿病大鼠(T2DM)胰岛素抵抗 (IR)的药理学机制。方法 :采用T2DR IR模型 ,观察荔枝核对T2DM IR大鼠空腹血清血糖(FSG)、总胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)、游离脂肪酸 (FFA)、血清尿素氮 (BUN)、肌酐 (Cr)、总蛋白 (TP)、白蛋白 (A)、丙二醛 (MDA)、瘦素 (leptin)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)、胰岛素 (Fins)含量及胰岛素敏感指数 (ISI) ,以及丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、超氧化物歧化酶 (SOD)活性等指标的影响。结果 :荔枝核能显著降低T2DM IR大鼠FSG、TC、TG、FFA、leptin和TNF α含量及高胰岛素血症 (P <0 0 5～ 0 0 1) ,显著提高ISI(P <0 0 1) ,增强胰岛素敏感性 ;加强SOD活性和降低MDA的含量 (P <0 0 1) ,增强抗氧化能力 ;降低ALT、AST活性和BUN、Cr含量 ,提高TP、A含量 (P <0 0 5～ 0 0 1) ,改善肝肾功能。结论 :荔枝核能调整T2DM IR大鼠Lept和TNF α含量及高胰岛素血症 ,拮抗IR ,改善胰岛素敏感性 ,调节糖脂代谢紊乱 ,增强抗氧化作用 。

响应面分析法优化荔枝核总黄酮提取工艺的研究

利用响应面分析法优化荔枝核总黄酮提取工艺。以提取时间,提取温度及乙醇浓度为响应因子,总黄酮提取得率为响应值,做三因素三水平响应面分析,经方差分析响应面模型与验证模型二者差异不显著。

荔枝核总皂苷体外抗乙型肝炎病毒的作用

目的:观察荔枝核总皂苷体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用.方法:以HepG2.2.15细胞为靶细胞,分别用不同浓度的荔枝核总皂苷和拉米夫定培养液培养,采用ELISA法及荧光定量PCR法测定细胞培养上清HBsAg,HBeAg及细胞外HBVDNA含量,评价荔枝核总皂苷对体外HBV的抑制作用.结果:荔枝核总皂苷对体外培养HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg,HBeAg及细胞外HBVDNA的50%抑制浓度(IC50)分别为0.096,0.085和0.128g/L,治疗指数(TI)分别为6.98,7.88和5.23.0.25g/L拉米夫定组和0.4g/L荔枝核总皂苷组在d3,d6对体外培养HepG2.2.15细胞分泌的HB-sAg,HBeAg及细胞外HBVDNA的抑制作用差异无统计学意义(P>0.05).结论:荔枝核总皂苷具有一定的体外抗HBV作用.

荔枝核黄酮类化合物对HepG2.2.15细胞系HBsAg与HBeAg表达及HBVDNA含量的影响

目的 :研究荔枝核提取物 黄酮类化合物 (IL)对乙肝病毒的抑制作用 .方法 :应用光密度测定法和细胞培养及定量PCR技术研究荔枝核提取物IL对HepG2 .2 .15细胞系HBsAg与HBeAg表达及HBV DNA含量的影响 .结果 :96孔板试验 :实验第 3,6日 ,IL对HBsAg和HBeAg表达均有明显的抑制作用 (与对照组比较P <0 .0 1) .2 4孔板试验 :实验第 3,6 ,9日IL对HBsAg表达有明显的抑制作用 (与对照组比较P<0 .0 1) ;实验第 6 ,9日IL对HBeAg表达有明显的抑制作用(与对照组比较P <0 .0 1) ;同时采用定量PCR方法检测 ,IL(4 0 0mg/L )可使培养基中的HBV DNA转阴 .结论 :IL体外实验 (培养细胞 )有较强的抗乙肝病毒作用 .

荔枝核黄酮类化合物体外抗呼吸道合胞病毒的作用

目的:探讨荔枝核黄酮类化合物体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用.方法:采用细胞培养技术,以病毒唑为阳性对照,观察比较荔枝核黄酮类化合物对RSV引起的细胞病变(CPE)的抑制作用.结果:荔枝核黄酮类化合物半数中毒浓度(TC50)为152.9mg/L,其抗RSV的半数有效浓度(IC50)为58.6mg/L,治疗指数(TI)为2.6,体外抗RSV作用与病毒唑相当,且对RSV抑制作用存在明显的量效关系.结论:荔枝核黄酮类化合物在Hep-2细胞中对呼吸道合胞病毒有抑制作用.

荔枝核含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨荔枝核含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用血清药理学方法制备荔枝核、环磷酰胺含药血清以及对照血清,作用于HepG2细胞,MTT法检测各种血清对HepG2细胞增殖的影响,Hochest33258荧光染色观察细胞凋亡,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率。结果:荔枝核含药血清处理HepG2细胞后,呈剂量依赖性抑制肿瘤细胞增殖活性;并出现细胞核浓染与核碎裂;流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率明显高于对照组。结论:荔枝核含药血清能抑制人肝癌HepG2细胞增殖,其机制可能与诱导HepG2细胞凋亡有关。

荔枝核-PVA多孔复合固体碳源在养殖废水中的脱氮研究

将不同粒径荔枝核、聚乙烯醇(PVA)和海藻酸钠复合获得多孔固体碳源,对复合碳源的微观形貌、孔隙结构进行表征,并在人工配制的工厂化循环养殖废水中考察了其作为反硝化碳源的释碳速率及脱氮效果。结果表明,扫描电镜显示粒径250μm复合碳源的外表面致密,孔隙较少,而含粒径150μm和粒径75μm荔枝核的复合碳源外表面孔隙较多,内部孔隙发达。脱氮过程中,粒径75μm复合碳源的硝酸盐去除率在第3天可达到100%,无亚硝酸盐积累。粒径150μm复合碳源NO_3^--N去除率逐渐上升至94.71%,NO_2^--N质量浓度则逐渐降低至0.74 mg/L。粒径250μm复合碳源脱氮效果较差,NO_3^--N去除率为30%。粒径75μm和粒径150μm复合碳源孔隙发达,碳源释碳能力强,短时间内硝酸盐去除率高,可作为海水养殖废水反硝化脱氮的固体碳源填料。

荔枝核中活性成分的提取及抗氧化活力研究

对荔枝核中活性成分的提取工艺及提取物抗氧化活性进行了研究.结果表明:荔枝核粉碎过40目筛,以5倍(V/W)70%的丙酮溶液于45℃下浸提2次,每次3 h,浸提液回收溶剂后经AB-8大孔树脂柱层析吸附,用60%乙醇溶液常温洗脱,洗脱速率3 BV/h,洗脱液浓缩、冻干,得荔枝核提取物,得率为11.38%.荔枝核提取物中皂甙含量为61.90%,多酚含量为27.31%;提取物清除DPPH的IC50值为5.1 mg/L,总抗氧化活力为62.81 U/mg.

转化生长因子-β1和骨桥蛋白在肝纤维化大鼠肝组织的表达及荔枝核总黄酮的干预

目的:观察荔枝核总黄酮(total flavone of litchi chinensis sonn,TFL)对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达的影响。方法:雄性SD大鼠80只,随机分为假手术组,模型组,TFL大、小剂量组。采用胆总管结扎术制备肝纤维化大鼠模型。术后第4周处死大鼠,放免法检测血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)的水平。HE和Masson染色观察肝组织学变化及纤维化程度;免疫组化观察肝组织TGF-β1和OPN的染色部位及强度。结果:TFL大剂量组血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平以及肝组织TGF-β1、OPN的表达水平均低于模型组和TFL小剂量组,差异具有统计学意义(P<0.05),假手术组和TFL大剂量组间以及模型组和TFL小剂量组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:大剂量TFL可减轻胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝损伤及有效改善肝纤维化程度;抑制TGF-β1、OPN高表达,从而减少细胞外基质(ECM)的分泌可能是其抗肝纤维化的机制之一。

荔枝核乙酸乙酯部位化学成分研究

目的:研究荔枝核乙酸乙酯部位的化学成分。方法:利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、制备薄层等方法分离纯化,通过理化性质和波谱分析方法进行结构鉴定。结果:从荔枝核乙醇提取物的乙酸乙酯部位分离得到5个化合物,分别鉴定为:豆甾醇(1)、对羟基苯甲醛(2)、原儿茶酸(3)、胡萝卜苷(4)和山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)。结论:其中,化合物2、5为首次从该植物中分离得到。

荔枝核中原花青素超声波提取工艺研究

[目的]优化超声波细胞粉碎机提取荔枝核中(SEMEN LITCHI)原花青素的工艺条件。[方法]以荔枝核为原料,考察提取溶剂、乙醇体积分数、pH值、料液比、超声波功率、提取时间、提取次数及荔枝核粉末粒径对原花青素得率的影响;在此基础上,用正交试验优化超声波提取荔枝核中原花青素的最佳工艺条件。[结果]采用超声波提取荔枝核中原花青素的最佳工艺条件为:粉末粒径100目,料液比1∶8(W/V),乙醇体积分数70%,pH值5.0,超声波功率600 W,提取时间30 m in,提取1次。各因素影响原花青素提取效果的主次顺序是:提取时间>粉末粒径>料液比>超声波功率。采用最佳试验组合提取荔枝核中原花青素,得率为13.11%。[结论]该研究可为荔枝核中原花青素和食品色素的有效利用提供借鉴。

荔枝核提取物对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织巨噬细胞移动抑制因子表达的影响

目的:观察荔枝核提取物对实验性非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠的防护作用,以及对肝组织巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的影响。方法:35只Wistar大鼠随机分为对照组(5只)、模型组(10只)、低剂量(10只)和高剂量荔枝核提取物组(10只)。除对照组外,其余各组均以脂肪乳剂(添加脂肪肝诱导药物丙基硫氧嘧啶)灌胃,另外低、高剂量荔枝核提取物组大鼠以荔枝核提取物溶液(250mg/kg、500mg/kg)灌胃。第6周末处死全部大鼠,进行肝脏组织学和免疫组化检测,对MIF的表达进行评分,并测定血清Glucose、ALT、AST、TG、TC、HDL和LDL水平。结果:与模型组大鼠相比,荔枝核提取物组大鼠可见肝脏脂肪变性、炎症和坏死改善,肝组织MIF表达及血清Glucose、ALT、TG和LDL水平显著降低(P<0.01、P<0.05),血清HDL水平增高(P<0.05),且高剂量组Glucose、ALT、TG和LDL的降低显著优于低剂量组(P<0.05)。结论:荔枝核提取物可改善NASH大鼠肝脏脂肪变性、炎症、坏死和血糖、血脂代谢以及肝功能损害,并能降低肝脏MIF的表达。

荔枝核淀粉磷酸酯制备工艺

以三聚磷酸钠为磷酸化试剂,在半干法反应条件下制备荔枝核淀粉磷酸酯,并考察pH值、反应时间、反应温度和酯化剂用量对所得产品取代度的影响。通过正交试验确定制备荔枝核淀粉磷酸酯的最佳条件为:反应时间1.5h,温度150℃,三聚磷酸钠用量为淀粉干重的6%,最终可得取代度为0.016 3的淀粉磷酸酯。

荔枝核有效部位群改善实验性2型糖尿病胰岛素抵抗的作用及机制

目的:研究荔枝核有效部位群(含总皂苷、黄酮和鞣质)改善2型糖尿病胰岛素抵抗的作用及机制。方法:建立高脂饮食加链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠动物模型,随机分为模型组、荔枝核有效部位群高剂量组(1.87 g/kg)、荔枝核有效部位群低剂量组(0.47 g/kg)及盐酸罗格列酮组(3.87×10-3g/kg),另设正常对照组,给药4 w,观察荔枝核有效部位群对实验大鼠糖脂代谢、胰岛素抵抗和胰组织病理改变及超微结构的影响,检测各组大鼠胰组织GRP78、CHOP mRNA表达变化。结果:荔枝核有效部位群高剂量可降低大鼠空腹血糖(FBG)和血清甘油三酯(TG)水平并提高口服糖耐量(P<0.05或P<0.01);荔枝核有效部位群高、低剂量能显著提高胰岛素敏感指数(ISI),降低稳态胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)(P<0.05或P<0.01),明显改善大鼠胰腺组织的病理损伤,并促进内质网、线粒体等损伤细胞器的修复;与模型组比较,荔枝核有效部位群高、低剂量组胰腺组织GRP78 mRNA及高剂量组CHOP mRNA表达水平均显著降低(P<0.01)。结论:荔枝核有效部位群具有改善糖脂代谢、提高胰岛素敏感性、改善胰岛素抵抗和治疗2型糖尿病作用,其机制与抑制胰组织内质网应激关键基因GRP78及CHOP的mRNA表达有关。

荔枝核对HBsAg和HBeAg的体外抑制作用

分别用水(过柱)、95％乙醇、50％乙醇、水(不过柱)提取荔枝核的药用有效成分,应用ELISA法检测其对HBsAg(乙型肝炎病毒表面抗原)和HBeAg(乙型肝炎病毒E抗原)的体外抑制作用。结果表明4种药物对HBsAs和HBeAg均具有显著的抑制作用。

荔枝核活性成分提取及药理作用的研究进展

本文综述了近3年荔枝核提取工艺及其药理作用研究进展,提出虽然大量实验结果证实荔枝核主要的活性成分是荔枝核总皂苷和黄酮类化合物,且治疗肝病、糖尿病、乳腺增生、肿瘤等药理作用显著,但目前对荔枝核已知的主要药效物质研究仍停留在其粗提物上,有效部位的筛选与提纯缺乏系统及规范化,指出应尽快开展相关的如提取工艺优化及质量标准的制订等工作。

荔枝核中总黄酮和多糖的连续提取工艺研究

采用微波-超声波协同萃取法对荔枝核中总黄酮和多糖进行连续提取，考察了料液比、微波-超声波功率、提取温度等因素对荔枝核总黄酮和多糖提取率的影响，得到荔枝核中总黄酮的最佳提取工艺为：乙醇浓度70％、料液比1：30、微波-超声波功率600～800W、提取温度60℃、提取时间30min，此工艺条件下总黄酮提取率为8．201％。荔枝核多糖最佳提取工艺为：料水比为1：35、微波-超声波功率700～900W、提取温度90~C、提取时间15min，多糖提取率为4．557％。

大孔吸附树脂富集荔枝核中总黄酮类成分的工艺研究

目的:筛选适合分离和纯化荔枝核总黄酮的大孔吸附树脂并确立纯化工艺参数。方法:以吸附及解吸率为指标考察8种型号的树脂,确定纯化荔枝核黄酮的最佳树脂。并通过单因素分析考察该树脂分离、纯化荔枝核总黄酮的最佳工艺条件。结果:D4006吸附率及解吸率均高于其他7种树脂。其具体工艺条件为控制上样浓度5.45mg/mL、流速0.5mL/min,上样体积4BV,洗脱剂浓度为80%,洗脱剂用量14BV。结论:D4006型树脂在所确定的工艺条件下,纯化荔枝核总黄酮效果良好,总黄酮得率可达近90%。

荔枝核提取物对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝功能的保护作用

目的观察荔枝核提取物对实验性非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝功能的保护作用。方法 35只Wistar大鼠被随机分为对照组(5只)、模型组(10只)、小剂量(10只)和大剂量荔枝核提取物干预组(10只)。分别以250mg.kg-1和500mg.kg-1荔枝核提取物干预NASH大鼠6周。结果与对照组比,模型组大鼠血清GLU、ALT、AST、TG、TC和LDL水平均显著升高(P<0.05);与模型组比,小剂量荔枝核提取物干预组大鼠血清GLU、ALT、TG和LDL显著降低(P<0.05),而大剂量干预组动物效果更为明显。结论荔枝核提取物能改善NASH大鼠葡萄糖、脂质代谢和肝功能,具有较好的疗效。