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High-throughput Three-dimensional Gel Electrophoresis for Versatile Utilities: A Stacked Slice-gel System for Separation and Reactions (4SR)
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作者 Md. Salimullah Masaki Mori Koichi Nishigaki 《Genomics, Proteomics & Bioinformatics》 SCIE CAS CSCD 2006年第1期26-33,共8页
A novel high-throughput system, called the stacked slice-gel system for separation and reactions (4SR), was developed for the analysis of DNA/RNA and protein/peptide. The system provides a novel three-dimensional ge... A novel high-throughput system, called the stacked slice-gel system for separation and reactions (4SR), was developed for the analysis of DNA/RNA and protein/peptide. The system provides a novel three-dimensional gel electrophoresis approach that exploits the property of stacked slice gels. It allows multiple samples simultaneously to react as well as to be separated, offering a two-dimensional (m×n) sample loading system. For this purpose, high-throughput multi-micro vessels (MMVs) containing variable numbers of wells (100 wells in this paper) have been used, which are made of 25 mm square-size polyacrylamide gels. Furthermore, after electrophoretic separation, a slice gel containing a desired sample can be easily removed and proceeded to the next step. Different biological reactions as well as successive separation of products were effectively carried out dealing with DNA/RNA and protein/peptide. It shows that this system has a diversity of potentials to be developed. 展开更多
关键词 three-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (3D-PAGE) high-throughput screening three-dlmensional separation microarray technology
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Differential Proteomic Analysis of Carbon Ion Radiation in Sheep Sperm
2
作者 HE Yu-xuan LI Hong-yan +3 位作者 ZHANG Yong HE Jian-hua ZHANG Hong ZHAO Xing-xu 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2013年第9期1629-1637,共9页
This study is first to investigate proteomic changes in sheep sperm induced by carbon ion radiation using two-dimensional electrophoresis (2-DE) analysis in the project of breeding a new variety of sheep. Differenti... This study is first to investigate proteomic changes in sheep sperm induced by carbon ion radiation using two-dimensional electrophoresis (2-DE) analysis in the project of breeding a new variety of sheep. Differential expression proteins were detected using the PDQuest 8.0 software after staining with Coomassie blue. Valid spots were then analyzed through liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Among the 480 total protein spots displayed in 2-D gels, 6 specific protein spots were observed in sperm gels. A search against protein sequences in the National Center for Biotechnology Information databases (NCBI) indicated that differentially expressed proteins correspond to two proteins, identified to be enolase and transcription factor AP-2-alpha (TFAP-2c0. The two proteins were up-regulated in the irradiated sperm. To the best of our knowledge, this study is the first to identify proteomic changes induced by carbon ion radiation in sheep sperm. The analysis of differential expression protein may be useful in identifying new breeding markers in sheep reproduction and in clarifying the mechanisms involved in irradiation or space breeding. 展开更多
关键词 SHEEP sperm protein two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis analysis PROTEOME carbon ionradiation irradiation breeding
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Effect of high salinity on cell growth and protein production of Antarctic ice microalgae Chlamydomonas sp. ICE-L
3
作者 郑洲 缪锦来 +5 位作者 阚光峰 金青 丁燏 刘芳明 王守强 王以斌 《Chinese Journal of Polar Science》 2010年第1期81-90,共10页
Antarctic ice microalgae Chlamydomonas sp.ICE-L can survive and thrive in Antarctic sea ice.In this study,Chlamydomonas sp.ICE-L could survive at the salinity of 132‰ NaCl.SDS-PAGE showed that the density of 2 bands... Antarctic ice microalgae Chlamydomonas sp.ICE-L can survive and thrive in Antarctic sea ice.In this study,Chlamydomonas sp.ICE-L could survive at the salinity of 132‰ NaCl.SDS-PAGE showed that the density of 2 bands(26 and 36 kD) decreased obviously at the salinity of 99‰ NaCl compared to at the salinity of 33‰ NaCl.The soluble proteins in Chlamydomonas sp.ICE-L grown under salinity of 33‰ and 99% NaCl were compared by 2-D gel electrophoresis.After shocking with high salinity,8 protein spots were found to disappear,and the density of 28 protein spots decreased.In addition,19 protein spots were enhanced or induced,including one new peptide(51 kD).The changes of proteins might be correlated with the resistance for Chlamydomonas sp.ICE-L to high salinity. 展开更多
关键词 Antarctic ice alga Chlamydomonas sp.ICE-L soluble proteins two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis gel electrophoresis(2-D PAGE) analysis high-salinity press.
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血清蛋白质组学技术及研究进展 被引量:22
4
作者 廖秋林 陈晓东 丁彦青 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期402-407,共6页
In recent years,great progress has been made in the theory and technology of proteomics.As embranchment of proteomics,serum proteomics has been payed more and more attention also.The advanced techniques have been appl... In recent years,great progress has been made in the theory and technology of proteomics.As embranchment of proteomics,serum proteomics has been payed more and more attention also.The advanced techniques have been applied in serum proteomics research,which promote the development of the methodology.A great advance has been made in serum proteomics research for seeking associated tumor markers,pharmacy and some non-cancer diseases. 展开更多
关键词 蛋白质组 双向凝胶电泳 光谱分析 质量 血清
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双向凝胶电泳中三种蛋白质检测方法的比较 被引量:11
5
作者 马增春 高月 +1 位作者 吕俊萍 王升启 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期551-556,共6页
高通量双向电泳是蛋白质组学的核心 ,双向电泳凝胶上蛋白质点的检测方法应具有灵敏度高、线性范围宽和兼容质谱鉴定等优点 .采用差异凝胶电泳 (differencegelelectrophoresis ,DIGE)技术以Cy3(1 (5 carboxypentyl) 1′ propylindocar... 高通量双向电泳是蛋白质组学的核心 ,双向电泳凝胶上蛋白质点的检测方法应具有灵敏度高、线性范围宽和兼容质谱鉴定等优点 .采用差异凝胶电泳 (differencegelelectrophoresis ,DIGE)技术以Cy3(1 (5 carboxypentyl) 1′ propylindocarbocyaninehalideN hydroxysuccinimidylester)和Cy5 (1 (5 carboxypentyl) 1′ methylindodicarbocyaninehalideN hydroxysuccinimidylester)荧光分别标记正常和TNF α处理细胞的蛋白质 ,用Cy2 (3 (4 carboxymethyl)phenylmethyl) 3′ ethyloxacarbocyaninehalideN hydroxysuccinimidylester)荧光标记正常和TNF α处理细胞蛋白质的等量混合样品作为内标 ,混合 3种荧光标记的蛋白质后 ,在同一等电聚焦胶条进行聚焦 ,然后在聚丙烯酰胺凝胶上进行第二向电泳 ,用 3种波长的激光激发扫描得到凝胶图象 ,DIGE中多个样品在同一条件下电泳 ,因而匹配率高 ,且引入内标使蛋白质点的检测与定量更为准确 .DIGE技术与质谱相结合 ,实现了高通量和相对准确定量 .与硝酸银和考马斯亮蓝染色结果相比较 ,DIGE技术具有灵敏度高。 展开更多
关键词 荧光标记 双向电泳 图象分析 蛋白质组学
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蛋白质组研究的技术体系及其进展 被引量:52
6
作者 成海平 钱小红 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第6期584-588,共5页
随着后基因组时代的到来 ,蛋白质组研究越来越受到国内外科学工作者的密切关注 ,我国国家自然科学基金委员会已把蛋白质组研究列为重大科研项目 .概述了蛋白质组研究中的基本技术 ,包括双向凝胶电泳的样品制备和分离、蛋白质的检测、凝... 随着后基因组时代的到来 ,蛋白质组研究越来越受到国内外科学工作者的密切关注 ,我国国家自然科学基金委员会已把蛋白质组研究列为重大科研项目 .概述了蛋白质组研究中的基本技术 ,包括双向凝胶电泳的样品制备和分离、蛋白质的检测、凝胶图像分析、蛋白质的鉴定以及蛋白质数据库构建等 ,并就蛋白质鉴定的常用方法如氨基酸组成分析方法、蛋白质末端序列分析、肽质量指纹谱作了详细阐述 .直观地列出了蛋白质组研究的技术体系流程图 。 展开更多
关键词 蛋白质组 双向凝胶电泳 质谱 凝胶图像分析 数据库
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毛细管等电聚焦/毛细管无胶筛分电泳二维蛋白质分离平台的构建 被引量:6
7
作者 刘和春 杨春 +2 位作者 杨青 张维冰 张玉奎 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第3期273-277,共5页
设计并制作了一种新型的中空纤维接口 ,以此为核心构建了毛细管等电聚焦 (CIEF) /毛细管无胶筛分 (CNGE)电泳二维蛋白质分离技术平台 ,实现了将二维凝胶电泳从平板转移到毛细管中。利用该二维分离平台 ,对血红蛋白样品进行了高效、快速... 设计并制作了一种新型的中空纤维接口 ,以此为核心构建了毛细管等电聚焦 (CIEF) /毛细管无胶筛分 (CNGE)电泳二维蛋白质分离技术平台 ,实现了将二维凝胶电泳从平板转移到毛细管中。利用该二维分离平台 ,对血红蛋白样品进行了高效、快速分离分析 ,验证了该二维分离平台的可行性及分离效能。实验结果表明 :二维分离系统总的峰个数和分离效能都比各自一维分离系统有较大提高。 展开更多
关键词 蛋白质 二维分离平台 毛细管等电聚焦 毛细管无胶筛分电泳 中空纤维接口
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绵羊精子冻融前后差异蛋白质组学研究 被引量:5
8
作者 李鸿岩 赵兴绪 +2 位作者 张勇 贺钰烜 杨永新 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第24期5092-5099,共8页
【目的】检测和分析绵羊精子冻融前后的差异蛋白质。【方法】用二维凝胶电泳分离精子蛋白,凝胶用考马斯亮蓝染色,用PDQuest8.0软件检测分析差异蛋白质斑点并经液相色谱串联离子阱质谱鉴定。【结果】鲜冻精凝胶图谱分析后得到14个差异蛋... 【目的】检测和分析绵羊精子冻融前后的差异蛋白质。【方法】用二维凝胶电泳分离精子蛋白,凝胶用考马斯亮蓝染色,用PDQuest8.0软件检测分析差异蛋白质斑点并经液相色谱串联离子阱质谱鉴定。【结果】鲜冻精凝胶图谱分析后得到14个差异蛋白斑点,在国际生物信息学中心数据库搜索到相对应的5种蛋白质:推定的热休克蛋白70.1、转录因子AP-2α蛋白、烯醇酶、烯醇酶1和血清白蛋白前体。在解冻精子中,推定的热休克蛋白70.1、烯醇酶和烯醇酶1含量减少,转录因子AP-2α蛋白含量增加,血清白蛋白前体来源于精浆。【结论】绵羊精子经冷冻、解冻后,蛋白质存在差异,对差异蛋白质的研究有利于探索绵羊精子在冷冻过程中的生理状态,为进一步研究绵羊精子蛋白质组学及揭示精子冻伤机理提供依据。 展开更多
关键词 绵羊 精子蛋白质 二维凝胶电泳分析 蛋白质组
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小鼠卵巢蛋白质双向凝胶电泳蛋白谱系的初步建立及其功能分析 被引量:4
9
作者 马翔 钱云 +8 位作者 谢满鑫 侯振 孟艳 刘金勇 翟永宁 朱叶飞 周作民 沙家豪 刘嘉茵 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期581-586,共6页
目的:初步建立性成熟小鼠卵巢蛋白质图谱,并对其中的蛋白质功能进行研究。方法:通过双向电泳和质谱技术分析性成熟小鼠卵巢蛋白质组,并对其中的一种蛋白质进行免疫组化研究。结果:(1)获得高重复性和高分辨率小鼠卵巢蛋白图谱。软... 目的:初步建立性成熟小鼠卵巢蛋白质图谱,并对其中的蛋白质功能进行研究。方法:通过双向电泳和质谱技术分析性成熟小鼠卵巢蛋白质组,并对其中的一种蛋白质进行免疫组化研究。结果:(1)获得高重复性和高分辨率小鼠卵巢蛋白图谱。软件分析显示,3个不同卵巢样品24cm 银染蛋白凝胶上的蛋白点均有±2000点,胶重复性好,大部分蛋白点位于相对相同的位置。(2)质谱共鉴定出52种蛋白质,按功能对其进行分类:参与细胞代谢、细胞信号传导/交流、细胞结构/运动、细胞/器官防御与抗氧化作用、调节 RNA 合成、调节蛋白表达及未分类。(3)通过对其中的一种蛋白(GRP78)行免疫组化分析,发现随着卵巢由卵泡早期逐渐生长到排卵前卵泡期成熟并转向黄体期,其在颗粒细胞中的表达信号增强。结论:(1)3个不同卵巢样品蛋白质双向电泳图重复性好。我们通过质谱分析共鉴定出约52种蛋白质,初步构建了小鼠卵巢双向电泳蛋白图谱,对研究卵巢病理与生理、发育过程有着重要的参考价值。(2)行免疫组化分析结果显示,在卵巢周期变化过程中,GRP78蛋白对颗粒细胞的增生、分化、形成黄体颗粒细胞起着重要的调控作用。 展开更多
关键词 卵巢 小鼠 蛋白质 巢蛋白 免疫组化分析 颗粒细胞 双向电泳 双向凝胶电泳 银染 细胞信号传导
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亚健康肾阴虚证的血浆蛋白质组学初步研究 被引量:26
10
作者 孙晓敏 李晓勇 +4 位作者 靳文 王云丹 魏敏 赵晓山 罗仁 《四川中医》 北大核心 2008年第4期7-9,共3页
目的:初步观察亚健康肾阴虚证患者血浆蛋白质组的变化与表达差异,为进一步探讨亚健康的发生机制奠定基础。方法:采用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离亚健康肾阴虚证患者与正常人血浆总蛋白,银染显色;PDQuest软件对凝胶图象进行定性定量差异... 目的:初步观察亚健康肾阴虚证患者血浆蛋白质组的变化与表达差异,为进一步探讨亚健康的发生机制奠定基础。方法:采用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离亚健康肾阴虚证患者与正常人血浆总蛋白,银染显色;PDQuest软件对凝胶图象进行定性定量差异表达分析;从中选取差异表达蛋白质斑点,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDL-TOF-MS)分析,获取肽质量指纹图谱(PMF);通过Mscot-Wizard软件进行数据库搜索,鉴定蛋白质。结果:获得了重复性和分辨性较好的血浆双向凝胶电泳图谱;在亚健康肾阴虚证血浆较正常人血浆表达量升高的蛋白质斑点11个,表达量降低的蛋白质斑点6个;选取其中表达量升高相差10倍以上的3个蛋白质斑点进行PMF鉴定,得到1个匹配精确的蛋白质(热休克蛋白27)。结论:亚健康肾阴虚证血浆与正常人血浆中存在差异表达蛋白质,利用蛋白质组学技术有望对亚健康的发生机制进行阐释,并将促进中医证候研究的拓展和深入。 展开更多
关键词 亚健康肾阴虚证 血浆蛋白质组学 双向凝胶电泳 质谱分析
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多发性硬化患者脑脊液蛋白质组学的研究 被引量:4
11
作者 张旭华 刘师莲 +2 位作者 秦延江 靖永胜 徐广润 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2006年第5期438-442,共5页
目的:筛选并鉴定多发性硬化患者脑脊液特异蛋白,探讨多发性硬化的发病机制。方法:以实验室确诊型和临床怀疑型多发性硬化患者的脑脊液为研究对象,采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离总蛋白质,凝胶经银染色后,Image Master 2D Platinum 5.0... 目的:筛选并鉴定多发性硬化患者脑脊液特异蛋白,探讨多发性硬化的发病机制。方法:以实验室确诊型和临床怀疑型多发性硬化患者的脑脊液为研究对象,采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离总蛋白质,凝胶经银染色后,Image Master 2D Platinum 5.0图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果:从双向电泳图谱上获得蛋白质斑点,共鉴定出35种蛋白,并且发现其中大多是在正常的脑脊液中存在的,其中有6种是在多发性硬化双向凝胶谱库中已有的,有4种是本实验所发现的。结论:本研究识别并鉴定了4种多发性硬化患者脑脊液特异蛋白,但这4种蛋白质与多发性硬化的关系有待进一步研究。 展开更多
关键词 多发性硬化 脑脊髓液 光谱分析 质量 蛋白质组 电泳 凝胶 双向
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外源H_2S影响黄瓜幼苗响应高盐胁迫的蛋白质组学分析 被引量:6
12
作者 任绪明 蒋景龙 +1 位作者 孙旺 李丽 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2236-2248,共13页
为了阐明外源H2S对高盐胁迫下黄瓜蛋白质表达的影响,以盐敏感型黄瓜栽培种‘春夏秋王’为材料,通过双向电泳(2-DE)技术分离叶片总蛋白质,采用基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)技术对差异表达蛋白质进行质谱鉴定,并利... 为了阐明外源H2S对高盐胁迫下黄瓜蛋白质表达的影响,以盐敏感型黄瓜栽培种‘春夏秋王’为材料,通过双向电泳(2-DE)技术分离叶片总蛋白质,采用基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)技术对差异表达蛋白质进行质谱鉴定,并利用NCBI及SwissProt数据库检索进行差异表达蛋白质功能注释和代谢通路分析。结果表明:(1)共检测到约2 490个蛋白质,其中蛋白质表达差异在1.5倍以上且差异显著(P<0.05)的有45个,其中有24个蛋白质表达上调,21个蛋白质表达下调。(2)成功鉴定蛋白质26个,这些蛋白质参与了光合作用(26.92%)、蛋白质代谢(23.08%)、能量与碳水化合物代谢(11.54%)、氨基酸生物合成(11.54%)、细胞结构相关蛋白(7.69%)、抗氧化作用(3.85%)、信号转导(3.85%)及未知功能蛋白(11.54%)。(3)GO注释表明差异表达的蛋白质分子功能主要以蛋白质结合与水解酶活性为主,生物学过程涉及应激反应、有机物代谢过程、胁迫响应和细胞分化等,细胞组成集中分布在细胞部分和一些胞内细胞器。KEGG代谢通路分析表明,差异表达蛋白质主要参与了肌动蛋白细胞骨架调控、细胞凋亡、碳代谢和光和调控等代谢途径。研究表明,外源H2S诱导了高盐胁迫下黄瓜叶片蛋白质的差异表达,为后续探索外源H2S对黄瓜的抗盐分子机制研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 盐胁迫 双向凝胶电泳 H2S GO注释 KEGG通路分析 聚类分析
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家蚕孤雌生殖差异蛋白——热休克相关蛋白的生物信息学分析 被引量:5
13
作者 夏佳音 龙晓辉 +6 位作者 陈健 聂作明 王丹 吕正兵 徐杰 贺平安 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期568-573,共6页
应用双向凝胶电泳(2-DE)技术研究家蚕孤雌生殖蚁蚕和正常蚁蚕的总蛋白质的差异,得到与孤雌生殖相关的差异蛋白点,并对这些蛋白点进行基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF MS)分析,获得了相关差异蛋白的序列特征。将这... 应用双向凝胶电泳(2-DE)技术研究家蚕孤雌生殖蚁蚕和正常蚁蚕的总蛋白质的差异,得到与孤雌生殖相关的差异蛋白点,并对这些蛋白点进行基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF MS)分析,获得了相关差异蛋白的序列特征。将这些序列与已构建的家蚕cDNA文库及蛋白质数据库进行比对,得到3个差异蛋白为热休克相关蛋白。通过5-′RACE的方法克隆到3个差异蛋白的全基因序列,并对它们进行结构和特征分析,有助于进一步研究其与孤雌生殖的关系。 展开更多
关键词 家蚕 孤雌生殖 双向凝胶电泳 基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱 差异蛋白 热休克蛋白 结构分析
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肺癌组织中蛋白质组双向电泳图谱分析方法的建立 被引量:5
14
作者 张慧珍 范清堂 吴逸明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第3期416-418,共3页
目的:建立一套双向凝胶电泳图像的分析方法,为进一步分析和鉴定差异蛋白奠定基础。方法:提取肺癌组织和癌旁组织中的可溶性总蛋白,进行双向凝胶电泳,电泳图片由专用扫描仪获取后,应用图像分析软件(PDQuest7.1)进行蛋白差异点的表达情况... 目的:建立一套双向凝胶电泳图像的分析方法,为进一步分析和鉴定差异蛋白奠定基础。方法:提取肺癌组织和癌旁组织中的可溶性总蛋白,进行双向凝胶电泳,电泳图片由专用扫描仪获取后,应用图像分析软件(PDQuest7.1)进行蛋白差异点的表达情况分析。结果:二维电泳图片经过背景消减、点检测、点匹配等一系列分析后,得出了差异点。结论:PDQuest7.1软件可以用来快速有效地对生物样品之间蛋白质的差异进行分析。 展开更多
关键词 双向电泳 图谱分析 蛋白质组 PDQuest软件 肺肿瘤
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儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白组的双向电泳及PDQuest图像初步分析 被引量:3
15
作者 黄艳军 黄松明 +3 位作者 张爱华 费莉 徐颂周 陈荣华 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第5期462-465,共4页
目的:建立儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白组分析所需的固相pH梯度等电聚焦双向电泳及相关技术.方法:冷丙酮萃取肾病综合征患儿尿蛋白,去除白蛋白等高丰度蛋白、除盐,以固相IPGpH梯度等电聚焦为第一向,均一SDS胶聚丙烯酰胺凝胶(T=10%)... 目的:建立儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白组分析所需的固相pH梯度等电聚焦双向电泳及相关技术.方法:冷丙酮萃取肾病综合征患儿尿蛋白,去除白蛋白等高丰度蛋白、除盐,以固相IPGpH梯度等电聚焦为第一向,均一SDS胶聚丙烯酰胺凝胶(T=10%)为第二向,银染后PDQuest软件进行分析.结果:成功得到儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白双向电泳图谱.尿蛋白用17cm,pH3-10L(线性)的IPG胶条进行二维电泳时上样量100μg,60000Vh的等电聚焦是恰当的.PDQuest7.3软件进行图像分析,检测到400个蛋白点.结论:用尿蛋白组学对儿童微小病变型肾病综合征的尿液进行研究是可行的.为今后从更高的水平来寻找肾脏疾病的功能蛋白和特异性蛋白质,阐明肾脏疾病发生发展的网络机制等后续研究提供了可能性. 展开更多
关键词 尿蛋白质组 双向电泳 图像分析
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人晶状体上皮细胞蛋白质组的双向电泳和质谱鉴定 被引量:3
16
作者 李宏武 姚克 +1 位作者 金红颖 孙丽霞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1598-1601,共4页
目的:建立人晶状体上皮细胞蛋白质组研究体系,探讨双向电泳和质谱鉴定技术在人晶状体上皮细胞蛋白质组研究中的作用。方法:体外培养人晶状体上皮细胞株,用两种不同方法提取总蛋白,进行固相pH梯度(IPG)等电聚焦双向凝胶电泳,凝胶通过GS-... 目的:建立人晶状体上皮细胞蛋白质组研究体系,探讨双向电泳和质谱鉴定技术在人晶状体上皮细胞蛋白质组研究中的作用。方法:体外培养人晶状体上皮细胞株,用两种不同方法提取总蛋白,进行固相pH梯度(IPG)等电聚焦双向凝胶电泳,凝胶通过GS-800扫描仪(Bio-Rad)获取图像并使用PDQuest专业图像分析软件分析。在此基础之上,胰酶消化蛋白质斑点并进行质谱分析。结果:获得了重复性较好的人晶状体上皮细胞蛋白质组电泳图谱。晶状体蛋白质斑点在等电点pH值为4-7、相对分子质量为17-72 kD之间均有分布。其中高丰度蛋白点主要分布于分子量19-50 kD、PI 5-7范围内。2个蛋白点通过质谱分析和数据库的检索得到了初步的鉴定。结论:建立起了一个稳定的分析人晶状体上皮细胞蛋白质组学实验体系;为进一步研究人类晶状体在生理状态及白内障等病理条件下的改变提供了蛋白质组学的研究方法和途径。 展开更多
关键词 蛋白质组 电泳 凝胶 双向 光谱分析 质量 晶体
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尿蛋白组学在儿童微小病变型肾病综合征中的初步研究 被引量:2
17
作者 黄艳军 黄松明 +3 位作者 张爱华 费莉 徐颂周 陈荣华 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第20期3152-3155,共4页
目的研究儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白组分析所需的固相pH梯度等电聚焦双向电泳及相关技术。方法冷丙酮萃取肾病综合征患儿尿蛋白,去除白蛋白等高丰度蛋白,以固相IPGpH梯度等电聚焦为第一向,SDS均一胶(10.00%)的垂直电泳为第二向,银... 目的研究儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白组分析所需的固相pH梯度等电聚焦双向电泳及相关技术。方法冷丙酮萃取肾病综合征患儿尿蛋白,去除白蛋白等高丰度蛋白,以固相IPGpH梯度等电聚焦为第一向,SDS均一胶(10.00%)的垂直电泳为第二向,银染后PDQuest软件进行分析,质谱分析。结果成功地得到儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白双向电泳图谱。PDQuest7.3软件进行图像分析,检测到400个蛋白点。正常尿蛋白检测到112个蛋白点。肾病综合征与正常尿蛋白图谱相比差异蛋白表达明显的有20个,质谱鉴定出5个蛋白,分别是Alpha-1-antitrypsin、PITPNB、Zn-alpha-2-glycoprotein、Haptoglobin和Alpha-1B-gly-coprotein。结论用尿蛋白组学对儿童微小病变型肾病综合征的尿液进行研究是可行的。 展开更多
关键词 尿蛋白质组 双向电泳 图像分析 质谱
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比较蛋白组学在口腔鳞癌患者及健康人血清的初步研究 被引量:4
18
作者 马洪 王金生 +3 位作者 潘卫 宋宇峰 赵天江 曹星华 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期98-101,共4页
目的:筛选口腔鳞癌及健康人血清差异表达的蛋白质。方法:收集口腔鳞癌患者外周血清17例,健康人外周血清17例,通过固相pH梯度双向凝胶电泳以及质谱鉴定和生物信息学分析,寻找在口腔鳞癌患者血清中特异表达的蛋白质。结果:先后对口腔鳞癌... 目的:筛选口腔鳞癌及健康人血清差异表达的蛋白质。方法:收集口腔鳞癌患者外周血清17例,健康人外周血清17例,通过固相pH梯度双向凝胶电泳以及质谱鉴定和生物信息学分析,寻找在口腔鳞癌患者血清中特异表达的蛋白质。结果:先后对口腔鳞癌和健康人血清表达差异明显的11个蛋白质点进行质谱鉴定和生物信息学分析,鉴定了其中的2个点为触珠蛋白(haptoglobin,Hp),在口腔鳞癌血清中均为高表达;1个点为载脂蛋白A(apolipoprotein A)在口腔鳞癌血清中为低表达。结论:触珠蛋白和载脂蛋白A在口腔鳞癌外周血清和健康人外周血清的表达发生了改变,但其确切的调控机制有待进一步研究。 展开更多
关键词 口腔鳞癌 双向凝胶电泳 蛋白组学 质谱分析
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双向凝胶电泳图像分析方法的建立 被引量:3
19
作者 熊兴东 许丽艳 +5 位作者 沈忠英 蔡唯佳 韩溟 牛永东 韩雅莉 李恩民 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2002年第3期139-143,共5页
目的 :建立一套双向凝胶电泳图像分析方法 ,为下一步差别蛋白的鉴定提供依据。方法 :采用一步法分别提取人永生化食管上皮细胞系SHEE和由SHEE转化而来的食管癌细胞系SHEEC的可溶性总蛋白。经双向凝胶电泳分离后 ,应用Bio Rad公司的双向... 目的 :建立一套双向凝胶电泳图像分析方法 ,为下一步差别蛋白的鉴定提供依据。方法 :采用一步法分别提取人永生化食管上皮细胞系SHEE和由SHEE转化而来的食管癌细胞系SHEEC的可溶性总蛋白。经双向凝胶电泳分离后 ,应用Bio Rad公司的双向电泳凝胶图像分析软件PDQuest 6 .2分析SHEE与SHEEC之间可溶性总蛋白的差异表达情况。结果 :SHEE和SHEEC细胞的双向电泳图谱经背景消减、点检测和匹配后 ,获得了各自的差异蛋白点。其中有 7个蛋白点只出现在SHEE细胞中 ,有 2个蛋白点只出现在SHEEC细胞中。结论 :利用PDQuest 6 .2凝胶图像分析软件可快速有效地对两个密切相关的生物系统之间蛋白质样品双向凝胶电泳结果的差别进行分析处理。 展开更多
关键词 双向凝胶电泳 凝胶图像分析 蛋白质组 PDQuest软件 蛋白鉴定
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人成熟卵泡液蛋白质谱图的初步研究 被引量:2
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作者 李黎 邢福祺 +2 位作者 陈士岭 孙玲 李红 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2007年第6期453-456,共4页
目的:建立人成熟卵泡液的蛋白质谱图,筛选鉴定卵泡发育/卵母细胞成熟的相关蛋白质。方法:选取48例因男性因素行ICSI-ET治疗的女性为研究对象,收集取卵时获得的人成熟卵泡液,采用双向凝胶电泳-质谱技术分离鉴定人成熟卵泡液蛋白质谱图。... 目的:建立人成熟卵泡液的蛋白质谱图,筛选鉴定卵泡发育/卵母细胞成熟的相关蛋白质。方法:选取48例因男性因素行ICSI-ET治疗的女性为研究对象,收集取卵时获得的人成熟卵泡液,采用双向凝胶电泳-质谱技术分离鉴定人成熟卵泡液蛋白质谱图。结果:获得了较高分辨率的人成熟卵泡液蛋白质谱图,共检测到180多个蛋白质点,筛选鉴定了5个蛋白质点,分别是载脂蛋白E、PRO2044、Hypothetical protein、免疫球蛋白G重链以及转铁蛋白,PRO2044和Hypothetical protein根据蛋白数据库的鉴定分析结果可能是血清白蛋白的修饰产物。转铁蛋白和载脂蛋白E在以往卵泡发育机制的研究罕有报道。结论:蛋白质组学是全面分析人卵泡发育过程中卵泡液蛋白质表达变化的有效手段,筛选鉴定得到的卵母细胞成熟相关蛋白为进一步研究卵母细胞成熟机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 卵泡液 蛋白质谱图 电泳 凝胶 双向 光谱分析 质量
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