Sephadex G-10凝胶色谱系统测定头孢美唑钠的聚合物

目的 建立凝胶色谱法测定头孢美唑钠的聚合物的方法。方法 色谱柱为葡聚糖凝胶Sephadex G-10（16mm×35cm），流动相A：0.02mg·mL^-1磷酸盐缓冲液（pH7．O）；流动相B：水。流速为1．0mL·min^-1。检测波长为254nm，进样量为200μl。结果 头孢美唑钠在5、O～60.0mg·mL^-1范围内，浓度与聚合物的峰面积呈良好的线性关系（r=0.9996）。结论 该方法简便，准确，灵敏度高，重现性好。

SephadexG-10凝胶色谱系统分析头孢西丁钠的高分子聚合物

目的 建立 Sephadex G-10凝胶色谱系统分析头孢西丁钠高分子聚合物的方法。 方法 色谱柱为葡聚糖凝胶 G-10柱 ( 3 60 mm×16m m) ,流动相 A:0 .0 1mol· L- 1磷酸盐缓冲液 ( p H7.0 ) ,流动相 B:超纯水 ,流速 :1.0 ml· min- 1 ,检测波长 :2 5 4nm,进样量 :2 0 0μL。结果 头孢西丁钠进样浓度在 5～ 40 mg· m L- 1 的范围内与头孢西丁钠高分子聚合物的峰面积呈良好的线性关系 ( r=0 .9990 )。结论 该方法简便准确 ;灵敏度高 ;重现性好。

Ficoll分离液在Sephadex G-100微柱凝胶血型卡中的应用

目的 探讨Sephadex G-100微柱凝胶血型卡加入Ficoll分离液后的性能和应用.方法 在Sephadex G-100微柱凝胶血型卡中加入Ficoll分离液,制作成Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡,对200例标本进行ABO和Rh（D）血型测定,并与进口的强生血型卡和Sephadex G-100血型卡法进行比对.分别用37℃孵育强生血型卡、45℃孵育强生血型卡和45℃孵育Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡三种方法对6例低、中、高不同效价的冷凝集素标本进行ABO和Rh （D）血型测定,同时进行反定型血型检测.分别用强生血型卡、Sephadex G-100血型卡和Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡对26例溶血标本进行ABO和Rh （D）血型测定.结果 自制Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡检测200例标本的血型结果,A型55例,B型46例,O型92例,AB型7例,Rh （D）均为阳性,与强生血型卡和Sephadex G-100微柱凝胶血型卡结果相同.自制血型卡检测抗D抗体平均滴度为1：256,与Diana凝胶卡灵敏度相同,明显优于传统试管法（P＜0.05）.45℃孵育Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡检测6例冷凝集素标本血型结果正确,正反定型一致,37℃和45℃孵育强生血型卡检测冷凝集素标本血型分别有3例和2例结果不正确,造成假阳性.Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡检测26例溶血标本血型结果正确,强生血型卡和Sephadex G-100血型卡检测溶血标本血型分别有6例和10例结果不正确.结论 研制Ficoll分离液-Sephadex G-100微柱凝胶血型卡适用于血型鉴定.对于冷凝集和溶血标本血型鉴定有明显优势.该卡具有准确、灵敏、特异、试剂制备工艺简单、成本低等优点,具有较好的推广应用和开发价值.

Sephadex G-25对乳酸链球菌素溶液脱盐的研究

目的研究乳酸链球菌素的凝胶过滤脱盐法。方法比较在Sephadex G-25柱上加样量、加样体积、洗脱流速和高径比对脱盐效果的影响。结果确定了乳酸链球菌素的最佳脱盐工艺为:色谱柱高径比15:1,加样体积为每毫升凝胶0.1mL料液、加样量为每毫升凝胶7×104IU、用pH3.45的醋酸缓冲溶液在0.6mL/min流速下洗脱。在此条件下,乳酸链球菌素的脱盐收率和回收率都在90%以上。结论 Sephadex G-25能有效的将乳酸链球菌素和盐分离。

Sephadex G-10凝胶色谱法测定头孢克洛胶囊中高分子聚合物

目的:建立用Sephadex G-10凝胶色谱法分析头孢克洛胶囊中高分子聚合物的方法。方法:色谱柱:Sephadex G-10柱(300 mm×15.0 mm,40～120μm);流动相A:pH 7.0的0.05 mol·L^(-1)磷酸盐缓冲液[0.05 mol·L^(-1)磷酸氢二钠溶液-0.05mol·L^(-1)磷酸二氢钠溶液(95:5)];流动相B:超纯水;检测波长:254 nm;流速:1.5 ml·min^(-1)。以头孢拉定作对照加校正因子外标法定量(头孢克洛:头孢拉定=1:1)。结果:头孢克洛聚合物在1～20μg·ml^(-1)范围内呈良好的线形关系(r=0.9992)。结论:方法简便易行,能较好分离头孢克洛与其聚合物,且精密度、准确度均能满足质量控制的要求。

用快原子轰击质谱研究醌式化合物Medermycin、G－15F和G－15G

Ｍｅｄｅｒｍｙｃｉｎ、Ｇ－１５Ｆ和Ｇ－１５Ｇ三个化合物都有醌式结构。在底物甘油中，准分子离子为（Ｍ＋３Ｈ）＋，但在底物３－硝基苯甲醇（ＮＢＡ）中，准分子离子为（Ｍ＋Ｈ）＋。本文用ＦＡＢＭＳ对此作了研究。

滇产刺梨多糖的提取纯化及其结构分析

目的:探讨刺梨多糖提取和纯化的方法。方法:采用热水提取醇沉法从刺梨果实中提取多糖,在单因素实验的基础上,以响应面实验对刺梨多糖的提取工艺进行优化。采用Cellulose DEAE-52和Sephadex G-100柱对刺梨粗多糖进行分离纯化,Sevage法脱蛋白,D-101吸附树脂脱色素,FT-IR、HPGPC和HPLC测定分子量和单糖组成。结果:刺梨多糖是一种以Glc为主要成分的均一性酸性多糖。

乳清蛋白肽的酶法制备、分离纯化及活性评价

以抗氧化活性及蛋白质回收率为筛选指标对乳清蛋白肽酶解工艺进行优化,用层析柱对酶解液进行逐级分离纯化,并对其分子质量进行检测.研究结果表明:利用胰酶、复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶酶解制备乳清蛋白肽,最佳用酶为碱性蛋白酶、最适底物含量为4.0%、最适加酶量为8000U/g、最佳酶解时间为4h;酶解液经DEAE-52纤维素层析后得到的A组分抗氧化活性最好,其还原力为0.320 0±0.004 1,DPPH自由基清除率为6.58%±0.36%;A组分再经Sephadex G-15葡聚糖凝胶层析柱分离纯化后得到组分G,其DPPH自由基清除率为6.73%±0.083%;组分G的主要成分为分子质量378 u的肽段,其一级氨基酸组成为赖氨酸(Lys)、亮氨酸(Leu)及丝氨酸(Ser).

低温乙醇除脂法纯化鸡卵黄中免疫球蛋白

采用低温乙醇除脂法提取鸡卵黄免疫球蛋白 (immunoglobulinyolk,IgY)。通过低温乙醇沉淀、透析和葡聚糖凝胶等不同方法逐步纯化免疫球蛋白。研究了卵黄稀释倍数、乙醇浓度、NaCl浓度以及离心转速对纯化效果的影响。分离纯化后所得的冷冻干燥制品 ,经SDS PAGE和抑菌试验检测可知 :可溶性蛋白质得率为每毫升蛋黄 1 2 6mg ,可溶性蛋白质含量占总蛋白质量的 97% 。

胰蛋白酶水解酪蛋白制备生物活性肽的粗分离

利用SephadexG-15交联葡聚糖凝胶柱(1.7cm×57.5cm)粗分离胰蛋白酶的酪蛋白水解液,根据SephadexG-15分离蛋白质的标准曲线方程lgM=4.82216-2.81531Kav得到水解度与分子量的关系。

香菇多糖提取分离的研究

采用DEAE-cellulose柱层析和Sephadex G-200柱层析从香菇子实体热水浸提的粗多糖中分离出两个多糖组分Len1-A、Len2-A,经旋光度法、Sepharose 4B柱层析、红外光谱等方法检测确定为均一多糖组分,且均为α-构型的吡喃糖,苯酚硫酸法测得其糖质量分数分别为91.5%和92.3%,旋光度为+5.6°、+11.2°,相对分子质量为375×103、718×103。

水解酪蛋白制备生物活性肽的粗分离

利用SephadexG-15交联葡聚糖凝胶柱(1.7cm×57.5cm)粗分离胃蛋白酶的酪蛋白水解液,根据Sephadex G-15分离蛋白质的标准曲线方程lgM=4.82216-2.81531Kav得到水解度与分子量的关系。

桔梗多糖的分离纯化与含量测定

利用离子交换凝胶柱层析法分离纯化桔梗多糖,并对纯化组分进行纯度鉴定和糖含量及蛋白质含量测定。桔梗饮片经热水浸提、乙醇分步沉淀得桔梗粗多糖PPS80,Sevage法脱蛋白后,通过DEAE-Sepharose FF离子交换和Sephadex G-75凝胶柱层析进行纯化鉴定。分别采用苯酚-硫酸法和考马斯亮蓝染色法测定纯化后各组分的糖和蛋白质含量。试验结果表明,从桔梗粗多糖PPS80中分离得到2个均一性组分PPS80-I和PPS80-Ⅱ,糖含量分别为90.32%和86.75%,蛋白质含量分别为0.48%和1.96%。该试验首次采用DEAE-Sepharose FF离子交换柱层析结合Sephadex G-75凝胶柱层析有效分离纯化出桔梗多糖均一性组分,为桔梗多糖的进一步研究提供基础。

葡聚糖凝胶过滤层析分离低聚半乳糖

采用葡聚糖凝胶SephadexG-25柱对低聚半乳糖混合物进行了分离提纯,确定了适宜的洗脱流速和温度。结果表明,操作温度70℃,洗脱流速20mL/h,凝胶柱90cm×1cm,当进料量由1mL增至10mL,低聚半乳糖(GOS,三糖及三糖以上的低聚糖组分)的产量提高了4.62倍,整个洗脱过程只需4.1h,可以有效地去除葡萄糖,得到纯度为85.03%的含少量乳糖的GOS混合物。此混合物经过二次上柱后,分离效果明显优于一次上柱,得到的GOS质量分数达89.39%。

玛咖多糖提取工艺的优化及其抗氧化活性

为了更好地开发和利用云南地区的功能食品玛咖,选取玛咖多糖作为研究对象,在单因素试验基础上设置响应面优化试验对玛咖多糖提取工艺进行优化以提高玛咖多糖提取效率,并测定玛咖多糖的抗氧化性强弱,评价玛咖多糖的活性价值;采用Sephadex G-100凝胶层析纯化玛咖多糖,用去离子水进行洗脱(洗脱速度为1mL/min),通过多糖对羟自由基、DPPH自由基、ABTS自由基的清除效率研究玛咖多糖的抗氧化性作用。结果表明:在液料比59mL/g、浸提温度82℃、提取时间157min的条件下,玛咖多糖的提取率为9.60%。对纯度为65.6%的玛咖粗多糖进行纯化,得到纯度为90.7%的纯化多糖。当粗多糖和纯多糖浓度为6mg/mL时,对羟自由基和DPPH自由基的清除率达到最大,分别为63.9%、46.5%和72.8%、81.7%;粗多糖浓度为5mg/mL时,对ABTS自由基清除率达到最大,为61.4%;纯多糖浓度为8mg/mL时,对ABTS自由基的清除率最大,为83.8%。

以Sephadex G-100制备微柱凝胶血型卡及其性能评估

目的本实验以Sephadex G-100制备血型卡并对其进行性能评估。方法用生理盐水浸泡等对Sephadex G-100凝胶进行预处理,通过控制浸泡时间、缓冲液、加入红细胞的量及其浊度等,制备血型卡。再对血型卡进行性能评估,包括符合率、灵敏度、批内重复率、批间重复性、有效期等。结果自制血型卡检测200例标本的血型结果和试管法、强生血型卡法全部符合。自制血型卡和强生凝胶卡检测抗B抗体平均滴度均为1:308,均明显优于传统试管法1:256(P<0.05)。自制血型卡检测抗B抗体滴度的批内重复性CV为8.1%,批间重复性CV为3.7%。自制血型卡稳定期约为8个月。结论以Sephadex G-100凝胶试剂制备血型卡具有重复性高、稳定性好、结果准确、试剂制备工艺简单、成本低等优点,具有较好的推广应用和开发价值。

人工培养冬虫夏草胞外多糖的分离纯化研究

本文以乙醇沉淀法提取得到的人工培养冬虫夏草(Cs-HK1)粗胞外多糖为研究对象,采用DEAE-52纤维素(Cl-)离子交换柱层析和Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析进行分离、纯化得到一水溶性胞外多糖分EPS-1A。紫外光谱、比旋光度和凝胶渗透色谱法研究表明该多糖为相对均一组分,中性糖含量为99.0%,重均相对分子质量为4.0×104。多糖特征反应表明该多糖为非淀粉类,不含单糖、糖醛酸、蛋白质、核酸和多酚类物质的中性多糖。

生地黄中梓醇纯化工艺优选

目的:探讨生地黄中梓醇的最佳纯化工艺。方法:采用高效液相色谱法检测梓醇含量。以梓醇含量为指标,比较不同型号的大孔树脂、活性炭对梓醇的分离效果,再对所含梓醇的部分应用不同的葡聚糖凝胶进行分离。结果:优选确定的工艺为:用15%活性炭对梓醇粗提物吸附后,活性炭用20%乙醇洗脱,将收集洗脱液浓缩后用葡聚糖凝胶G-15进行分离,所得产物中梓醇含量在85%以上。结论:优化确定的梓醇化化工艺简单可行。

枇杷叶多糖的分离纯化及组分鉴定

提取纯化枇杷叶多糖,并对其组分进行研究。枇杷叶多糖提取液经大孔树脂除杂,醇沉后干燥即得枇杷叶可溶性总多糖。经DEAE-52纤维素柱层析及Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析,得到纯化后多糖,并采用Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱测定多糖的分子量,水解多糖后采用薄层层析对枇杷叶多糖进行组分鉴定及单糖的组成比例测定。通过DEAE-52柱层析得3个枇杷叶多糖酸性组分,分别经过Sephadex G-200柱层析得到3个乳白色组分,分别为PSL-1、PSL-2、PSL-3。3个组分的洗脱曲线均为单一对称峰,初步判断3个组分含有单一成分的多糖。PSL-1、PSL-2、PSL-3分子量分别约为700、500、400 k Da。经过薄层层析初步推断出PSL-1含有鼠李糖和葡萄糖,含量之比为1∶0.602;PSL-2含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖,含量之比为1∶1.415∶1.408;PSL-3含有半乳糖和鼠李糖,含量之比为1∶1.03。