蛋白质沉淀剂对棉铃虫谷胱甘肽S_转移酶的部分纯化

通过用聚乙烯亚胺(PEI)、硫酸铵、聚乙二醇(PEG)沉淀技术和GSH-Sepharose 4B亲和柱对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)幼虫中谷胱甘肽S-转移酶进行了部分纯化研究.结果表明PEG10000和PEG20000的纯化效果优于硫酸铵的沉淀效果.通过PEI沉淀去核酸后,再用硫酸铵沉淀,中肠和脂肪体GST活性分布在70%～75%和60%～65%沉淀段,比活力分别为1081.49和596.41 nmol/(min·mg),纯化倍数分别为2.53和2.2.在6种PEG中,PEG10000和PEG20000的纯化效果较好.在中肠和脂肪体中PEG10000沉淀的GST活性峰分别在40%～45%和30%～40%,GST比活力分别为795.11和1 080.18 nmol/(min·mg),纯化倍数分别是2.4和3.97.PEG20000沉淀中肠和脂肪体GST的活性峰分别在25%～40%和25%～45%,比活力分别是767.57和945.96 nmol/(min·mg),纯化倍数分别是2.81和3.05.用GSH-Sepharose 4B纯化中肠GST,GST比活力达到5 888.44nmol/(min·mg),纯化倍数达到107.38.

木鳖子素的分离与纯化

目的:分离纯化到单一组分的木鳖子素。方法:木鳖子脱脂粉用磷酸盐缓冲液提取,提取液用硫酸铵沉淀,沉淀用水溶解后先上CM Sepharose Fast F low阳离子交换凝胶柱然后上SephacrylTMS-200 H igh F low凝胶柱。结果:纯化到单一组分的木鳖子素,分子量为29000。结论:该方法快速、稳定。

Ⅰ型单纯疱疹病毒gG基因片段的高效表达、纯化

目的 获得具有优势抗原表位的Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白G的表达抗原并纯化鉴定。方法 用PCR技术扩增经分析筛选出的HSV1 gG蛋白中优势抗原决定簇较集中的基因片段。将该段基因克隆至PGEX 4T 2表达载体内 ,转化大肠杆菌TGl,对重组体进行诱导表达 ,表达产物主要以可溶性形式存在 ,使用硫酸铵沉淀后采用Sepharose阴离子交换层析进行纯化。纯化的蛋白抗原包被酶联板分别对抗HSV1 IgM阳性血清和正常人血清标本进行检测。 结果 在原核表达载体中成功地克隆了HSV1 gG ,电泳分析表明在相对分子质量 4 3 5kD处有HSV1 gG/GST融合蛋白的高效表达 ,并纯化获得了纯度达 90 %的表达蛋白。ELISA分析初步证实表达产物具有较好的抗原性和特异性。结论 成功地克隆、表达了高纯度的具有良好免疫原性的HSV1 gG蛋白 ,为研制高质量的HSV

籼米淀粉超微粉体的理化性质

生物技术和机械粉碎相结合的方法获得了超微粉体,探讨了超微粉体的糊化特性、溶解性和膨润力等理化性质。采用Sepharose CL-2B凝胶色谱分析技术研究了相对分子质量的变化趋势。