反义TNF_(-α)寡脱氧核苷酸降低感染性休克小鼠死亡率

目的：观察反义肿瘤坏死因子－α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－ａｌｐｈａ，ＴＮＦ－α）寡脱氧核苷酸对ＬＰＳ诱导的感染性休克小鼠的影响，为采用反义技术降低感染性休克死亡率的早期临床试验奠定基础。方法：通过腹腔注射ＬＰＳ建立感染性休克小鼠模型。采用腹腔注射方法，通过ＤＯＴＡＰ转染导入系统，使反义ＴＮＦ－α寡脱氧核苷酸（ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ＯＤＮ）作用于小鼠单核吞噬细胞系统；采用ＲＴ－ＰＣＲ，ＥＬＩＳＡ检测ＴＮＦ－α的ｍＲＮＡ和蛋白质的表达水平。结果：反义ＴＮＦ－αＯＤＮ降低了ＬＰＳ诱导的感染性休克小鼠的ＴＮＦ－α的释放，降低了感染性休克小鼠的死亡率，而正义ＴＮＦ－αＯＤＮ和错配ＴＮＦ－αＯＤＮ与对照组相比，对ＴＮＦ－α的释放无影响，未能降低感染性休克小鼠的死亡率。结论：反义ＴＮＦ－αＯＤＮ以序列特异性方式抑制了ＬＰＳ诱导的感染性休克小鼠的ＴＮＦ－α的释放，降低了感染性休克小鼠的死亡率。

核因子-κB对感染性休克小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨核因子-κB(NF-κB)对感染性休克小鼠心肌细胞凋亡的影响,了解感染性休克时心功能减退的机制。方法随机将20只Wistar小鼠分为感染性休克组和对照组。感染性休克组(n=10)小鼠麻醉后固定,沿腹正中线作1.5 cm切口,结扎盲肠根部,用14号针头穿刺盲肠4次,之后将盲肠还纳腹腔,逐层缝合腹壁切口,于12 h后断头取血,分离血清,并留取其心脏组织标本。对照组小鼠(n=10)除不进行盲肠结扎穿孔外,其余操作均同感染性休克组。均采用免疫组织化学法测定二组心肌组织NF-κB蛋白表达及心肌细胞凋亡情况。结果感染性休克组心肌细胞内NF-κB抗原表达明显上调,其中强阳性9例,中等阳性1例;对照组呈阴性8例,弱阳性2例,二组阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。感染性休克组心肌细胞凋亡指数(5.33±0.49)明显增加,与对照组心肌细胞凋亡指数(0.65±0.08)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论小鼠感染性休克过程中,NF-κB蛋白表达升高,心肌细胞凋亡增加,可能是感染性休克时NF-κB通过心肌细胞凋亡信号转导的作用,导致心肌细胞凋亡增加,以致心功能减退。

穿心莲内酯对小鼠早期感染性休克的影响

目的:建立感染性休克小鼠动物模型后,观察穿心莲内酯对早期感染性休克小鼠的影响。方法:采用小鼠腹腔注射内毒素(LPS)造成感染性休克模型,观察穿心莲内酯对模型小鼠的影响。结果:穿心莲内酯能明显改善感染性休克小鼠的肠道水肿,同时可以降低肺、肾、肝脏器损害程度。结论:穿心莲内酯对LPS建立的小鼠感染性休克具有保护作用。

PPAR-β对小鼠脓毒症肝损伤的研究

目的探讨过氧化物酶增殖物激活受体β亚型(PPAR-β)对小鼠脓毒症肝损伤的作用。方法将120只小鼠随机分为假手数组(SHAM)、脓毒症肝损伤组(LPS)、肝损伤+激动剂组(LPS+GW0742)、肝损伤+抑制剂组(LPS+GSK0660),每组各30只。在不同时间段检测ALT、TBIL、AST、IL-1β、IL-18、TNF-α、capase-1、NF-κB水平。结果不同时间点,LPS+GW0742组血清中ALT、AST和TBIL水平均显著降低于LPS组,差异有统计学意义(P=0.000);LPS+GW0742组小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-18水平均显著低于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05);LPS+GW0742组条带面积较LPS组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PPAR-β可以通过下调NF-κB分子的表达及炎性因子的产生,从而减轻小鼠脓毒症肝损伤,为脓毒症的治疗提供新的靶点。

TGF-β1/NF-κB信号通路在急性肺损伤中的作用

目的探讨TGF-β1/NF-κB信号通路在急性肺损伤中的作用及机制。方法盲肠结扎穿刺术诱导建立脓毒症急性肺损伤模型,将C57BL/6J成年雄性小鼠随机分为对照组、模型组与NF-κB抑制组,每组10只,测定各组小鼠肺湿干重比(W/D),ELISA方法检测小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;测定小鼠肺组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;HE染色观察肺组织病理学改变;Western Blot检测小鼠肺组织NF-κB、TGF-β1、TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白表达。结果与脓毒症组相比,NF-κB抑制剂处理后,小鼠肺组织W/D下降,血清TNF-α、IL-1β和IL-6均显著降低,MDA含量降低、SOD活性增加,小鼠肺组织炎性细胞浸润减少,肺组织TGF-β1、NF-κB、TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白表达明显下降。结论抑制NF-κB/TGF-β1信号通路可下调脓毒症时高表达的炎性因子,减轻小鼠急性肺损伤。

苯基甲巯咪唑对内毒素休克小鼠的保护作用

目的探讨苯基甲巯咪唑(C10)注射对内毒素休克小鼠生存改善效应的量效关系,以及不同给药时间的影响。方法小鼠随机分为C10预处理不同剂量组(0.25、0.5、1.0mg/kg)、生理盐水对照组、基线对照组以及C10后处理组(造模后30min注射),采用脂多糖(LPS,25mg/kg)腹腔内注射造模,在10个不同时间点观察小鼠的生存情况并作中毒症状评分(ESS),观察终点存活鼠和提前死亡鼠均留取肺、肾、肝组织行HE染色和组织病理观察,使用STATA10.0软件对实验数据进行统计分析。结果造模后12hC10预处理组和C10后处理组分别与生理盐水组的ESS比较,差异均有统计学意义;C10预处理组、生理盐水对照组以及C10后处理组7d生存率分别为0、25.0%、75.0%、0、62.5%;1.0mg/kg C10预处理组和1.0mg/kg C10后处理组生存曲线比较差异无统计学意义;死亡鼠靶器官病理学检查可见显著炎性渗出和组织损伤。结论 C10预处理对内毒素休克小鼠的保护作用存在明显的量效关系;同等剂量C10在造模前后给药对内毒素休克小鼠生存具有同等的保护效应。

右美托咪定对脓毒症急性肾损伤小鼠的影响研究

目的观察右美托咪定预处理对盲肠结扎穿孔(CLP)模型小鼠脓毒症急性肾损伤的影响及其可能机制。方法将24只小鼠随机分为假手术组、模型组和实验组,每组8只。假手术组和模型组在造模前30 min预先腹腔注射等量生理盐水,实验组在造模前30 min预先腹腔注射右美托咪定100μg·kg(-1),假手术组仅暴露腹腔,不进行盲肠结扎穿孔,模型组和实验组随后予以盲肠结扎穿孔造模。24 h后用试剂盒方法测定小鼠血清肌酸酐、尿素氮、丙二醛及超氧化物歧化酶,用苏木精-伊红(HE)染色法观察肾组织病理形态学改变,用蛋白免疫印迹法测定肾组织核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶(HO)-1信号通路蛋白表达。结果实验组血清肌酸酐、尿素氮、丙二醛和超氧化物歧化酶水平分别为(2.58±0.99)μmol·L(-1),(15.38±3.76)mmol·L(-1),(8.01±0.31)nmol·mL(-1),(155.11±10.98)U·mL(-1),模型组分别为(6.74±0.14)μmol·L(-1),(29.81±4.29)mmol·L(-1),(12.51±1.29)nmol·mL(-1),(119.52±9.95)U·mL(-1),差异均有统计学意义(均P<0.05)。实验组Nrf2和HO-1分别为1.19±0.15,1.00±0.10,模型组分别为0.36±0.13,0.40±0.06,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论右美托咪定预处理能减轻脓毒症引起的肾组织急性损伤,这种作用可能是通过激活Nrf2/HO-1途径抑制细胞氧化应激而产生的。