大肠杆菌trpBA和serA基因的串联表达

大肠杆菌trpBA基因编码的色氨酸合成酶（tryptophan synthetase，TSase）是色氨酸合成的关键酶；serA基因编码的磷酸甘油酸脱氢酶（D-3-phosphoglycerate-dehydrogenase，PGDH）为L-丝氨酸合成（色氨酸合成的底物）的关键酶。为了通过基因工程手段来增加色氨酸的产量，在利用高效的原核表达载体pET22b（＋）分别对trpBA和serA基因克隆表达的基础上，采用PCR方法扩增了抗反馈抑制的serA和trpBA基因，将两基因串联于pET22b（＋）载体上，共构建了4种方式的串联质粒，实现了2种蛋白酶在大肠杆菌中的共表达。聚丙烯酰胺电泳分析显示，ABA—I重组菌株在37kD（PGDH）、29kD（色氨酸合成酶的α,亚基）、44kD（β亚基）处均有明显的蛋白表达带。4种串联表达质粒重组菌的TSase酶活性，分别比含空载体菌相应酶的活性提高2～4倍，PGDH酶活性分别提高约2．1～3．6倍。经摇瓶发酵实验表明酶活性较高的ABA—I菌株色氨酸合成量亦最高，约为对照菌株的20．2倍。

L-丝氨酸产生菌c-11中serA基因的克隆与表达

利用PCR技术以L-丝氨酸产生菌株黄色短杆菌c-11的染色体DNA为摸板,扩增出serA基因,连接到表达载体pEC7上,转化L-丝氨酸产生菌c-11,使其氨基酸产量由12 g/L增加到18 g/L,产酸率增加了50%。