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Sericin1上游调控序列多态性分析 被引量:2
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作者 黄科 李春峰 周泽扬 《西南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期154-158,共5页
在克隆家蚕sericin1基因上游调控序列时,出现多种扩增情况.为了调查其多态性,对野桑蚕、家蚕70个品系基因组进行了PCR扩增,扩增出660bp(DQ354392)、1000bp及660bp和1000bp同时出现的3种类型.序列分析表明:1000bp的条带与NCBI中登录的ser... 在克隆家蚕sericin1基因上游调控序列时,出现多种扩增情况.为了调查其多态性,对野桑蚕、家蚕70个品系基因组进行了PCR扩增,扩增出660bp(DQ354392)、1000bp及660bp和1000bp同时出现的3种类型.序列分析表明:1000bp的条带与NCBI中登录的sericin1(AB00783)上游调控序列一样;多态性存在于顺式作用元件之前,而顺式作用元件区域是非常保守的. 展开更多
关键词 丝胶1基因 上游调控序列 多态性
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家蚕丝胶蛋白基因1(ser-1)启动子的克隆及其活性分析 被引量:9
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作者 诸戌娴 曹广力 +3 位作者 薛仁宇 周文林 刘炜彬 贡成良 《科技通报》 2007年第6期828-834,共7页
家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA... 家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA,并通过蚕体和家蚕BmN细胞进行了瞬时表达。结果显示,家蚕ser-1基因启动子的TATA框的保守序列为TATAAAA,位于-24~-30处,CAAT框位于-112~-115处;ser-1基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕幼虫的中部丝腺组织和培养的BmN细胞中瞬时表达。 展开更多
关键词 家蚕 丝胶蛋白基因 启动子 克隆 表达载体
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Bmo-miR-2771对家蚕丝胶蛋白基因BmSer-1表达的调控作用 被引量:1
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作者 钱平 蒋涛 +5 位作者 王欣 宋菲 陈晨 范洋洋 唐顺明 沈兴家 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期826-831,共6页
微小RNA(miRNA)可通过抑制mRNA转录或使RNA降解的方式在转录后水平调节靶基因的表达。研究与家蚕丝胶蛋白基因1(BmS er-1)转录后表达有关的miRNA(Bmo-miR)及其作用方式,以丰富丝胶蛋白基因表达的精细调控信息。首先从miRBase 21数据库... 微小RNA(miRNA)可通过抑制mRNA转录或使RNA降解的方式在转录后水平调节靶基因的表达。研究与家蚕丝胶蛋白基因1(BmS er-1)转录后表达有关的miRNA(Bmo-miR)及其作用方式,以丰富丝胶蛋白基因表达的精细调控信息。首先从miRBase 21数据库中获得全部成熟体Bmo-miR,通过生物信息学分析筛选到一个对BmS er-1有潜在调控作用的BmomiR,命名为Bmo-miR-2771。设计茎环引物,采用半定量RT-PCR方法检测Bmo-miR-2771及其预测靶基因BmS er-1在家蚕5龄3 d幼虫头部、脂肪体、前部丝腺、中部丝腺、后部丝腺、中肠等组织器官以及血淋巴细胞中的表达水平,结果显示Bmo-miR-2771特异性地在中部丝腺中表达,并且靶基因BmS er-1在中部丝腺的相对表达量也明显高于其他组织。将构建的表达BmomiR-2771的重组质粒pcD NA3.0(ie1-egfp-pri-miR-2771-SV40)和表达BmS er-1 3'-UTR的重组质粒pG L3(A3-luc-Ser-1 3'UTRSV40)共转染家蚕卵巢培养细胞BmN,并以共转染pcD NA3.0(ie1-egfp-SV40)和pG L3(A3-luc-Ser-1 3'UTR-SV40)的BmN细胞为阳性对照,以海肾荧光素酶表达载体pRL-CMV为内参,检测荧光素酶活性,结果显示实验组的荧光素酶活性相对于阳性对照组显著降低(P<0.05),从细胞水平证实了Bmo-miR-2771对BmS er-1基因表达具有负调控作用。 展开更多
关键词 家蚕 丝胶蛋白基因Ser-1 微小RNA Bmo-miR-2771 转录后调控 半定量RT-PCR 双荧光素酶报告基因系统
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家蚕miR-0047对丝胶蛋白基因BmSer-1表达的调控作用研究 被引量:2
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作者 钱平 蒋涛 +4 位作者 何平 陈晨 唐旭东 唐顺明 沈兴家 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期922-928,共7页
对家蚕中部丝腺小RNA高通量测序获得若干新miRNA,生物信息学分析发现Bmo-miR-0047可能对家蚕丝胶蛋白基因Bm Ser-1有调控作用。设计特异性茎环引物,利用半定量RT-PCR检测分析家蚕5龄3 d幼虫丝腺(包括前、中、后部丝腺)、头部、脂肪体、... 对家蚕中部丝腺小RNA高通量测序获得若干新miRNA,生物信息学分析发现Bmo-miR-0047可能对家蚕丝胶蛋白基因Bm Ser-1有调控作用。设计特异性茎环引物,利用半定量RT-PCR检测分析家蚕5龄3 d幼虫丝腺(包括前、中、后部丝腺)、头部、脂肪体、表皮、中肠、马氏管、精巢/卵巢、血淋巴细胞和气管等12个器官组织中Bmo-miR-0047的表达情况。结果显示,中部丝腺中Bmo-miR-0047的相对表达量明显高于其他组织,说明在家蚕5龄幼虫期Bmo-miR-0047对Bm Ser-1基因的表达调控存在时空特异性。为了进一步分析Bmo-miR-0047对Bm Ser-1基因表达的调控作用,构建重组表达载体pc DNA3.0(ie1-egfp-pri-miR-0047-SV40)和p GL3(A3-luc-Bm Ser-1 3'UTR-SV40),并以海肾荧光素酶报告质粒pRL-CMV为内参,利用家蚕卵巢培养细胞Bm N进行共转染。转染后检测发现实验组Bm N细胞中的荧光素酶活性与对照组相比显著减弱,表明Bmo-miR-0047在体外培养细胞中对Bm Ser-1基因的表达具有负调控作用。 展开更多
关键词 家蚕 微小RNA Bmo-miR-0047 丝胶蛋白基因Ser-1 转录后调控
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Bmo-miR-2788对家蚕丝胶蛋白基因Ser-1的表达调控
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作者 Rehana Kandhro 陈艳花 +2 位作者 钱平 朱娟 沈兴家 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期811-820,共10页
通过生物信息学分析发现,家蚕丝胶蛋白基因BmSer-1的3′非翻译区(3′-UTR)存在微小RNA Bmo-miR-2788的结合位点。半定量PCR结果显示,Bmo-miR-2788在家蚕5龄第4天幼虫的8个受试组织中均有表达,但在中部丝腺中表达水平最高;而BmSer-1仅在... 通过生物信息学分析发现,家蚕丝胶蛋白基因BmSer-1的3′非翻译区(3′-UTR)存在微小RNA Bmo-miR-2788的结合位点。半定量PCR结果显示,Bmo-miR-2788在家蚕5龄第4天幼虫的8个受试组织中均有表达,但在中部丝腺中表达水平最高;而BmSer-1仅在中部丝腺中被检测到。分别构建BmSer-13′-UTR和Bmo-miR-2788的表达载体pGL3.0(A3-luc-BmSer-1-3′-UTR-SV40)和pcDNA3.0(ie1-egfp-pri-Bmo-miR-2788-SV40),共转染BmN细胞,结果表明Bmo-miR-2788上调BmSer-1表达(P<0.01);当将上述载体与合成的Bmo-miR-2788抑制剂共转染BmN细胞时,BmSer-1表达显著下调(P<0.05)。为验证Bmo-miR-2788在蚕体内对BmSer-1表达的调控作用,将Bmo-miR-2788表达质粒与其阴性对照(pcDNA3.0)分别注射到家蚕5龄第3天幼虫体内,qRT-PCR分析结果显示,与阴性对照相比,注射Bmo-miR-2788后36 h中部丝腺中的BmSer-1表达显著上调(P<0.01)。上述结果表明Bmo-miR-2788正向调控BmSer-1基因的表达。 展开更多
关键词 MIRNA BmN细胞 丝胶蛋白基因 BmSer-1 Bmo-miR-2788 基因调控
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Chromosomal localization of silkworm (Bombyx mori) sericin gene 1 and chymotrypsin inhibitor 13 using fluorescence in situ hybridization 被引量:2
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作者 Yutaka BANNO Hiroshi FUJII 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2008年第2期133-139,共7页
The chromosomal locations of two single-copy genes, Ser-1 and CI-13, in silkworm (Bombyx mori) were detected at the molecular cytogenetics level by fluorescence in situ hybridization in the study. The results showed t... The chromosomal locations of two single-copy genes, Ser-1 and CI-13, in silkworm (Bombyx mori) were detected at the molecular cytogenetics level by fluorescence in situ hybridization in the study. The results showed that Ser-1 is located near the distal end of the 11th linkage group, relatively at the 12.5±1.4 position in pachytene; and that CI-13 has been mapped near the distal end of the 2nd linkage group, relatively at the 8.2±1.2 position in pachytene. Furthermore, their location model map-FISH map on silkworm chromosome was drawn. The FISH technique and its application to silkworm are also discussed in this paper. 展开更多
关键词 Bombyx mori sericin gene 1(Ser-1) CHYMOTRYPSIN inhibitor 13 gene (CI-13) fluorescence in SITU hybridization chromosome mapping
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