丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶-2在胃癌组织中的表达情况及临床意义

目的探讨丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶-2(SRPK2)在胃癌组织中的表达情况与胃癌患者临床特征及预后的关系。方法收集胃癌患者经手术切除的胃癌组织及相应的癌旁组织标本各85例,采用免疫组织化学法检测SRPK2在85例胃癌患者胃癌组织及癌旁组织中的表达情况,分析胃癌组织中SRPK2阳性表达与胃癌患者临床特征及预后的关系。结果免疫组化染色结果显示,胃癌组织中SRPK2的阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.01)。浸润深度(根据T分期)为T3~4期、有淋巴结转移、肿瘤直径>5cm、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期胃癌患者胃癌组织中SRPK2的阳性表达率均高于浸润深度(根据T分期)为T1~2期、无淋巴结转移、肿瘤直径≤5cm、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期的胃癌患者,差异均有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤部位胃癌患者胃癌组织中SRPK2的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,SRPK2阳性表达的胃癌患者的术后5年总生存率低于SRPK2阴性表达的胃癌患者(P<0.05)。结论SRPK2在胃癌组织中的阳性表达率较高,可能与胃癌的发生、发展有关。SRPK2阳性表达的胃癌患者的预后较差,其可能成为胃癌临床诊疗及预后评估的生物学标志物。

小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2基因真核重组表达质粒的构建及其对微管蛋白聚合的影响

目的构建小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2(serine/arginine-rich protein specific kinase 2,SRPK2)基因(srpk2)的真核重组表达质粒,并分析其对微管蛋白α-Tubulin聚合的影响。方法利用RT-PCR法扩增srpk2的全长cDNA序列,通过分子克隆技术构建真核重组表达质粒pLV-EGFP(2A)Puro-srpk2;在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,将真核重组表达质粒及空载体pLV-EGFP2(A)Puro分别转染人胚肾HEK293T细胞,同时设空白对照组(未转染)。采用RT-PCR及Western blot法分别检测HEK293T细胞中srpk2基因mRNA转录及SRPK2蛋白的表达情况;Western blot法分析HEK293T细胞中聚合态和游离态α-Tubulin的含量。结果双酶切及DNA序列鉴定证明真核重组表达质粒pLV-EGFP2(A)Puro-srpk2构建正确,且在HEK293T细胞中实现了srpk2基因过表达。真核重组表达质粒转染组HEK293T细胞中游离态α-Tubulin含量显著低于空载体转染组及空白对照组(P<0.05),而聚合态α-Tubulin水平明显高于空载体转染组及空白对照组(P<0.05)。结论成功构建了srpk2基因的真核重组表达质粒,SRPK2可促进α-Tubulin微管蛋白聚合。

丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2基因真核表达质粒的构建及其对HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的构建小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2(serine/arginine-rich protein specific kinase 2,SRPK2)基因真核表达质粒,建立稳定过表达SRPK2的He La细胞系,并探讨SRPK2过表达对He La细胞增殖和凋亡的影响。方法利用RT-PCR从小鼠睾丸组织中扩增SRPK2基因,与p3×Flag-CMV-14质粒连接,构建重组真核表达质粒p3×Flag-CMV-14-SRPK2,转染He La细胞,通过G418筛选获得稳定转染细胞系。采用RT-PCR检测稳定转染He La细胞系中SRPK2基因的转录,Western blot检测SRPK2的表达;MTT法和流式细胞术分别检测SRPK2过表达对He La细胞增殖和凋亡的影响。结果菌落PCR、双酶切及DNA测序表明重组真核表达质粒p3×Flag-CMV-14-SRPK2构建正确;RT-PCR和Western blot分析表明SRPK2基因在He La细胞中稳定过表达;p3×Flag-CMV-14-SRPK2稳定转染组细胞增殖活力明显高于p3×Flag-CMV-14转染组和未转染组(P<0.05),细胞凋亡率明显低于上述两组(P<0.05)。结论成功构建了SRPK2基因的真核表达质粒,建立了稳定过表达SRPK2的He La细胞系,SRPK2过表达可增强He La细胞的增殖活力,而抑制其凋亡。