培养细胞SAA3启动子调控基因表达及对炎症信号的响应特性研究

目的：利用构建的血清淀粉样蛋白启动子（SAA3）报告基因表达载体观察SAA3启动子／增强子应用于调控目的基因在培养细胞株的表达及对炎症刺激的响应特性，探索SAA3用于调控靶基因的可能性。方法：pSAA3CAT3采用脂质体转染U937细胞、肝细胞株SMMC7721，48h后LPS、重组rIL－6＋rIL-1、巨噬细胞活化上清（CM）攻击、测定不同时间CAT的诱导表达（ELISA法）。结果：LPS活化的转染U937细胞，6hCAT开始表达，24h达峰值，LPS活化后4．6倍增加CAT基因的表达，72h开始下降；重组rIL－6＋rIL－1联合诱导，10％、20％CM诱导转染SMMC7721细胞24h可启动报告基因表达，20％的条件活化上清诱导作用显著，6h始启动，36～48h达峰值，96h下降；本研究结果显示在0．1～62．5ng／ml的剂量范围内，rIL－6＋rIL－1联合诱导剂量依赖诱导转染U937细胞、SMMC7721细胞报告基因CAT的表达。结论：本研究证实SAA3启动子转录调控序列（－306～＋47）可启动SMMC7721、U937细胞转染报告基因CAT表达．SAA3启动子适用于构建炎症诱导性表达载体，将为基因治疗的表达调控提供新治疗策略及方法。

SAA3启动子调控的炎症诱导表达系统体内表达及对内毒素响应特性研究

目的：探索应用血清淀粉样蛋白启动子（ＳＡＡ３）调控下游基因的可能性，利用构建的ＳＡＡ３ 启动子／氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）表达载体观察ＳＡＡ３ 启动子／增强子应用于调控目的基因体内表达特性及对体内炎症信号刺激的响应特性。方法：小鼠随机分２组，采用腹腔注射法转染脂质体／ＤＮＡ复合物，４８ ｈ 后ＬＰＳ攻击，测定ＬＰＳ攻击后不同时间ＣＡＴ的诱导表达（ＥＬＩＳＡ法）及不同时间的血清ＩＬ－６ 水平（ＥＬＩＳＡ法）。结果：ＬＰＳ攻击可诱导转染小鼠ＣＡＴ在肝、肺表达，ＬＰＳ活化迅速诱导肝脏ＣＡＴ表达，１２ ｈ 达３．７４ｎｇ／ｍｇ 蛋白，３６～４８ ｈ 维持较高的表达水平，９６ ｈ 下降；小鼠血清ＩＬ－６的水平与肝脏ＣＡＴ表达显著正相关ｒ＝ ０．８７。结论：本研究证实ＳＡＡ３ 启动子转录调控序列（－ ３０６～＋ ４７）在体内可响应炎症刺激灵敏启动、诱导下游的报告基因ＣＡＴ表达，适合于构建自适应炎症诱导性表达载体。

维持性血液透析患者血清SAA、YKL-40、HBP与透析导管相关性感染及预后的相关性分析

目的探讨维持性血液透析(MHD)患者血清淀粉样蛋白A(SAA)、几丁质酶3样蛋白1(YKL-40)、肝素结合蛋白(HBP)与透析导管相关性感染及预后的相关性。方法选取2020年1月至2022年10月河南南阳市第二人民医院收治的124例维持性血液透析患者为研究对象。根据患者是否发生透析导管相关感染分为感染组(28例)及非感染组(96例),比较两组血清SAA、YKL-40、HBP水平;根据治疗30 d后随访情况分为预后良好组(104例)及预后不良组(20例),分析影响MHD患者预后的独立影响因素,分析血清SAA、YKL-40、HBP单一及联合检测对MHD患者预后情况的预测价值。结果感染组患者血清SAA、YKL-40、HBP水平均高于非感染组,差异有统计学意义(t=56.461、7.902、42.037,P<0.05);预后良好组患者C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、降钙素原(PCT)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、SAA、YKL-40、HBP水平低于预后不良组,差异有统计学意义(t=3.668、23.009、17.639、6.656、13.821、45.366、7.849、43.443,P<0.05);Logistic分析显示,CRP、TNF-α、PCT、Scr、BUN、SAA、YKL-40、HBP是MHD患者预后不良的危险因素(P<0.05);血清SAA、YKL-40、HBP单一及联合预测MHD患者预后AUC分别0.894、0.749、0.818、0.964,联合预测优于单一预测(P<0.05)。结论MHD合并透析导管相关性感染患者血清SAA、YKL-40、HBP水平较无合并感染患者升高,血清SAA、YKL-40、HBP联合检测对MHD患者预后情况具有良好的预测价值。

类风湿关节炎患者血清SAA、CCL20、MMP-3表达水平及临床意义

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者血清淀粉样蛋白A(SAA)、趋化因子配体20(CCL20)及基质金属蛋白酶3(MMP-3)水平变化及临床意义。方法回顾性选取2020年9月至2023年1月大同市第五人民医院收治的RA患者108例作为研究对象,依据28个关节的疾病活动度评分(DAS28)评分,将患者分为缓解期组(n=35,DSA28评分<2.6)与活动期组(n=73,DSA28评分≥2.6),并将活动期患者进一步分为轻度活动期(n=20,DSA28评分2.6~3.2)、中度活动期(n=29,DSA28评分>3.2~5.1)与重度活动期(n=24,DSA28为>5.1);另选取同期健康体检者80名作为对照组。所有受试者均检测血清SAA、CCL20、MMP-3水平。比较不同组别血清SAA、CCL20、MMP-3水平;使用Pearson相关分析血清SAA、CCL20、MMP-3水平与红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)的相关性;使用受试者工作特征(ROC)曲线评价各指标对RA疾病活动度的诊断价值。结果RA组血清SAA、CCL20、MMP-3水平分别为(42.25±13.46)mg/L、(45.69±12.78)pg/mL、(85.41±25.14)ng/mL,均显著高于对照组[(7.14±2.12)mg/L、(18.12±5.47)pg/mL、(27.36±8.21)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。RA活动期组患者血清SAA、CCL20、MMP-3水平分别为(51.78±10.71)mg/L、(53.14±10.45)pg/mL、(106.10±20.39)ng/mL,显著高于缓解期组[(22.37±7.14)mg/L、(30.15±8.24)pg/mL、(42.25±13.64)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。重度活动度组血清SAA、CCL20、MMP-3水平均高于中度活动度组和轻度活动度组,差异均有统计学意义(P<0.05),随着疾病活动度提高,血清SAA、CCL20、MMP-3水平逐渐增高。Pearson相关分析显示,活动期RA患者血清SAA、CCL20、MMP-3水平与CRP、ESR均呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析得出,血清SAA、CCL20、MMP-3区分RA轻度活动度与中度活动度的曲线下面积(AUC)分别为0.852、0.756、0.725,区分中度活动度与重度活动度的AUC分别为0.852、0.756、0.725,均显示出一定的诊断能力。结论RA患者血清SAA、CCL20、MMP-3水平均呈高表达,这3项指标可作为评估疾病活动度的生物标志物,可为临床预测病情进展提供参考。

血清淀粉样蛋白A、β-防御素-3水平检测在四肢开放性骨折术后切口感染中价值

目的探究血清淀粉样蛋白A(SAA)、β-防御素-3(HBd-3)水平在四肢开放性骨折术后切口感染中的监测价值。方法选取2019年2月—2020年10月在澄迈县人民医院行内固定手术治疗的四肢开放性骨折患者247例为研究对象。统计术后28 d术后切口感染情况,并依据是否发生术后感染分为感染组和未感染组。对比感染组和未感染组临床资料。Logistic多因素回归分析影响术后切口感染的因素。分析SAA、HBd-3及两者联合对术后切口感染发生的预测效能。结果四肢开放性骨折患者术后感染率为21.05%。感染组骨折至入院时间、合并基础疾病占比、Gustilo分型Ⅲ型占比、择期手术占比、未预防使用抗生素占比及SAA水平均高于未感染组(P<0.05),HBd-3水平则低于未感染组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,Gustily分型Ⅲ型、未预防使用抗生素、SAA及HBd-3均为四肢开放性骨折患者发生术后感染的影响因素(OR=3.114、3.184、4.204、4.0.35)。ROC分析显示,SAA、HBd-3两者联合预测术后切口感染发生的AUC为0.845,高于SAA、HBd-3单独预测的AUC(P<0.05)。结论SAA、HBd-3两者联合对四肢开放性骨折术后切口感染的预测效能较高,可作为评估该类患者术后切口是否发生感染的重要参考指标。

探索结直肠癌血清外泌体有效分子标志物

目的基于血清外泌体数据结合加权基因共表达算法(WGCNA)和蛋白-蛋白互作分析(PPI)筛选结直肠癌(CRC)患者有效血清标志物,为预测CRC的发生提供帮助。方法从外泌体数据库(http://www.exorbase.org/)中下载健康人群和CRC患者血清外泌体基因表达数据,采用WGCNA和PPI对由118例健康人群和35例CRC患者组成的数据集进行分析,并利用外部的癌症基因组图谱(TCGA)数据库、GEO(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)数据库中GSE192667和GSE24549数据集、R2预后平台(https://hgserver1.amc.nl/cgi-bin/r2/main.cgi)、CancerSEA(http://biocc.hrbmu.edu.cn/CancerSEA/)单细胞数据集和TIMER(https://cistrome.shinyapps.io/timer/)网站分析和验证核心分子。结果外泌体数据库中CRC患者较健康人群上调基因有5078个,下调基因有13004个。基于WGCNA和PPI算法获得了甘油醛3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH)和微管蛋白α-1B基因(TUBA1B)作为核心分子。并通过内部数据集验证GAPDH和TUBA1B表达与CRC发生相关,可以作为有效的血清外泌体分子标志物。同时,外部TCGA数据集中上述两个基因在肿瘤组织中均高表达,在R2生存平台中高表达GAPDH和TUBA1B患者预后更差。同时在GSE192667和GSE24549数据集也获得了相似的结果。基于GSE192667数据集构建并验证了生存风险模型[生存风险模型得分=GAPDH表达量×0.0015+TUBA1B表达量×(-0.0002)]。利用CancerSEA网站和TIMER网站并结合基因集富集分析(GSEA)发现核心分子涉及了多个肿瘤相关通路和功能。结论利用血清外泌体数据库结合WGCNA和PPI算法,筛选获得的GAPDH和TUBA1B可以作为CRC患者有效的血清外泌体分子标志物。

血清25-羟维生素D_(3)、白细胞介素-6及血清淀粉样蛋白A在儿童肺炎中的应用研究

目的 探讨血清25-羟维生素D_(3)[25-(OH)D_(3)]、白细胞介素-6(IL-6)与血清淀粉样蛋白A(SAA)水平在不同类型儿童肺炎中的变化及相关性。方法 选取该院儿科2021年2月至2022年4月收治确诊的肺炎患儿90例为观察组,根据标准分为普通肺炎组(60例)和重症肺炎组(30例);另依据感染类型分为细菌感染组(39例)、病毒感染组(35例)、肺炎支原体感染组(16例)。再选取同期近期无感染史的健康儿童30例为对照组。对比各组25-(OH)D_(3)、IL-6与SAA水平;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析评价25-(OH)D_(3)、IL-6及SAA对儿童肺炎的诊断价值。结果 (1)普通肺炎组、重症肺炎组血清IL-6、SAA水平均明显高于对照组,25-(OH)D_(3)水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);重症肺炎组血清25-(OH)D_(3)、IL-6、SAA水平与普通肺炎组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)25-(OH)D_(3)在细菌感染组、病毒感染组、肺炎支原体感染组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);细菌感染组血清IL-6、SAA水平均高于病毒感染组和肺炎支原体感染组(P<0.05);肺炎支原体感染组SAA水平高于病毒感染组(P<0.05)。(3)SAA、IL-6、25-(OH)D_(3)单项检测诊断肺炎的曲线下面积(AUC)分别为0.770、0.697、0.561;SAA、IL-6、25-(OH)D_(3)联合检测诊断肺炎的AUC可提升至0.841,诊断效能优于各指标单项检测。结论 血清25-(OH)D_(3)、IL-6及SAA可作为儿童肺炎的监测指标,对评估肺炎病情变化有指导意义,三者联合检测可提高对肺炎的诊断效能。

血清淀粉样蛋白A诱导中性粒细胞胞外诱捕网形成

目的探究血清淀粉样蛋白A(SAA)能否在体外诱导中性粒细胞形成中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)。方法建立稳定的体外诱导NETs形成方法,包括外周血中性粒细胞的分离、细胞体外培养、NETs的诱导和形态学观察。提取健康志愿者的外周血中性粒细胞,分为阴性对照(NC)组、SAA组和脂多糖(LPS)组,给予相应的刺激后,观察NETs的形成并计算百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清中人组蛋白3(h3)的含量。结果提取的外周血中性粒细胞纯度与细胞活力均在95%以上。显微镜下观察到部分细胞的细胞核失去原有核型,向外扩散形成网状,即NETs。与NC组相比,接受SAA刺激的中性粒细胞有更多的NETs形成(P<0.05)。培养液上清中的h3含量显著高于NC组(P<0.05)。结论 SAA可在体外诱导中性粒细胞形成NETs。

腺病毒介导IκBα基因在体外培养U_(937)细胞中的表达及效应研究

目的 通过构建IκBα基因的腺病毒表达载体 ,并用急性相反应蛋白SAA3 启动子来指导目的基因IκBα的表达 ,体外观察在炎性刺激后IκBα蛋白的诱导性表达特性及对NF κB活性的调控作用 ,对炎症介质产生的抑制效应。方法 采用DNA重组与同源重组技术 ,构建含只响应病理信号的启动子 急性相反应蛋白启动子SAA3 、目的基因IκBα的炎症诱导性复制缺陷型重组腺病毒载体 (AdIκBα)。应用AdIκBα,选择在炎症反应中具有代表意义的巨噬细胞 ,观察AdIκBα在体外培养巨噬细胞U93 7中诱导性表达IκBα(Westernblot)、对NF κB活性的调控 (EMSA)及体外效应。结果 ①成功构建炎症诱导性IκBα表达质粒 (pAdpLplSAA3 NLSIκBα) ,该表达框含SAA3 启动子 ,SV40 大T抗原核定位信号 (NLS) ,IκBαcDNA和ployA ;②pAdpLpLSAA3 NLSIκBα质粒与pJM1 7同源重组 ,脂质体 (DOTAP)介导 ,共转染入 2 93细胞。PCR法筛选阳性克隆 ,获得重组腺病毒 (AdIκBα) ;③用 2 93细胞扩增AdIκBα;采用反复冻融法纯化腺病毒 ,获得高滴度 (5× 1 0 1 0 pfu/ml)重组腺病毒 ;④体外实验 ,用 50MOIAdIκBα预感染体外培养的U93 7细胞 ,再用LPS攻击后 ,该腺病毒诱导性表达IκBα蛋白 (Westernblot) ,且表达的IκBα能抑制NF κB的活化 (EMSA)

SAA蛋白与BCL-2、Caspase-3及NF-κB关系的研究

目的:探讨血清淀粉样蛋白A(SAA)的超表达和抑制表达对BCL-2、Caspase-3及NF-κB这3种信号分子蛋白表达的影响。方法:将课题组前期已构建成功的pc DNA3.1(+)-SAA超表达载体和p GPU6/GFP/Neo-SAA表达干扰载体采用脂质体法分别转染鼻咽癌CNE2细胞,建立SAA蛋白超表达的pc DNA3.1(+)-SAA-CNE2细胞系和干扰SAA蛋白表达的p GPU6/GFP/Neo-SAA-CNE2细胞系。pc DNA3.1(+)-SAACNE2细胞、CNE2细胞、p GPU6/GFP/Neo-SAA-CNE2细胞中SAA蛋白的表达量会逐渐减少,当SAA蛋白的表达量改变时,通过免疫印迹法检测BCL-2、Caspase-3及NF-κB在pc DNA3.1(+)-SAA-CNE2细胞、CNE2细胞、p GPU6/GFP/Neo-SAA-CNE2细胞中的表达。结果:SAA蛋白的表达在pc DNA3.1(+)-SAA-CNE2细胞系中明显增多(P<0.05),在p GPU6/GFP/Neo-SAA-CNE2细胞系中显著减少(P<0.05),由此可知,pc DNA3.1(+)-SAA超表达载体和p GPU6/GFP/Neo-SAA表达干扰载体成功转染CEN2细胞。免疫印迹检测结果示:随着SAA蛋白表达的增多,BCL-2的表达增多(P<0.05)、Caspase-3及NF-κB的表达减少(P<0.05)。结论:SAA蛋白在人鼻咽癌CNE2细胞中的表达与抑制凋亡的BCL-2蛋白表达有协同作用,对凋亡调节分子Caspase-3及NF-κB蛋白的表达有抑制作用,可推测SAA蛋白可能有促进肿瘤生长、转移的作用。

富硒姬松茸提取物-硒蛋白多糖处理小鼠血清对K_(562)细胞凋亡的影响及机制

目的:探讨富硒姬松茸提取物-硒蛋白多糖(SPP)处理的小鼠血清在体外对K562细胞凋亡的影响及机制。方法:采用血清药理学法制备SPP处理血清,MTT法观察SPP处理的小鼠血清(终浓度10%)对K562细胞增殖的影响;从形态学、DNA电泳技术观察凋亡发生,比色法检测凋亡相关基因Caspase-3的表达。结果:SPP处理的小鼠血清可显著抑制白血病K562细胞生长,且呈时间剂量依赖性。形态学和DNA电泳结果均证实有凋亡发生。与空白血清组比较,Caspase-3基因上调明显。SPP处理的荷瘤小鼠血清抗肿瘤效果明显优于正常小鼠的处理血清。结论:SPP处理的荷瘤小鼠血清可促K562细胞凋亡,其机制可能与上调Caspase-3基因有关。

AB诱导海马神经元凋亡的机制及补肾方的调控作用

目的 探讨 Aβ诱导海马神经元凋亡的机制及补肾方的药效。方法 原代培养的大鼠海马神经元经 Aβ1 - 4 2处理后 ,FDA与 PI双染判断神经元存活率 ,Hoechst332 58染色、TUNEL检测神经元凋亡 ,免疫细胞化学观察 Caspase- 3表达 ,Northern Blot、RT- PCR研究凋亡相关基因的表达。结果 神经元经 Aβ1 - 4 2处理后 ,活细胞数减少 ,染色质浓缩、核碎裂 ,TUNEL染色阳性神经元增多 ,Caspase- 3表达增加 ,bcl- 2的 m RNA表达减少 ,而 bax与 c- jun表达增加、c- fos的表达变化不明显。补肾方可明显改善上述变化。结论 Aβ通过对凋亡相关基因表达的调控并经 Caspase-3途径引起神经元凋亡。补肾方可抑制

沙库巴曲缬沙坦对慢性心力衰竭患者Gal-3和sST2的影响

目的分析沙库巴曲缬沙坦在慢性心力衰竭患者治疗中的应用价值。方法选择该院2018年10月至2019年6月收治的124例慢性心力衰竭患者为研究对象,随机分成对照组和观察组,每组62例。对照组给予基础治疗和缬沙坦治疗,观察组给予基础治疗和沙库巴曲缬沙坦治疗。观察2组患者治疗有效率、血清半乳糖凝集素3(Gal-3)、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)水平、左心室射血分数、心输出量、生活质量等。在治疗过程中,观察2组的不良反应发生情况。结果治疗4周后,观察组总有效率高于对照组(P<0.05);观察组Gal-3、sST2水平均低于对照组(P<0.05);观察组左心室射血分数、心输出量均优于对照组(P<0.05);观察组生活质量优于对照组(P<0.05)。结论沙库巴曲缬沙坦用于慢性心力衰竭的治疗,可调节患者的Gal-3、sST2水平,改善心功能。

调心方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元凋亡的调控作用

目的 探讨调心方的药效及作用机制。方法 原代培养大鼠海马神经元 ,Aβ 1- 42诱导神经细胞毒模型。采用 FDA与 PI双染检测神经元存活率 ,Hoechst332 5 8染色、TUNEL 判断神经元凋亡 ,免疫细胞化学研究 Caspase-3表达 ,Northern Blot、RT- PCR研究凋亡相关基因 (bcl- 2、bax、c- jun、c- fos)表达。结果 神经元经 Aβ l- 42处理后 ,活细胞数减少 ,染色质浓缩、核碎裂 ,TU NEL 染色阳性神经元增多 ,Caspase- 3表达增加 ,bcl- 2 m RNA表达减少 ,而 bax与 c- jun表达增加、c- fos的表达变化不明显。调心方可显著改善上述变化。结论 调心方对 Aβ1- 42神经细胞毒有保护作用 ,可提高细胞存活率 ,抑制凋亡。其机制可能通过提高 bcl- 2 m RAN水平 ,降低 bax和 c- jun m RAN水平 ,减少 Caspase-

乌鸡白凤丸对Aβ_(1-40)诱导的大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的研究乌鸡白凤丸(BFP)对β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)诱导体外培养大鼠海马神经元凋亡的保护作用以及可能的作用机制。方法体外培养新生Wistar大鼠海马神经元,MTT法检测不同浓度Aβ1-40的细胞毒作用,选择出现显著细胞毒性的剂量为使用剂量。同时给予BFP(100 mg/L)干预。用原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡情况,用半定量RT-PCR技术检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3基因mRNA的表达水平。结果10μmol/L Aβ1-40与海马神经元共孵育24 h有明显的细胞毒作用,并可诱导神经元凋亡,加入BFP干预后凋亡指数降低。Aβ1-40可使bcl-2基因表达下调,bax基因表达上调,caspase-3基因的表达增强。加入BFP干预后,部分拮抗了Aβ1-40诱导的bcl-2基因的表达变化,从而使caspase-3基因的表达降低。结论BFP可通过调控bcl-2/bax的比值、降低caspase-3基因mRNA的表达来阻断Aβ1-40所诱导的海马神经元凋亡,具有神经保护作用。

载脂蛋白H基因多态性与冠心病及血脂代谢关系的研究

目的探讨载脂蛋白H(ApoH)外显子3、8基因多态性与冠心病(CHD)、血脂代谢的关系。方法采用聚合酶链式反应-单链构象多态技术(PCR-SSCP)分析方法,分析了100例健康人及110例CHD患者的ApoH外显子3,8基因型及血脂测定。结果(1)CHD组外显3 GG基因型的频率为81.8%,GA+AA基因型频率为18.2%,G等位基因频率为88%,A等位基因频率是12%,与对照组比较无差异。(2)CHD组外显子8 GG基因型频率为74.5%,GC基因型频率为25.5%,G等位基因频率为87%,C等位基因频率为13%,与对照组比较CHD组的GC基因型频率及C等位基因频率显著增高。(3)外显子3 CHD组低密度胆固醇(LDL-C)高于对照组(P<0.05),CHD组及对照组各基因型间的血脂水平无差异;(4)外显子8 CHD组LDL-C也显著高于对照组(P<0.05),CHD组GC基因型的甘油三酯(TG)显著高于GG型和及对照组的各基因型。结论(1)ApoH外显子3基因多态性与CHD及血脂代谢无相关性;(2)ApoH外显子8 GC基因型及C等位基因与CHD有关,ApoH外显子8基因多态性与TG有关。

5例应用恩替卡韦治疗的慢性HBV感染者发生HBV逆转录酶区单独A181位点突变的分析

目的探讨恩替卡韦与HBV逆转录酶区单独A181位点突变的关系。方法对5例应用恩替卡韦治疗后逆转录酶区出现单独A181位点突变的慢性HBV感染者做回顾性调查与随访,并分析其突变前后病毒学指标的变化。结果 5例应用恩替卡韦治疗的慢性HBV感染者中,3例发生逆转录酶区A181V突变的病例均对恩替卡韦产生了应答,2例发生逆转录酶区A181T突变的病例血清HBV DNA也出现了明显下降。结论 5例应用恩替卡韦治疗的慢性HBV感染者逆转录酶区的单独A181位点的突变为自然产生,HBV逆转录酶区发生自然突变的临床意义需要进一步明确。

Caspase-3沉默对缺血缺氧大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

【目的】探讨沉默caspase-3对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)在体外缺血缺氧环境下凋亡的影响。【方法】构建靶向caspase-3的shRNA重组慢病毒并转染MSC。建立缺血缺氧模型,流式细胞术和Hoechst荧光染色法检测细胞的凋亡情况。Western blot检测caspase-3的蛋白表达,Real-time PCR检测caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA表达。【结果】重组慢病毒成功转染MSC。缺血缺氧环境下,转染组的细胞凋亡率为(13.66±0.20)%,低于空载体组的(21.86±0.43)%和空白对照组的(22.28±0.48)%(P<0.01)。沉默caspase-3后caspase-3表达下调,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05)。【结论】沉默caspase-3能显著提高MSC在缺血缺氧环境下的存活能力。

人肺泡型细胞A549在大肠埃希菌诱导下非特异性免疫分子的表达

目的:呼吸道上皮细胞在呼吸道固有免疫应答中起重要作用,文中探讨呼吸道上皮细胞对大肠埃希菌(E.coli)的应激反应能力及其作用机制。方法:常规体外培养A549细胞,细胞传代24h后加入灭活的E.coli,进行不同浓度或时间的诱导;用半定量RT-PCR法检测其细胞中白细胞介素(IL)-6、补体C3和C-反应蛋白(CRP)mRNA水平;ELISA法检测其上清液中IL-6、CRP和血清淀粉样蛋白A(SAA)蛋白水平,免疫比浊法检测其上清液中C3蛋白水平。结果:培养的A549细胞在不同浓度和不同时间的E.coli诱导下,表达IL-6、C3和CRP mRNA及IL-6、C3、CRP和SAA蛋白水平呈浓度和时间的依赖性。与对照组相比,均有显著性差异(P<0.05)。结论:呼吸道上皮细胞在病原微生物刺激下,表达多种非特异性免疫效应分子,积极清除外来致病物,发挥重要的固有免疫防御作用。上皮细胞还可能在固有免疫和适应性免疫之间起连接作用。

β淀粉样肽对神经母细胞瘤细胞Notch信号通路的影响

目的:研究β淀粉样肽(Aβ)处理SH-SY5Y细胞以及α3神经型尼古丁受体(α3 nAChR)沉默细胞后细胞Notch信号通路的变化。方法:2μmol/L Aβ处理SH-SY5Y细胞以及α3 nAChR沉默细胞,用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real Time PCR)和蛋白印迹(western blot)方法分别检测细胞中Notch信号通路中Notch1和Hes1的mRNA及蛋白水平的变化,评价Aβ对细胞Notch信号通路的影响。结果:Aβ处理的SH-SY5Y细胞以及α3 nAChR沉默细胞中Notch1和Hes1的mRNA及蛋白水平表达均增加,且在α3 nAChR沉默细胞中增加更为明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Aβ可增加细胞Notch信号通路基因表达,α3 nAChR沉默会增强Aβ对Notch信号通路基因表达的影响,这可能与阿尔茨海默氏病(AD)的发病有一定的关系。