食管癌患者血清miR-134和miR-149表达及其临床意义

目的探讨食管癌患者血清miR-134和miR-149的表达及其临床意义。方法选取2020年4月—2022年10月合肥市第三人民医院食管癌患者132例(食管癌组)、食管良性疾病患者125例(良性对照组)和健康体检者130名(正常对照组)。收集所有研究对象的一般资料,并检测血清miR-134、miR-149相对表达量和癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)125、CA72-4水平。采用Pearson相关分析评估血清miR-134、miR-149与CEA、CA125、CA72-4的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清miR-134、miR-149单项检测和联合检测诊断食管癌的效能。结果食管癌组血清miR-134相对表达量和CEA、CA125、CA72-4水平均高于良性对照组、正常对照组(P<0.05),良性对照组均高于正常对照组(P<0.05);食管癌组miR-149相对表达量均低于良性对照组和正常对照组(P<0.05),良性对照组miR-149相对表达量低于正常对照组(P<0.05)。食管癌组CEA、CA125和CA72-4阳性率均高于良性对照组和正常对照组(P<0.05)。不同肿瘤直径、分化程度和有无淋巴转移的食管癌患者之间血清miR-134、miR-149相对表达量差异均有统计学意义(P<0.05)。食管癌患者血清miR-134与CEA、CA125、CA72-4均呈正相关(r值分别为0.425、0.419、0.457,P<0.001),血清miR-149与CEA、CA125、CA72-4均呈负相关(r值分别为-0.529、-0.534、-0.458,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-134、miR-149单项检测诊断食管癌的AUC分别为0.768、0.773,miR-134+miR-149的AUC为0.910,CEA+CA125+CA 72-4的AUC为0.901,5项指标联合检测的AUC为0.916。结论食管癌患者血清miR-134、miR-149均呈异常表达,且与病情密切相关,或可作为食管癌辅助诊断和病情监测的指标。

姜黄素调控miR-134对癫痫海马突触重塑的实验研究

目的探讨姜黄素通过调控miR-134发挥神经保护及潜在抗癫痫作用的机制。方法按照随机数字表法将48只大鼠分为对照组、癫痫组和姜黄素组3组,每组16只。除对照组外,其余两组采用氯化锂-匹罗卡品诱导制备癫痫持续状态大鼠模型。造模后第2天开始,姜黄素组大鼠每天固定时间腹腔注射2 mL/kg姜黄素,而癫痫组和对照组每天固定时间腹腔注射等量二甲基亚砜溶液,持续10 d。在造模后第14天,通过颈椎脱臼法处死3组大鼠,采用Timm染色观察大鼠海马组织中苔藓纤维出芽程度,qRT-PCR法检测大鼠海马组织及血清中miR-134表达水平,Western blot法检测大鼠海马组织中LIM激酶1(LIMK1)蛋白表达水平。结果与对照组比较,癫痫组大鼠齿状回和CA3区苔藓纤维出芽程度评分均升高(均P<0.05);与癫痫组比较,姜黄素组大鼠齿状回和CA3区苔藓纤维出芽程度评分均降低(均P<0.05)。与对照组比较,癫痫组大鼠海马组织中miR-134表达水平升高(P<0.05),LIMK1蛋白表达水平下降(P<0.05);与癫痫组比较,姜黄素组大鼠海马组织中miR-134表达水平下降(P<0.05),LIMK1蛋白表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,癫痫组和姜黄素组大鼠血清中miR-134表达水平均下降(均P<0.05)。结论姜黄素可抑制癫痫持续状态大鼠海马组织中miR-134表达,上调LIMK1蛋白表达水平,影响突触重塑,可能因此发挥神经保护及潜在的抗癫痫作用。

重度子痫前期患者血清miR-134-5p和Let-7a表达水平及临床意义

目的 分析重度子痫前期(Severe preeclampsia, SPE)患者血清微小RNA(microRNA,miR)-134-5p和Let-7a表达水平及临床意义。方法 选取已确诊妊娠高血压孕妇100例为研究对象,其中子痫前期(preeclampsia, PE)孕妇40例、SPE孕妇60例。同期在本院孕检的正常妊娠女性100例为对照组。实时荧光定量PCR(real-time quantitative pcr, qRT-PCR)法检测血清中miR-134-5p、Let-7a相对表达水平;Pearson法进行相关性分析;多因素Logistic回归分析SPE的影响因素。结果 对照组、PE组、SPE组血清中miR-134-5p、Let-7a水平比较,差异有统计学意义(F=288.012、251.780,P<0.001);其中,PE组、SPE组血清中miR-134-5p、Let-7a水平均高于对照组(P<0.05),SPE组血清中miR-134-5p、Let-7a水平均高于PE组(P<0.05)。PE组和SPE组收缩压、舒张压、尿蛋白、肌酐、乳酸脱氢酶、血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、平均血小板体积(mean platelet volume, MPV)、白蛋白(albumin, ALB)水平、新生儿身长、新生儿体重比较差异有统计学意义(均P<0.05)。PE患者血清中miR-134-5p表达水平与新生儿身长呈负相关(r=-0.608,P<0.05),与收缩压、尿蛋白、乳酸脱氢酶呈正相关(r=0.613、0.548、0.635,均P<0.05);Let-7a表达水平与新生儿身长呈负相关(r=-0.587,P<0.05),与收缩压、尿蛋白、乳酸脱氢酶呈正相关(r=0.624、0.571、0.478,均P<0.05),PE患者血清miR-134-5p、Let-7a表达水平呈显著正相关(r=0.623,P<0.001)。收缩压(OR=1.527,95%CI:1.042~2.238)、尿蛋白(OR=1.825,95%CI:1.010~3.299)、miR-134-5p(OR=1.467,95%CI:1.023~2.104)、Let-7a(OR=1.523,95%CI:1.010~2.299)均是SPE发生的危险因素(P<0.05)。结论 SPE孕妇血清miR-134-5p、Let-7a水平显著升高,miR-134-5p、Let-7a与新生儿身长、收缩压、尿蛋白、乳酸脱氢酶具有相关性,是SPE发生的影响因素。

附子中次乌头碱调控miR-134对心肌细胞hERG通道的影响

目的从miRNA-hERG途径探索双酯型生物碱对心肌细胞毒性的调控机制。方法采用全细胞膜片钳技术测定hERG电流,实时荧光定量PCR测定基因表达水平,蛋白质免疫印迹实验测定蛋白表达。结果3种双酯型生物碱均可降低hERG蛋白和基因表达水平,抑制心肌细胞hERG通道开放率,次乌头碱抑制作用最为显著且呈剂量依赖性。次乌头碱促进miR-134表达量上升最明显,抑制miR-134表达后hERG蛋白基因表达水平显著上升,hERG蛋白基因表达抑制率降低。结论通过对miRNA表达进行修饰,次乌头碱可抑制hERG蛋白基因表达水平及hERG通道开放,此抑制效果可能是附子心脏毒性的重要组成部分。

circVANGL1/miR-134-5p/CDCA3轴调控乳腺癌干细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的探讨circVANGL1/miR-134-5p/细胞分裂周期相关因子3(CDCA3)轴调控乳腺癌干细胞增殖、迁移、侵袭的机制。方法收集2021年2月至2023年11月治疗乳腺癌患者的乳腺癌组织及相对应癌旁组织。体外培养乳腺癌MCF-7细胞干细胞亚群,根据不同处理方法将其分为Con组、si-NC组、si-circVANGL1组、pcDNA组、pcDNA-circVANGL1组、miR-NC组、miR-134-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-134-5p组、si-circVANGL1+anti-miR-134-5p组、si-circVANGL1+pcDNA-CDCA3组。采用qRT-PCR检测circVANGL1、miR-134-5p和CDCA3 mRNA在乳腺癌组织、癌旁组织及各组乳腺癌干细胞中的表达水平;Western blot检测CDCA3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平。双荧光素酶报告实验验证circVANGL1与miR-134-5p、miR-134-5p与CDCA3靶向关系;CCK-8实验检测乳腺癌干细胞增殖活性,划痕实验检测细胞迁移能力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果与癌旁组织比较,乳腺癌组织中circVANGL1、CDCA3 mRNA、CDCA3蛋白表达水平较高,miR-134-5p表达水平较低(P<0.05)。circVANGL1可靶向调控miR-134-5p的表达,miR-134-5p可靶向调控CDCA3蛋白的表达。干扰circVANGL1表达后,乳腺癌干细胞增殖活性、划痕愈合率、细胞克隆形成数、侵袭细胞数以及MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。下调miR-134-5p表达或过表达CDCA3可部分逆转干扰circVANGL1对乳腺癌干细胞增殖、迁移、侵袭的作用(P<0.05)。结论circVANGL1可能通过miR-134-5p/CDCA3轴调控乳腺癌干细胞的增殖、迁移、侵袭。

血清miR-134-5p和miR-320a检测联合肺功能指标对煤工尘肺患者的早期诊断价值

目的探讨血清miR-134-5p和miR-320a联合肺功能指标对尘肺患者早期临床诊断价值。方法选取煤工尘肺(CWP)患者(CWP组)、煤矿接尘体检人群(接尘组)以及同期健康体检人群(对照组)各40例;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组血清miR-134-5p和miR-320a水平。检测各组受试者的肺功能指标:最大通气量(MVV)、用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV1)、第3秒用力呼气容积(FEV3)、1秒率(FEV1/FVC)、3秒率(FEV3/FVC)、最大呼气中期流量(MMEF)、峰流速(PEF)、75%呼气流速(MEF75)、50%呼气流速(MEF50)、25%呼气流速(MEF25)、残气量/肺总量(TLC)、功能残气量(FRC)和肺泡通气量(VA);采用Logistic回归分析煤矿接尘相关作业的人群发生CWP的危险因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miRNA联合肺功能指标对CWP患者的早期诊断价值。结果对照组、接尘组和CWP组血清miR-134-5p、miR-320a表达水平,MVV、FEV1、FEV1/FVC、MMEF、MEF50、FRC和VA逐渐降低(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果发现FRC降低是煤矿接尘人群发生CWP的独立危险因素(P<0.05)。miR-134-5p和miR-320a联合肺功能指标FRC预测煤矿接尘相关作业的人群发生CWP的诊断效能较高,AUC为0.975(95%CI:0.948~1.000)。结论血清miR-134-5p、miR-320a和肺功能指标FRC联合对早期CWP的临床诊断具有重要参考价值。

miR-134-3p靶向细胞周期蛋白D1抑制胃癌细胞增殖的作用及机制

目的:研究miR-134-3p靶向细胞周期蛋白D1(CCND1)抑制胃癌细胞增殖的作用及机制。方法:收集手术切除的胃癌组织及癌旁组织,培养正常胃黏膜上皮细胞株GES-1及胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901、BGC-823,检测miR-134-3p、CCND1的表达水平;BGC-823细胞分组并转染阴性对照(NC)模拟物或miR-134-3p模拟物、感染NC腺病毒或CCND1腺病毒,检测细胞增殖抑制率、细胞周期比例、miR-134-3p及CCND1表达水平;双荧光素酶报告基因验证miR-134-3p与CCND1的靶向结合;饲养BALB/c裸鼠,皮下注射感染NC腺病毒或miR-134-3p腺病毒的BGC-823,成瘤后测定移植瘤质量、体积及CCND1表达水平。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-134-3p表达水平明显降低、CCND1表达水平明显升高(P<0.05),且miR-134-3p与CCND1呈负相关;与GES-1细胞相比,BGC-823、MGC-803、SGC-7901细胞中miR-134-3p表达水平明显降低,CCND1表达水平明显升高(P<0.05),且BGC-823细胞中miR-134-3p、CCND1表达变化最显著。与miR-NC组相比,miR-134-3p组BGC-823细胞的增殖抑制率、G2/M期细胞占比明显升高,G_(0)/G_(1)期及S期细胞占比、CCND1表达水平、CCND1报告基因的荧光活力明显降低(P<0.05);与miR-134-3p+Ad-NC组相比,miR-134-3p+Ad-CCND1组BGC-823细胞的增殖抑制率、G2/M期细胞占比明显降低,G_(0)/G_(1)期及S期细胞占比、CCND1表达水平明显升高(P<0.05);与miR-NC组相比,miR-134-3p组裸鼠移植瘤质量明显减轻,体积明显缩小,移植瘤中CCND1表达水平明显降低(P<0.05)。结论:miR-134-3p通过靶向抑制CCND1途径抑制胃癌细胞增殖及细胞周期。

检测miR-27、miR-134、miR-155对乳腺癌患者的临床价值研究

目的 探讨检测微小RNA(miR)-27、miR-134、miR-155对乳腺癌患者的临床应用价值。方法 回顾性分析2021-01—2022-05南阳市中心医院乳腺外科手术治疗并经病理学检查确诊的246例乳腺肿瘤患者的临床资料,按病理检查结果分为乳腺癌组(129例)和乳腺良性肿瘤组(117例)。检测2组患者的血清miR-27、miR-134、miR-155水平,以及不同病理特征乳腺癌患者的血清miR-27、miR-134、miR-155水平。分析血清miR-27、miR-134、miR-155水平和不同病理学参数关联性。评价联合检测血清miR-27、miR-134、miR-155的诊断价值。结果 乳腺癌组患者的血清miR-27、miR-134、miR-155水平高于乳腺良性肿瘤组;Ⅰ~Ⅱ期患者的水平低于Ⅲ期患者,高分化患者低于中、低分化患者,无转移患者低于有转移患者。差异均有统计学意义(P<0.05)。经Spearman分析结果显示,血清miR-27、miR-134、miR-155表达水平与TNM分期、转移呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05)。ROC曲线结果显示,联合检测血清miR-27、miR-134、miR-155诊断乳腺癌的AUC为0.901,敏感度为86.82%,特异度为92.31%,优于各指标单一诊断,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 血清miR-27、miR-134、miR-155水平在乳腺癌患者中呈高表达,且与病理特征存在关联性,联合检测具有较高的敏感度和特异度,可作为临床制订手术方案的依据。

急性脑梗死患者血清miR-134、miR-451表达水平与脑损伤标志物和预后不良的关系

目的研究急性脑梗死(ACI)患者血清微小RNA(miR)-134、miR-451表达水平与脑损伤标志物和预后不良的关系。方法选取2019年3月至2022年3月陕西省宝鸡高新医院收治的230例ACI患者作为观察组。另选取同期健康体检志愿者100例作为对照组。比较两组血清miR-134、miR-451表达水平与脑损伤标志物水平,采用Pearson相关分析明确血清miR-134、miR-451表达水平及视锥蛋白样蛋白1(VILIP-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平与ACI患者预后不良的相关性。随访3个月,将所有ACI患者按照改良Rankin量表评分差异分为预后良好组(143例)和预后不良组(87例),采用多因素Logistic回归分析ACI患者预后不良的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-134、miR-451及二者联合预测ACI患者预后不良的效能。结果观察组血清miR-134、miR-451表达水平及VILIP-1、NSE水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,血清miR-134、miR-451表达水平与VILIP-1、NSE水平均呈正相关(r=0.692、0.459、0.672、0.493,P<0.05)。预后不良组年龄、入院时美国国立卫生院脑卒中量表(NIHSS)评分、血清miR-134、miR-451表达水平及VILIP-1、NSE水平均高于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄升高、入院时NIHSS评分升高、血清miR-134、miR-451表达水平及VILIP-1、NSE水平升高均为ACI患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析发现,血清miR-134、miR-451单独预测ACI患者预后不良的ROC曲线下面积分别为0.784、0.802,低于两项联合的0.911。提示血清miR-134、miR-451联合预测ACI患者预后不良的效能优于两项指标单独预测。结论ACI患者血清miR-134、miR-451均呈异常高表达,与脑损伤标志物和预后不良均密切相关。

LncRNA PINK1-AS调节miR-134-5p/SERPINE1轴对胃癌细胞增殖凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探讨LncRNA PINK1-AS调节miR-134-5p/丝氨酸蛋白酶抑制剂分支E成员1(SERPINE1)轴对胃癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:qRT-PCR检测60例胃癌组织、癌旁组织中PINK1-AS、miR-134-5p、SERPINE mRNA的表达水平。体外培养胃癌细胞MKN28,将MKN28细胞分为control组、si-NC组、si-PINK1-AS组、pc-NC组、pc-PINK1-AS组、miR-NC组、miR-134-5p mimics组;qRT-PCR检测各转染组细胞PINK1-AS、miR-134-5p、SERPINE mRNA的表达水平,cck-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell实验细胞迁移和侵袭;western blot检测细胞SERPINE1、Ki-67、cleaved caspase-3、E-cadherin、N-cadherin、vimentin蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测LncRNA PINK1-AS和miR-134-5p、miR-134-5p和SERPINE1的靶向关系。结果:胃癌组织中PINK1-AS和SERPINE mRNA的表达显著高于癌旁组织,miR-134-5p表达低于癌旁组织(P<0.05)。下调PINK1-AS表达可降低MKN28细胞中PINK1-AS、SERPINE mRNA表达、OD450值(24、48h)、细胞迁移数和侵袭数、SERPINE1、Ki-67、N-cadherin、vimentin蛋白表达,提高miR-134-5p、细胞凋亡率、cleaved caspase-3、E-cadherin蛋白表达(P<0.05);过表达PINK1-AS可提高MKN28细胞中PINK1-AS、SERPINE mRNA表达、OD450值(24、48h)、细胞迁移数和侵袭数、SERPINE1、Ki-67、N-cadherin、vimentin蛋白表达,降低miR-134-5p、凋亡率、cleaved caspase-3、E-cadherin蛋白表达(P<0.05);过表达miR-134-5p可提高MKN28细胞中miR-134-5p表达、细胞凋亡率、cleaved caspase-3、E-cadherin蛋白表达,降低SERPINE mRNA、OD450值(24、48h)、细胞迁移数和侵袭数、SERPINE1、Ki-67、N-cadherin、vimentin蛋白表达(P<0.05)。结论:LncRNA PINK1-AS可调控miR-134-5p/SERPINE1轴进而影响胃癌细胞增殖、凋亡和EMT。

虾青素预处理通过调控Sirt1/miR-134信号通路改善脑缺血再灌注大鼠认知功能

目的:探究虾青素(ATX)预处理是否通过调控沉默信息调节因子1(Sirt1)/微小RNA-134(miR-134)信号通路影响脑缺血再灌注(CI/R)大鼠认知功能。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(CI/R组)、ATX低剂量(50 mg/kg)组(ATX-L组)、ATX高剂量(100 mg/kg)组(ATX-H组)和ATX(100 mg/kg)+Sirt1抑制剂EX527(10 mg/kg)组(ATX+EX527组),每组12只。分组完成后给予相应的药物进行预处理,每天1次,连续3 d。末次给药1 h后,建立CI/R大鼠模型。再灌注24 h后对大鼠进行神经功能缺损评分,并采用Morris水迷宫实验检测大鼠的认知功能;HE染色观察海马神经元损伤;TUNEL染色检测海马神经元凋亡;免疫组化法检测海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)的表达;RT-qPCR检测海马组织miR-134水平及Sirt1、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和BDNF mRNA表达;Western blot检测海马组织Sirt1、CREB和BDNF蛋白表达。结果:与sham组相比,CI/R组大鼠神经功能缺损评分、海马神经元凋亡率、miR-134水平和逃避潜伏期均增加,空间探索实验中在目标象限停留时间和穿越平台次数、Sirt1和BDNF的mRNA和蛋白表达、CREB的mRNA表达及p-CREB/CREB比值降低(P<0.05),海马神经元数量减少;与CI/R组相比,ATX-L组和ATX-H组大鼠神经功能缺损评分、海马神经元凋亡率、miR-134水平和逃避潜伏期均降低(P<0.05),在目标象限停留时间和穿越平台次数、Sirt1和BDNF的mRNA和蛋白表达、CREB的mRNA表达及p-CREB/CREB比值升高(P<0.05),海马神经元数量增加;在ATX干预的基础上使用EX527可明显上调miR-134的表达,减弱ATX对CI/R后大鼠认知功能的改善作用和对CREB/BDNF信号通路的激活作用。结论:ATX预处理可能通过调控Sirt1/miR-134信号通路,激活CREB/BDNF信号通路,进而改善CI/R后大鼠的认知功能。

过表达miR-134b抑制CD133^+ U87胶质瘤干细胞增殖及侵袭

目的探讨微小RNA-134b(miR-134b)在胶质瘤干细胞(GSC)中的作用及相关机制。方法实时定量PCR检测U87胶质瘤细胞系分离出的CD133^+ GSC和CD133^- GSC中miR-134b的表达量;包装慢病毒,构建过表达miR-134b的GSC,实时定量PCR检测其miR-134b、CD133、神经干细胞蛋白(nestin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9和MMP-12 mRNA表达水平;Western blot法检测过表达miR-134b的GSC中Notch2、MMP-2、MMP-9和MMP-12蛋白表达;Transwell^(TM)侵袭实验检测过表达miR-134b对GSC侵袭能力的影响;建立U87细胞裸鼠成瘤模型,皮下注射过表达miR-134b(实验组)及空载体(对照组)的CD133^+ GSC,定期测量肿瘤大小,70 d后处死裸鼠,测定肿瘤质量,以探讨过表达miR-134b对在体肿瘤生长的影响。结果实时定量PCR检测结果表明,与CD133^- GSC相比,CD133^+ GSC中miR-134b表达显著下调;通过慢病毒包装的方法成功构建过表达miR-134b的GSC,其miR-134b的表达显著高于空载体对照细胞,而MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达无显著变化,而MMP-12的mRNA及蛋白表达均显著下降;Transwell^(TM)侵袭实验结果表明,与对照组相比,过表达miR-134b抑制CD133^+ GSC的侵袭能力;实验组裸鼠体内肿瘤体积显著低于对照组,与对照组相比,过表达miR-134b的实验组肿瘤质量也降低了42%。结论过表达miR-134b抑制CD133^+ GSC的生长和侵袭。

肝癌组织miR-146b-5p和miR-134的表达下调及临床意义

目的探讨微小RNA(miR)-146b-5p和miR-134在肝癌组织中的表达及其临床病理意义。方法选取2017年6月~2018年12月我院收治的原发性肝癌患者73例,取患者的原发肿瘤组织为观察组,同时选取相对应的癌旁正常组织标本为对照组。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测癌组织和癌旁正常组织中miR-146b-5p和miR-134的表达水平,并分析两者的表达水平与临床病理特征的相关性。结果miR-146b-5p和miR-134在观察组中的相对表达量均低于对照组(P<0.05);miR-146b-5p的表达下调与肿瘤大小(>5cm)、无静脉浸润和TNM分期(Ⅲ/Ⅳ期)相关(均P<0.05);miR-134的表达下调与肿瘤大小(>5cm)、有肝硬化、TNM分期(Ⅲ/Ⅳ期)和无肿瘤包膜相关(均P<0.05)。结论肝癌组织中,miR-146b-5p和miR-134表达水平下调,可能参与肝癌的发生和发展,与肝癌临床恶性表型密切相关。

MiR-134在MA诱导神经元损伤中的表达及其对神经诱发动作电位的影响

【目的】探讨微小非编码RNA分子miR-134在甲基苯丙胺(MA)诱导PC12神经细胞损伤中的表达变化及其对神经兴奋性的影响,为理解MA导致神经损伤的机制提供实验基础。【方法】将处于对数生长期的PC12细胞分为对照组和MA组。MA组应用800μmol/L MA处理,建立体外神经元损伤模型,观察培养神经细胞损伤及细胞凋亡情况;采用实时荧光定量PCR技术测定miR-134的表达水平变化;并构建miR-134干扰载体,抑制miR-134后分析神经诱发动作电位的变化。【结果】MA可明显诱导PC12细胞损伤,神经突起变短,细胞凋亡数目增多;荧光定量PCR结果显示miR-134表达升高;电生理学检测结果显示,干扰miR-134后诱发动作电位增多。【结论】高浓度MA诱导神经细胞损伤、诱发神经元凋亡并升高miR-134表达,沉默miR-134表达,可增加神经兴奋性。本实验为阐明MA的神经损伤机制,以及miR-134在神经元毒性损伤及神经兴奋性中的可能作用提供了实验依据。

MiR-134通过靶向调节KRAS抑制786-0肾透明细胞癌细胞上皮间质转化过程

目的探索miR-134在肾癌组织中的表达并研究其对肾透明细胞癌细胞786-0上皮间质转化的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-134在20对肾癌组织和786-0细胞中的表达情况;miR-134模拟物转染786-0后,划痕实验和Transwell实验分别检测肾癌细胞迁移和侵袭能力的改变情况,Western blot检测细胞中靶蛋白KRAS及其相关信号通路蛋白表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-134与KRAS 3′-UTR结合情况。结果 MiR-134在20对肾癌组织和786-0细胞中明显低表达(P<0.01);miR-134模拟物转染后能够抑制肿瘤细胞侵袭(P<0.01)和迁移的能力(P<0.05),显著降低肿瘤细胞中KRAS蛋白的水平(P<0.05)并抑制RAS/MAPK/ERK通路中关键蛋白p-ERK的表达(P<0.05);双荧光素酶报告基因显示miR-134能与KRAS 3′-UTR结合,显著降低荧光值(P<0.05)。结论 MiR-134在肾透明细胞癌中显著低表达,能通过靶向抑制KRAS表达调控下游RAS/MAPK/ERK通路活性,阻滞786-0细胞上皮间质转化过程,抑制肿瘤细胞的侵袭和转移。

离体癫痫持续状态模型中抑制miR-134对树突棘的影响

目的探讨抑制miR-134对原代培养神经元树突棘的影响。方法 (1)构建大鼠miR-134抑制慢病毒载体并验证;(2)培养海马神经元,建立无镁离体癫痫持续状态SE模型,利用离子扫描显微镜研究miR-134抑制对癫痫持续状态SE模型中神经元树突棘密度的影响。结果 (1)将一段362bp包含2个miR-134竞争结合位点的DNA片段经XhoI和EcoRI酶切后插入质粒pCDH-CMV-MCS-EG(R)FP-MCS中E(R)GFP序列的下游,该片段转录产物与miR-134互补形成稳定的复合物,从而阻止了miR-134对靶mRNA的降解或翻译抑制,得到大鼠miR-134抑制慢病毒载体;(2)同对照病毒组相比,miR-134抑制慢病毒预处理组经无镁细胞外液处理后(离体癫痫持续状态模型)神经元树突棘密度减少(P<0.05)。结论 MiR-134可能在树突棘重塑过程中扮演重要角色。

氟西汀对CUMS模型组大鼠血浆miR-34a miR-134 miR-143表达的影响

目的 探讨血浆miR-34a、miR-134、miR-143成为抑郁行为严重程度和药物疗效的客观评估指标的可能性.方法 将40只雄性SD大鼠分为4组,干预组、模型组、模型＋干预组、对照组各10只,采用慢性不可预见性应激的方法建立抑郁模型,采用旷场实验评价大鼠行为. 结果 应激前4组大鼠各项实验指标比较差异无统计学意义 （P〉0.05）;而应激后,模型组和模型＋干预组大鼠24 h饮用1%糖水消耗量及体质量、水平运动格子数与垂直运动格子数较应激前显著减少,排便次数较应激前显著增多（P〈0.05或0.01）,对照组和干预组则无显著变化（P〉0.05）.本研究未检测到miR-143的表达水平.与对照组相比,模型组大鼠血浆miR-34a表达增强（P〈0.05）,miR-134表达下降（P〈0.05）;与模型组相比,模型＋干预组、干预组大鼠血浆miR-34a表达下降（P〈0.05）,miR-134表达增强（P〈0.05）.结论 应激抑郁模型小鼠糖水代谢消耗下降,动力及探索活动减少,而氟西汀可增加糖水消耗动力及探索活动.miR-143在血浆中基本不表达,血浆miR-134与miR-34a有可能成为抑郁症的生物学标记物,值得进一步研究.

急性肺栓塞患者血清miRNAs标志物检测及miR-134的临床价值

目的探讨急性肺栓塞患者血清miRNAs标志物检测及miR-134的临床价值。方法收集50例急性肺栓塞患者及25例对照者的血清,应用miRNA表达谱芯片进行筛选,并采用实时荧光定量聚合酶链反应进行验证,检测急性肺栓塞患者血清miRNAs的表达,分析miR-134标志物与Wells评分之间的关系及其诊断价值。结果血清miRNA表达谱分析发现,在6例急性肺栓塞和6例健康对照者中筛选出10个miRNA(miR-134、miR-197、miR-126、miR-191、miR-122、miR-370、miR-155、miR-133a、miR-375、miR-208b)存在表达差异(t分别=14.17、12.26、11.13、10.02、9.34、17.26、15.22、7.57、3.62、7.24,P均<0.05)。进一步在50例急性肺栓塞患者中做血清miRNAs验证,结果显示:miR-134、miR-197和miR-126在急性肺栓塞患者血清中表达水平较对照组高,而miR-208b表达水平较对照组低(t分别=7.65、6.23、4.36、-5.24,P均<0.05)。血清miR-134相对表达量与Wells评分呈明显正相关(r=0.32,P<0.05)。当miR-134相对表达量取5.6时,miR-134对急性肺栓塞的诊断灵敏度为72.00%(36/50),特异度为82.00%(41/50),曲线下面积为0.86。结论 miR-134、miR-197、miR-126和miR-208b均可作为急性肺栓塞患者的血清miRNAs标志物,且miR-134在诊断和预测急性肺栓塞风险中具有较高的临床价值。

miR-134靶向EGFR对非小细胞肺癌增殖的影响

目的探讨微小RNA-134(miR-134)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测miR-134在NSCLC细胞株(A549、H252)和正常胚肺细胞株WI38中的表达情况;将A549和H252细胞分为3组,分别为空白对照组(不转染)、miR-NC组(转染不相关siRNA)和miR-134组(转染miR-134 mimics)。分别于转染后24、48、72、96h收集细胞,采用MTS法检测细胞的增殖情况;转染后96h用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-134与表皮生长因子受体(EGFR)3’-UTR的结合情况,QPCR检测过表达miR-134的A549和H252细胞中EGFR的表达情况。结果与WI38细胞相比,miR-134在A549细胞中的表达下调85.91%,在H252细胞中下调78.13%(P<0.05)。MTS检测显示,miR-134能显著降低A549和H252细胞的增殖能力,并呈时间依赖性。流式细胞仪检测显示,与空白对照组比较,miR-134组A549细胞的凋亡比例提高226.31%,H252细胞提高47.85%(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-134能与EGFR3’-UTR结合,显著降低荧光值(P<0.05)。QPCR检测显示,与空白对照组比较,转染miR-134 mimics后,EGFR在A549细胞中的相对表达量下调57.0%,在H252中下调35.0%,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 miR-134在NSCLC中低表达,能通过靶向EGFR抑制NSCLC细胞增殖,并诱导凋亡。

人卵巢癌组织细胞中miR-134表达及与耐药的可能机制

目的:探讨微小miR-134在紫杉醇耐药的人卵巢癌细胞中表达及耐药的可能机制。方法:收集2016年3月-2020年3月本院治疗的卵巢癌患者,其中对紫杉醇耐药19例、非耐药21例病变标本行miR-134水平检测,采用Agilent Human miRNA V21.0芯片对紫杉醇耐药及敏感细胞进行miRNA基因表达谱分析,在miR-134中选出表达差异较大的基因簇,并验证芯片结果。利用生物信息学分析软件对miR-134的潜在靶基因进行预测,通过Western Blot对部分靶基因进行验证。结果:miR-134在对紫杉醇耐药的卵巢癌SKOV3-TR30细胞中低表达,分析软件预测得到miR-134潜在靶基因共128个,耐药卵巢癌细胞中靶基因c-Myc蛋白表达高于敏感卵巢癌细胞(P<0.05)。在SKOV3-TR30细胞中过表达miR-134后,c-Myc基因表达下降,其编码的蛋白也随之下降;SKOV3细胞中敲低miR-134表达后,c-Myc基因表达上升,其编码的蛋白也随之上升(均P<0.05)。结论:miR-134在紫杉醇耐药卵巢癌细胞中较敏感癌细胞中低表达且影响耐药,其机制可能是通过调节c-Myc蛋白表达而产生耐药性。