联合测定血浆miRNA-19b及红细胞分布宽度在COPD相关肺动脉高压中的临床价值

目的探讨联合测定血浆miRNA-19b及红细胞分布宽度(RDW)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关肺动脉高压(PH)中的临床价值。方法COPD急性加重(AECOPD)患者共156例,根据肺动脉收缩压(PASP)结果,分为AECOPD组(A组)45例、AECOPD合并PH组(B组)111例。测定两组入院时血浆miRNA-19b、PASP、经细胞分布宽度(RDW),并绘制血浆miRNA-19b和RDW诊断COPD相关PH的受试者工作特征(ROC)曲线;应用Logistic回归分析预测血浆miRNA-19b和RDW诊断COPD相关PH概率;绘制血浆miRNA-19b和RDW联合诊断COPD相关PH ROC曲线,计算诊断价值。结果与A组比较,B组血浆miRNA-19b明显降低、RDW、PASP明显升高(P<0.05)。血浆miRNA-19b和RDW联合诊断COPD相关PH的曲线下面积(AUC)高于单独诊断。结论血浆miRNA-19b和RDW对于辅助诊断COPD相关PH具有一定的临床价值,联合测定可以提高COPD相关PH诊断的敏感度和特异度。

基于miRNA-10b调控宫颈癌LncRNA-H19网络通路机制的研究

宫颈癌是严重威胁女性健康的第三大恶性肿瘤。在宫颈癌的发病机制中某些特定基因的异常表达或过表达可能是引起肿瘤细胞增殖的重要原因。

孕期母血清miRNA-19b诊断胎儿先天性心脏病的初步评价

目的探讨孕期母血清miRNA在胎儿先天性心脏病（CHD）诊断中的临床价值。方法选取2009年7月-12月27例我院孕中期CHD胎儿孕妇为研究对象，同时收集27例与病例组在孕妇年龄、胎儿孕周基本匹配的胎儿无畸形的孕妇作为对照组，采用Real—timePCR检测miRNA-19b的表达水平，采用ROC曲线下面积（are aunder the curve，AUC），对miRNA-19b诊断CHD胎儿的准确性进行初步评价。结果通过检测孕期母血清miRNA-19b的表达水平，结果表明胎儿CHD病例组孕妇血清miRNA-19b水平显著高于对照组（P〈0．01），对miRNA-19b预测胎儿CHD的准确性进行分析，结果表明AUC分别为0．79。结论孕期母血清miRNA-19b可以预测胎儿CHD的发生风险，作为胎儿CHD的诊断标志物。

miRNA-19b过表达对P19细胞分化的影响

目的通过过表达miRNA-19b,研究miRNA-19b对P19细胞分化的影响。方法脂质体2000转染miRNA-19b过表达质粒与空载质粒进入P19细胞,通过杀稻瘟菌素筛选出稳定株;实时定量聚合酶链反应检测miRNA-19b表达水平以及分化基因(c Tn T、ANP、GATA4)的表达水平。结果 miRNA-19b过表达载体与细胞系成功建立(P<0.05);在P19细胞分化过程中,miRNA-19b过表达组心肌标志物均显著高于对照组(P均<0.05)。miRNA-19b显著促进P19细胞向心肌细胞分化。结论 miRNA-19b可以显著促进P19细胞向心肌细胞的分化,为以后其用于心脏发育的进一步研究奠定基础。

血清miRNA-19b在早期非小细胞肺癌辅助诊断中的临床价值

目的通过检测血清miRNA-19b在早期(I和Ⅱ期)非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的相对表达量,分析miRNA-19b在早期NSCLC诊断中的临床应用价值。方法应用qRT-PCR法检测100例早期NSCLC患者和50名体检正常人miRNA-19b的相对表达水平,通过ROC曲线判断其诊断价值,并与目前临床常用的肿瘤标志物癌胚抗原和细胞角蛋白比较。结果miRNA-19b在健康人对照中的表达量明显低于早期NSCLC,差异有显著统计学意义(P<0.001)。血清miRNA-19b在早期NSCLC中的敏感性(63.0%)显著高于癌胚抗原和细胞角蛋白的敏感性(4.0%和9.0%),差异均有显著统计学意义(P<0.001)。ROC曲线分析显示血清miRNA-19b在早期NSCLC中的辅助诊断价值明显好于癌胚抗原和细胞角蛋白。结论血清miRNA-19b在早期NSCLC辅助诊断中的价值显著优于癌胚抗原和细胞角蛋白,具有非常大的潜在临床应用价值。

miRNA-19b在老年慢性阻塞性肺疾病急性加重相关肺动脉高压患者血浆中的变化及其临床价值

目的探讨血浆miRNA⁃19b在慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)相关肺动脉高压(PH)老年患者中的临床价值。方法选择2020年11月—2021年11月在上海市浦东新区浦南医院呼吸科病房住院的AECOPD老年患者为研究对象,根据心超测定的肺动脉收缩压(PASP)结果,将研究对象分为AECOPD组(A组)、AECOPD合并PH组(B组);再根据肺动脉收缩压(PASP)结果将B组分为轻度肺动脉高压组(B1组)、中度肺动脉高压组(B2组)、重度肺动脉高压组(B3组)共3个亚组。测定各组患者入院时的血浆miRNA⁃19b、PASP、血浆IL⁃6、血浆CPR、血浆NT⁃ProBNP水平;评估各组动脉血气、6分钟步行距离;比较和统计学分析上述指标值。结果血浆miRNA⁃19b、血浆IL⁃6、血浆CRP、血浆NT⁃ProBNP水平,以及PASP值,pH值,PaO2值,PaCO_(2)值、6分钟步行距离于A、B组两两比较以及B1、B2、B3组两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。A、B组以及B1、B2、B3组患者,血浆miRNA⁃19b水平与PASP值、血浆IL⁃6水平、血浆CRP水平、血浆NT⁃ProBNP水平、PaCO_(2)值均呈负相关性,与pH值、PaO2值、6分钟步行距离均呈正相关性。结论合并肺动脉高压的老年AECOPD患者血浆miRNA⁃19b水平明显低于不合并肺动脉高压的AECOPD老年患者;在AECOPD相关PH老年患者中,随着肺动脉压力逐渐增高,血浆miRNA⁃19b水平逐渐降低。

20(S)-原人参二醇通过调控miRNA-19b诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的观察

目的:研究20(S)-原人参二醇[20(S)-PPD]通过调控miRNA-19b的表达诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡以及相关作用的机制。方法:采用MTT比色法检测30、40、50、60、70、80μmol/L 20(S)-PPD处理48 h对MCF-7细胞存活率的影响;real-time PCR检测30、50、80μmol/L 20(S)-PPD处理MCF-7细胞48 h后miRNA-19b相对表达量的变化;DNA甲基化转移酶(DNMT)活性检测试剂盒检测30、50、80μmol/L 20(S)-PPD处理MCF-7细胞48 h对DNMT活性的影响。将MCF-7细胞分成瞬时转染miRNA阴性对照模拟物+空白培养液组、瞬时转染miRNA-19b模拟物+20(S)-PPD组、瞬时转染miRNA-19b模拟物+空白培养液组、瞬时转染miRNA阴性对照模拟物+20(S)-PPD组,real-time PCR检测4组细胞miRNA-19b表达量的变化,Western blot检测4组细胞中TNFα蛋白表达量的变化,流式细胞术检测4组细胞的凋亡率。结果:20(S)-PPD可剂量依赖性地降低MCF-7细胞的存活率。随着20(S)-PPD剂量的升高,miRNA-19b的表达量降低(P<0.05)。80μmol/L的20(S)-PPD可增强DNMT活性(P<0.05)。转染miRNA-19b模拟物后,miRNA-19b的表达量上升,TNFα蛋白的表达受到抑制,细胞凋亡率降低;而加入65μmol/L 20(S)-PPD后,miRNA-19b的表达下调,TNFα蛋白的表达上调,细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论:20(S)-PPD可能通过甲基化作用抑制miRNA-19b的表达,进而促进TNFα的表达,诱导MCF-7细胞凋亡。

血清miR-19b-3p对阿尔茨海默病大鼠认知水平的影响

目的探讨血清miR-19b-3p对阿尔茨海默病大鼠认知水平的影响。方法选取阿尔茨海默病大鼠32例作为观察组,非阿尔茨海默病大鼠32例作为对照组,分析两组血清miRNA的表达谱,筛选出差异表达基因。利用随机数表法将60只大鼠分为4组,分别为正常组、阿尔茨海默病组、阿尔茨海默病联合miR-19b-3p组和阿尔茨海默病联合Vector组,在大鼠及细胞中高表达miRNA。利用细胞转染的方法将合成的miR-19b-3p模拟剂和抑制剂转染到SH-SY5Y的细胞系中,将其分别作为模拟组和抑制组,而没有采用细胞转染的SH-SY5Y的细胞系为无转染组,探究SH-SY5Y细胞中BACE1蛋白的水平。结果(1)观察组相比于对照组而言,血清中miR-146a-5p、miR-195-5p、miR-20b-5p水平上调(P<0.05),miR-125b-3p、miR-19b-3p水平下调,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)阿尔茨海默病组(26.48±3.14)s或阿尔茨海默病联合Vector组(27.78±3.19)s与正常组(9.61±1.02)s相比,逃避潜伏期明显增加(P<0.05)。阿尔茨海默病联合miR-19b-3p组(15.29±2.67)s与阿尔茨海默病组(26.48±3.14)s相比,逃避潜伏期明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05);(3)模拟组(9.23±3.24)相比于无转染组(19.02±4.12)SH-SY5Y细胞中BACE1蛋白浓度明显减少(P<0.05)。抑制组(24.23±5.47)相比于无转染组(19.02±4.12)SH-SY5Y细胞中BACE1蛋白浓度明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论miR-19b-3p通过调节BACE1的表达来参与阿尔茨海默病的形成,通过干预BACE1的表达来改善阿尔茨海默病大鼠的认知功能。

循环内皮微粒相关microRNA在巨噬细胞炎性反应诱发小鼠动脉粥样硬化发生的机制

目的研究循环内皮微粒(EMPs)相关microRNA在巨噬细胞炎性反应诱发动脉粥样硬化(AS)发生的作用机制。方法 SPF级雄性ApoE-/-小鼠206只,对照组50只,实验组随机分为动脉粥样硬化模型(AS模型)组、NC-miRNA组和miRNA-19b抑制剂组,每组52只。采用油红染色对AS病变小鼠的组织学进行观察,计算斑块面积相对比例;检测生化指标的表达水平,主要包括小鼠血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG);ELISA检测血管炎症因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、IL-6和IL-10的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤因子(Bcl-2)、细胞凋亡的标志蛋白PARP降解产物(cleaved-PARP)和B细胞淋巴瘤因子相关X蛋白(Bax)表达的变化,实时荧光定量PCR检测miR-19b表达;流式细胞法检测巨噬细胞的凋亡率。结果 miRNA-19b抑制剂组可减少由于AS引起的血管厚度增加,减少AS斑块面积比例;使血脂中的TC、TG和LDL-C水平降低,HDL-C水平则有升高;Bax、cleaved-PARP促相关的凋亡蛋白表达量下调,同时Bcl-2抗凋亡蛋白表达上调;血管中促炎症因子IL-1、IL-6和TNF-α水平降低,抗炎症因子IL-10的水平则升高;同时使血管内巨噬细胞的凋亡率下降。结论 EMPs相关miRNA-19b的存在可以减少巨噬细胞的凋亡,并且通过上调促炎因子促进组织周围炎症的发生,进而促进AS的发展进程。

循环内皮微粒相关microRNA在巨噬细胞炎性反应诱发动脉粥样硬化发生中的作用机制

目的研究循环内皮微粒相关microRNA在巨噬细胞炎性反应诱发动脉粥样硬化(AS)发生的作用机制。方法选取实验组和对照组SPF级5周小鼠各50只。实验小鼠分4组:对照组、动脉粥样硬化模型组(AS模型组)、NC-miRNA组和miRNA-19b抑制剂组,采用油红染色对AS病变的组织学进行观察,计算斑块面积相对比例,并检测生化指标的表达水平,主要包括血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG),ELISA检测血管炎症因子TNF-α、IL-1、IL-6和IL-10的变化,Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、cleaved-caspase-3和Bax表达的变化,实时荧光定量PCR检测miR-19b表达,流式细胞法检测巨噬细胞的凋亡率。多组间比较采用单因素方差分析或者重复测量的方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果各组胸腔动脉斑块面积百分比:对照组为(0.00±0.00)﹪;AS模型组为(9.59±6.53)﹪;NC-miRNA组为(8.96±3.47)﹪;miRNA-19b抑制剂组为(3.21±2.03)﹪,三组间比较差异有统计学意义(F=20.572,P=0.002)。与对照组比较,AS模型组和NC-miRNA组TC[AS模型组(3.26±0.21)mmol/L;NC-miRNA组(3.13±0.14) mmol/L;F=13.994,P=0.002]、TG[AS模型组(0.25±0.06)mmol/L;NC-miRNA(0.21±0.02) mmol/L;F=11.230,P=0.011)]和LDL-C [AS模型组(1.65±0.11) mmol/L;NC-miRNA (1.59±0.27) mmol/L;F=10.069,P=0.006)]水平升高,而HDL-CAS模型组[(0.08±0.09) mmol/L;NC-miRNA (0.08±0.05) mmol/L;F=12.450,P=0.004)]水平含量降低。与模型组比较,miRNA-19b抑制剂组TC(1.85±0.06) mmol/L、TG(0.15±0.03) mmol/L和LDL-C(1.21±0.10) mmol/L水平降低,HDL-C (0.11±0.05) mmol/L水平则升高(P均<0.05)。AS模型组与对照组相比,IL-1(34.06±3.58)g/L、IL-6(92.57±31.97)g/L和TNF-α(63.01±15.65) g/L水平升高,而IL-10(16.86±1.29)g/L的水平降低,NC-miRNA组各指标亦有相同的变化趋势;miRNA-19b抑制剂组IL-1(24.85±6.21) g/L、IL-6(53.29±17.15) g/L和TNF-α(34.51±6.47)g/L水平低于AS模型组和NC-miRNA组(F=13.671,P=0.002),IL-10(24.94±4.72) g/L的水平则高于两组(F=13.675,P=0.008)。和对照组相比,AS模型组和NC-miRNA组的Bax(AS模型组3.39±0.01;NC-miRNA组0.64±0.02;F=26.910,P=0.000)和cleaved-PARP (AS模型组2.47±0.05;NC-miRNA组3.27±0.01;F=13.226,P=0.000)表达量升高。但Bcl-2(AS模型组0.67±0.02;NC-miRNA组0.64±0.02;F=12.585,P=0.000)表达水平下调。与NC-miRNA组相比,miRNA-19b抑制剂组的促细胞凋亡的蛋白Bax(2.16±0.02)和cleaved-PARP(1.91±0.04)表达水平下调,Bcl-2(1.05±0.01)的表达水平上调。与对照组比较,AS模型组(2.71±0.02)和NC-miRNA组(2.43±0.02)的miRNA-19b的转录水平增加,差异有统计学意义(P均<0.05),miRNA-19b抑制剂组(1.52±0.01)转录水平有升高,但相较于AS模型组和NC-miRNA组的变化其增加量不显著,(F=15.353,P=0.002)。miRNA-19b基因转录水平:对照组为1.02±0.03;AS模型组为2.71±0.02;NC-miRNA组为2.43±0.02;mi RNA-19b抑制剂组为1.52±0.01(P均<0.05)。细胞凋亡率:对照组为(4.41±0.18)﹪;AS模型组为(7.16±0.73)﹪;NC-miRNA组为(6.29±0.24)﹪;miRNA-19b抑制剂组为(5.01±0.11)﹪,(F=12.889,P=0.008)。结论 miRNA-19b抑制剂可以减少巨噬细胞的凋亡,降低促炎症因子,可减少由于AS引起的血管厚度的增加,减少AS斑块的面积比例,使血脂中的TC、TG和LDL-C水平降低,HDL-C水平则有升高,这对冠心病的临床诊疗具有重要的临床指导意义。