灯盏乙素通过调控TGF-β信号通路抑制脏器纤维化的研究进展

灯盏乙素(SCU)在抑制脏器纤维化方面的研究取得了显著的进展,文章对灯盏乙素通过TGF-β信号通路在调控脏器纤维化中的作用机制进行深入探讨,并详述了灯盏乙素对肝、肺、心脏和肾等脏器纤维化的抑制效应,为揭示灯盏乙素在治疗脏器纤维化疾病中的机制提供了深刻的认识。

灯盏乙素通过细胞转运途径对阿尔茨海默病大鼠β-淀粉样蛋白跨血脑屏障的影响

目的:探讨灯盏乙素对阿尔茨海默病(AD)大鼠β-淀粉样蛋白(Aβ)跨血脑屏障(BBB)的影响及其机制。方法:无特定病原体(SPF)级SD大鼠70只,随机分为假手术组、模型组、灯盏乙素低剂量组、灯盏乙素高剂量组以及阳性对照组,除假手术组大鼠外,其余组大鼠侧脑室注射Aβ_(1-42)氯化钠溶液建立AD大鼠模型,灯盏乙素低剂量和高剂量组大鼠分别灌胃灯盏乙素5 mg/kg和10 mg/kg,阳性对照组灌胃盐酸多奈哌齐0.9 mg/kg,持续30 d,观察大鼠行为能力以及血脑屏障通透性,进行苏木精-伊红(HE)染色和免疫组化染色,蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、闭合蛋白-5(Claudin-5)、咬合蛋白(Occludin)、低密度脂蛋白相关蛋白(LRP-1)以及p糖蛋白(P-gp)表达情况。结果:模型组神经元细胞排列疏松、紊乱,细胞数量减少,可见明显空泡化,灯盏乙素低剂量组、灯盏乙素高剂量组及阳性对照组神经元细胞数量增多,空泡化细胞减少,细胞排列稍整齐致密。灯盏乙素低剂量组、灯盏乙素高剂量组及阳性对照组大鼠逃避潜伏期、伊文思蓝含量、Aβ斑块面积以及MMP-9蛋白相对表达量均低于模型组,穿过平台的次数以及LRP-1、P-gp、Claudin-5、Occludin蛋白相对表达量高于模型组(P<0.05)。结论:灯盏乙素可减轻AD大鼠神经元病理损伤,保护血脑屏障。

灯盏乙素通过环状GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激因子通路抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症

目的探讨灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症的影响。方法培养BV-2小胶质细胞系,将BV-2小胶质细胞分为对照组(Ctrl)、环状GMP-AMP合酶(cGAS)抑制剂RU320521(RU.521)组、LPS组、LPS+RU.521组、LPS+灯盏乙素预处理(LPS+S)组、LPS+S+RU.521组,共6组。Western blotting及免疫荧光双标染色法检测并观察BV-2小胶质细胞中cGAS、干扰素基因刺激因子(STING)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、PYD结构域蛋白3(NLRP3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化(n=3)。结果Western blotting和免疫荧光双标染色均显示,与对照组相比,LPS诱导后,BV-2小胶质细胞中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+S组中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。使用cGAS通路抑制剂RU.521后显示了与灯盏乙素预处理组相似的作用效果。此外,NF-κB在各组的变化不明显(P>0.05)。结论灯盏乙素干预抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症反应,可能与cGAS-STING信号通路有关。

灯盏乙素通过STAT3信号对激活的BV-2小胶质细胞M2型极化的影响

目的探究灯盏乙素(Scutellarin)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)作用下M2型小胶质细胞极化的作用及信号转导和转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)的调控机制。方法BV-2小胶质细胞分为对照组(Con组)、STAT3抑制剂α-氰基-(3,4-二羟基)-N-苄基霉素-烟酰胺组(AG490组)、LPS组、LPS+AG490组、LPS+灯盏乙素预处理组(LPS+S组)、LPS+S+AG490组,共6组。Western blot和免疫荧光染色检测STAT3、磷酸化STAT3(P-STAT3)和M2型小胶质细胞标记物白介素10(IL-10)的表达。结果Western blot结果显示,LPS组的P-STAT3、IL-10表达显著增强,与对照组差异显著(P<0.05);使用灯盏乙素干预后P-STAT3表达明显降低;IL-10表达显著增高;均与LPS组有显著差异(P<0.05)。AG490增强灯盏乙素的作用。此外,STAT3在各组的变化无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光染色结果显示,灯盏乙素干预后可降低LPS激活的BV-2小胶质细胞P-STAT3的蛋白表达水平;增强IL-10蛋白表达。各组STAT3的蛋白水平无统计学意义。结论灯盏乙素通过抑制STAT3活化促进BV-2小胶质细胞向M2型极化,可能与灯盏乙素减轻神经炎症反应有关。

抗阿尔兹海默症灯盏乙素苷元衍生物设计、合成及活性研究

基于阿尔兹海默症(AD)发病机制的复杂性,为了开发多功能的抗AD药物,根据多靶点导向配体(Multi-target directed ligands,MTDLs)策略,以灯盏乙素苷元为骨架,通过不同的连接体,连接具有胆碱酯酶抑制作用的N,N-双取代氨基甲酸酯片段和具有单胺氧化酶抑制作用的炔丙胺、N-甲基炔丙胺片段,设计并合成9个双靶点抗AD化合物,结构经过1HNMR、13CNMR和ESI-MS鉴定。对目标化合物进行胆碱酯酶和单胺氧化酶的活性测试,其中2-(4-((二甲基氨基甲酰基)氧基)苯基)-5,6-二羟基-4-氧代-4H-色烯-7-基5-(甲基(丙-2-炔-1-基)氨基)-5-氧代戊酸酯对两种酶具有相对较好的抑制活性。酶动力学结果说明该化合物对乙酰胆碱酯酶是混合型抑制。上述化合物不仅对自身和Cu2+诱导的A_(β1-42)聚集具有良好的抑制作用(87.57%和82.22%),而且还能诱导自身和Cu^(2+)诱导的Aβ_(1-42)原纤维的分解(75.01%和77.40%)。该化合物可以进行进一步结构优化和活性测试,为多靶点抗阿尔兹海默症提供候选化合物。

灯盏乙素对长期高脂高糖饮食诱导的肥胖大鼠慢性肝损伤中肝脏组织MMP2、MMP9及TIMP-1蛋白表达的影响

目的研究在高脂高糖饮食诱导建立的肥胖大鼠慢性肝损伤肝脏纤维化模型中,灯盏乙素(SCU)对其发病机制的影响,探讨SCU能否通过促进MMP2、MMP9,抑制TIMP-1的表达改善肝脏纤维化程度。方法采用高脂高糖饮食诱导慢性肝损伤肝脏纤维化模型,SCU和姜黄素(CUR)灌胃治疗8周后,HE染色观察肝组织病理变化;Masson染色观察胶原纤维在肝脏中的沉积;Western blot和免疫组织化学染色观察肝脏组织TIMP-1、MMP2、MMP9的表达。结果在肝脏组织中,模型组大鼠肝细胞形态不规则细胞水肿,并有大量脂肪空泡出现,汇管区有蓝色胶原纤维沉积,不同剂量的SCU和CUR干预后,脂肪空泡减少,肝细胞肿胀情况减少,纤维化程度得到改善。在大鼠肝细胞中,模型组MMP2、MMP9蛋白表达下调(P<0.01),不同剂量SCU和CUR干预后MMP2、MMP9蛋白表达上调(P<0.01);模型组TIMP-1蛋白表达上调(P<0.01),不同剂量SCU和CUR治疗后TIMP-1蛋白表达下调(P<0.01),没有很明显的剂量依赖性。结论SCU可能通过促进MMP2、MMP9,抑制TIMP-1蛋白的表达,减少ECM的积累改善肥胖引起的肝脏纤维化。

灯盏乙素对大鼠脑缺血后小胶质细胞cGAS/STING/NLRP3信号轴的调控

目的:探讨灯盏乙素对大鼠脑缺血后小胶质细胞环状GMP-AMP合成酶(cGAS)/干扰素基因刺激蛋白(STING)轴及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)表达的影响。方法:将36只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、大脑中动脉栓塞(MCAO)、MCAO+灯盏乙素干预组(MCAO+S)。开颅法制备大鼠脑缺血模型,分别用HE染色观察大鼠脑组织病理性变化,免疫荧光染色检测大鼠小胶质细胞中cGAS、STING、NLRP3表达的变化,Western Blot检测大鼠缺血后3 d脑内cGAS、STING、NLRP3蛋白表达的变化。结果:HE染色显示,灯盏乙素干预后,缺血区皮质中神经细胞数量减少、分布紊乱、细胞间隙大等病理现象较MCAO组明显改善;免疫荧光染色显示MCAO+S组中小胶质细胞的激活受到抑制,cGAS、STING、NLRP3在小胶质细胞中的表达水平下降;Western Blot结果显示,MCAO组中cGAS、STING、NLRP3表达显著增加,灯盏乙素干预后,上述指标明显下降。结论:灯盏乙素可抑制大鼠脑缺血后小胶质细胞中cGAS/STING/NLPR3的过表达,减轻小胶质细胞介导的神经炎症。

川芎嗪-灯盏乙素苷元孪药对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的保护作用及机制研究

目的 研究川芎嗪-灯盏乙素苷元孪药(TMSC4)对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠的保护作用及机制。方法 将105只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、灯盏乙素苷元组(0.7 mmol/kg)、川芎嗪组(0.7 mmol/kg)和TMSC4低、中、高剂量组(0.35、0.7、1.4 mmol/kg),每组15只。假手术组、模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,其余各组大鼠灌胃相应药物,每天1次,连续14 d。除假手术组外,其余各组大鼠均采用线栓法建立CIRI模型。大鼠缺血2 h再灌注22 h后,测定大鼠脑指数及脑含水量;检测大鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的水平和大脑皮层神经细胞的凋亡情况以及B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化型胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3)蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠脑指数和脑含水量,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平以及脑组织中MDA水平,神经细胞凋亡率,Bax、cleaved-caspase-3蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);脑组织中SOD、 GSH-Px、CAT水平和Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组大鼠上述指标水平均显著逆转(P<0.05),且TMSC4中、高剂量组的逆转作用显著优于灯盏乙素苷元组和川芎嗪组(P<0.05)。结论 TMSC4对CIRI模型大鼠具有保护作用,其作用机制可能与减轻炎症反应、氧化应激损伤,抑制神经细胞凋亡有关。

灯盏乙素在兔体内药代动力学(英文)

目的 建立测定灯盏乙素血浆浓度的固相萃取 高效液相色谱 (SPE HPLC)法 ,并研究家兔iv灯盏花素的药代动力学。方法 采用甲醇 水 磷酸为流动相 ,NucleosilC1 8色谱柱为固定相 ,紫外检测波长 335nm ,外标法定量。给家兔分别iv灯盏花素 1 0 ,2 0和 40mg·kg-1 ,SPE HPLC法检测血浆药物浓度。结果 线性范围 0 0 2～ 1 0 0mg·L-1 ,最低检测浓度 0 0 2mg·L-1 ,方法回收率 96 1 5 %～ 99 31 % ,日内、日间RSD值均小于 1 0 %。家兔iv灯盏花素时 ,灯盏乙素血浆浓度变化符合三房室模型。灯盏乙素低、中剂量组的主要药代动力学参数无显著性差异 ,而高剂量组与低、中剂量组比较差异显著。结论 该法准确、灵敏、简便 ,适用于灯盏乙素血浆浓度的测定。灯盏花素经兔iv后的药代动力学符合三房室模型 ,剂量为 1 0～ 2 0mg·kg-1 时 ,药物的体内变化为线性动力学过程 ,而 40mg·kg-1

高效液相质谱联用法(HPLC-MS)测定灯盏乙素血药浓度及其临床药代动力学研究

目的:研究灯盏花素片在中国人体内的药代动力学。方法:2 0名健康志愿者单剂量口服12 0mg灯盏花素片,用高效液相 质谱联用法测定血浆中灯盏乙素总苷元。结果:本实验建立的血药浓度测定方法,血浆中杂质不干扰样品的测定,线性范围为0 .0 12 6～3.2 4mg·L-1;日内和日间精密度均小于12 .0 %。2 0名健康受试者单剂量口服灯盏花素片(12 0mg)后,主要药代动力学参数:Tmax =7.0±2 .3h、Cmax=0 .9±0 .5mg·L-1、AUC0 -tn =5 .6±1.6mg·h·L-1、AUC0 -∞=5 .8±1.6mg·h·L-1、MRT0 -tn=8.0±1.1h、MRT0 -∞=8.6±1.4h。结论:建立的LC MS法适用于灯盏乙素人体药代动力学研究。灯盏花素片口服药代动力学特点是达峰时间较长,约占受试者总人数4 5 %的药时曲线有双峰现象。

灯盏乙素酯类前药的合成、理化性质及降解研究

目的对口服难吸收中药活性成分灯盏乙素进行结构改造,为寻找和设计合理前药及其剂型提供依据。方法通过先成盐后酯化的方法合成灯盏乙素乙酯、苄酯并改进文献方法合成羟乙酰胺酯,用质谱和氢谱确证结构。研究3种前药在不同pH水溶液中的稳定性、溶解度、分配系数和在人血浆中的降解。制备灯盏乙素羟乙酰胺酯环糊精包合物和乳剂,比较包合物和乳剂在肠液中对该前药的保护作用,考察该前药在不同肠段黏膜匀浆中的降解情况。结果合成的3种前药经确证为目标物;灯盏乙素羟乙酰胺酯在缓冲液(pH 4.2)和水中的溶解度比灯盏乙素分别提高近10倍和35倍,分配系数也由原来的-2.56提高到1.48;该酯水溶液的稳定性较好(t1/2≈16 d,pH4.2),在人血浆的半衰期最短(t1/2≈7 m in),但在肠黏膜匀浆中的降解可能影响酯的吸收,不同肠段黏膜匀浆降解羟乙酰胺酯的次序为:十二指肠>回肠≥空肠>结肠。乳剂在肠黏膜匀浆中对前药有显著的保护作用,包合物次之。结论与灯盏乙素乙酯和苄酯比较,羟乙酰胺酯的理化性质较好,但其在肠道中的稳定性有待提高,可以选择乳剂或结肠定位给药减少前药的降解。

灯盏乙素聚乙二醇前药的合成与表征

目的:合成黄酮类化合物灯盏乙素聚乙二醇前药。方法:以聚乙二醇单甲醚2000为原料,与琥珀酸酐反应后再与N-羟基琥珀酰亚胺缩合得到活泼酯,最后与灯盏乙素反应得到目标化合物。结果:分别用FT-IR、1HNMR和质谱对其结构进行了表征,并初步测定了其在水中的溶解度。结论:高分子前药水溶性大大提高,为延长药物体内半衰期及提高生物利用度提供了可能。

灯盏乙素在大鼠体内药代动力学及组织分布的研究

目的:研究灯盏乙素在大鼠体内药代动力学和组织分布特性,为临床合理用药提供科学依据。方法:灌胃给予80 mg.kg-1的灯盏乙素,HPLC测定大鼠体内灯盏乙素的血药浓度及组织中的浓度,血浆样品用固相萃取的方法处理,其他生物样品用液-液萃取法处理。结果:灯盏乙素在血浆和组织匀浆中线性范围分别为10～1 280ng.mL-1(R2>0.99)和40～1 280 ng.g-1(R2>0.99),最低检测限分别为10 ng.mL-1和40 ng.g-1,日内、日间精密度均小于8%。主要药代动力学参数:达峰时间tmax为(7.7±1.0)h,峰浓度Cmax为(288.0±75.2)ng.mL-1,药时曲线下面积AUC0～t为(5.6±1.6)μg.mL-1.h,MRT0～t为(17.5±1.4)h。结论:灯盏乙素口服后在体内呈非房室模型,药时曲线有双峰现象。

HPLC法测定不同产地灯盏细辛中灯盏乙素的含量

目的:建立测定不同产地灯盏细辛中灯盏乙素含量的方法.方法:采用高效液相色谱法,以ZODBAXC18(4.6mm×150mm,5μm)为色谱柱,流动相为甲醇-0.02mol/L,磷酸缓冲液pH为5.2(35∶65),检测波长为335nm,流速0.8mL/min,柱温25℃,以外标法测定灯盏细辛中灯盏乙素含量.结果:灯盏乙素在0.74～3.70μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.9996,灯盏乙素平均加样回收率为97.24%,RSD为0.82%(n=6).结论:本方法可靠性高,准确性和重现性好,适用于灯盏细辛中灯盏乙素的含量测定.

灯盏乙素对大鼠肝线粒体氧化损伤的抑制作用

运用Fe2 + Vc损伤体系诱导大鼠肝线粒体氧化损伤 ,并研究了灯盏乙素的抑制作用 .采用分光光度法测定脂质过氧化物丙二醛 (MDA)含量、膜蛋白巯基含量及线粒体肿胀度 ,利用荧光染料Rhodamine12 3对线粒体进行标记 ,跟踪线粒体膜电位的变化 .研究发现 2 0～ 5 0 μmol/L的灯盏乙素能抑制MDA的生成并促使膜巯基含量下降 ,对线粒体肿胀和膜电位的降低都有一定的抑制作用 ,并呈剂量依赖关系 .结果表明灯盏乙素是一种有效的抗氧化剂 。

不同分子量灯盏乙素-PEG酯的合成、性质及小肠吸收研究

为探讨小分子药物PEG化（PEGylation）对口服吸收的影响规律，合成了多种分子量的灯盏乙素PEG衍生物。对产物在不同条件下的理化常数、稳定性及大鼠在体小肠吸收情况进行了考察。灯盏乙素经PEG化后水溶性提高，并获得了适于口服吸收的理想的分配系数。体外试验中，该类衍生物表现出前药的特性，在pH7．4的PBS缓冲液中t1/2超过12h（37℃），而在血浆中则快速降解释放出灯盏乙素，t1／2约为1．5～3h；灯盏乙素经PEG化后，口服吸收明显增加，但PEG化物的吸收随PEG片断分子量的增大而减少。综合考虑反应收率、产物稳定性和口服吸收等情况，用于灯盏乙素修饰的PEG分子量应在400～1000 Da之间。

酶解法与LC-MS-MS相结合研究灯盏乙素在健康人体内的药代动力学

目的：建立β-葡萄糖醛酸苷酶解法与LC-MS-MS法相结合测定人体血浆中灯盏乙素的苷元,研究健康男性单剂量口服灯盏花素分散片的药代动力学。方法血浆样品经β-葡萄糖醛酸苷酶水解,甲醇蛋白沉淀,色谱柱为Agilent ZOR BAX SB C18（2．1 mm×150 mm,5μm）,运用乙腈-甲醇-水洗脱,多反应监测（MRM）灯盏乙素苷元（[M - H]-,m/ z 285．0/136．8）和内标槲皮素（[ M - H]-, m/ z 301．1/120．8）。12名健康男性单剂量口服灯盏花素分散片120 mg 后,采用该方法测定血浆中灯盏乙素苷元,使用DAS 1.0软件处理数据,计算药代动力学参数。结果灯盏乙素苷元在4．01～513．38μg·L-1范围内线性良好,日内日间精密度小于7．22%,提取回收率大于84．23%。12名健康男性单剂量口服灯盏花素分散片120 mg 后,以灯盏乙素苷元为检测对象的主要药动学参数为：Cmax （μg·L^-1）：159．97±58．14； AUC（0-19）（μg·L^-1·h）：1151．37±279．80；AUC（0- ∞）（μg· L^-1·h）：1194．13±264．51；Tmax （h）：6．33±1．67；T1/2（h）：2．83±0．60。结论建立的酶解与LC-MS-MS 相结合分析方法准确灵敏,适用于灯盏乙素人体内的药代动力学研究。

灯盏乙素对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的观察灯盏乙素对卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠免疫性肝损伤的影响。方法给雄性小鼠尾静脉注射卡介苗(BCG,每鼠0.025 mg),12 d后尾静脉注射脂多糖4μg,建立小鼠免疫性肝损伤模型,在注射LPS前,小鼠灌胃给予不同剂量的灯盏乙素(50 mg.k·g 1,100 mg.k·g 1),1次/d,连续12 d。测定血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)活性,计算肝脏、脾脏、胸腺指数,并进行肝脏病理组织检查。结果灯盏乙素可显著抑制免疫性肝损伤小鼠血清ALT活性,灯盏乙素能显著降低肝损伤小鼠的肝脏指数和脾指数,减轻肝组织病理损伤程度。结论灯盏乙素对BCG+LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤有明显的保护作用。

液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中的灯盏乙素

目的:建立大鼠血浆中灯盏乙素的液相色谱-串联质谱测定法,研究大鼠尾静脉注射灯盏花素注射液的药代动力学。方法:血浆样品经含5%甲酸的甲醇溶液提取富集,液相色谱分离[Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm,5μm)柱,甲醇-水-甲酸(60:40:0.2)流动相,流速1.0mL·min^(-1)],电喷雾离子化三重四极杆串联质谱负离子选择反应检测(SRM),离子反应分别为 m/z 461.1→m/z 285.1(灯盏乙素)和 m/z 445.1→m/z 269.1(黄芩苷,内标)。碰撞气(Ar)压力为0.186 Pa,碰撞能量25eV。结果:线性范围为0.005～40.0μg·mL^(-1)(r=0.9996),最低定量浓度为5ng·mL^(-1)。灯盏乙素的回收率>80%,日内、日间 RSD 皆小于15%(n=5)。结论:建立的大鼠血浆中灯盏乙素的液相色谱-串联质谱测定法灵敏、准确,可用于大鼠血浆中灯盏乙素浓度测定及临床前药代动力学研究。