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产肠毒素大肠埃希菌sfmH基因的原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 丁雪燕 岑雪 +3 位作者 田延 吴文文 夏芃芃 朱国强 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS 北大核心 2018年第4期12-16,共5页
以产肠毒素大肠埃希菌F4ac(F4ac^+ETEC)基因组DNA为模板,通过PCR扩增出Sfm菌毛操纵子顶端黏附素sfmH基因,然后将PCR产物插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建出阳性重组质粒pET-28a(+)-sfmH,再将其导入大肠埃希菌BL21中进行诱导表达。通过... 以产肠毒素大肠埃希菌F4ac(F4ac^+ETEC)基因组DNA为模板,通过PCR扩增出Sfm菌毛操纵子顶端黏附素sfmH基因,然后将PCR产物插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建出阳性重组质粒pET-28a(+)-sfmH,再将其导入大肠埃希菌BL21中进行诱导表达。通过对IPTG浓度、诱导温度和诱导时间进行探究,发现重组菌在0.8mmol·L^(-1)IPTG、25℃诱导7h时蛋白表达量最高,且重组蛋白以包涵体形式存在,大小约为26ku。将重组蛋白在最优诱导条件下进行大量表达并纯化,利用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,获得SfmH多克隆抗体(简称多抗),通过ELISA和Western blot试验对多抗效价和特异性进行鉴定。这一研究构建并获得了高纯度的融合蛋白rSfmH,将其免疫小鼠后成功获得鼠源高免血清,为进一步探究Sfm菌毛的功能奠定了研究基础。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠埃希菌F4ac Sfm菌毛 sfmh基因 原核表达
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