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CRISPR-Cas9 sgRNA design and outcome assessment: Bioinformatics tools and aquaculture applications 被引量:2
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作者 Mingkun Luo Jun Wang +2 位作者 Zaijie Dong Chenghui Wang Guoqing Lu 《Aquaculture and Fisheries》 2022年第2期121-130,共10页
The CRISPR-Cas9 genome editing has many advantages over its counterparts and could ultimately assist in disease control and molecular breeding in aquaculture.Single-guide RNA(sgRNA)design is presumably the most crucia... The CRISPR-Cas9 genome editing has many advantages over its counterparts and could ultimately assist in disease control and molecular breeding in aquaculture.Single-guide RNA(sgRNA)design is presumably the most crucial task in a typical CRISPR-Cas9 experiment;an understanding of algorithms behind sgRNA design programs is thus essential for improved efficacy and specificity.We focus this review on the bioinformatics aspects in genome editing experiments and describe commonly used computational approaches and tools of sgRNA design and outcome assessment.We show an example of sgRNA design with optimal parameter settings and appropriate interpretation of results and present a brief overview of CRISPR-Cas9 applications,such as genetic improvement and sustainability in aquaculture.We discuss challenging issues,particularly in the context of computational biology,in the use of computational tools in CRISPR-based genome editing.This review provides a synthesis of bioinformatics tools used for CRISPR-Cas9 sgRNA design and outcome assessment and offers a general view of CRISPR-based applications in farmed fish,which are expected to facilitate genome editing programs and hence improve aquaculture breeding,production,and sustainability. 展开更多
关键词 CRISPR-Cas9 Genome editing sgrna design Outcome assessment Bioinformatics tools Aquaculture applications
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BE-dot:为单碱基编辑设计sgRNA及预测脱靶图谱的工具
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作者 王泽鲁 梁俊波 王晓月 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2023年第2期397-404,共8页
目的 单碱基编辑器作为修复基因组点突变的有力工具,在生物技术开发和临床应用中具有极大潜力。对于目标改造的单核苷酸变异(SNV),首先要选择可用于编辑的单碱基编辑器(base editors,BEs)和单向导RNA (single guide RNA,sgRNA)。目前,... 目的 单碱基编辑器作为修复基因组点突变的有力工具,在生物技术开发和临床应用中具有极大潜力。对于目标改造的单核苷酸变异(SNV),首先要选择可用于编辑的单碱基编辑器(base editors,BEs)和单向导RNA (single guide RNA,sgRNA)。目前,尽管有较多工具实现了设计sgRNA,但缺少将设计sgRNA与评估单碱基编辑器特异性完整结合起来的工具。方法 纳入主流的27种胞嘧啶碱基编辑器(CBEs)和12种腺嘌呤碱基编辑器(ABEs)对SNV设计编辑方案,并通过调用第三方工具BE-Hive对编辑方案进行效率预测。综合使用多个脱靶预测工具对编辑方案的脱靶图谱进行评估。最后结合BEs类型和脱靶位点,分析得到所有可能的脱靶编辑产物,再调用ANNOVAR这一变异注释工具进行脱靶产物的功能分析。结果 本文提出了一个综合性工具BE-dot,它可以实现对目标编辑的SNV从设计sgRNA到预测脱靶图谱的完整过程,并对脱靶产物进行功能注释。利用密码子的简并性,BE-dot除了提供DNA水平上的精确校正方案,还可以在蛋白质水平进行同义校正。在对单碱基编辑系统做脱靶图谱的预测时,BE-dot综合了Cas-OFFinder、CALITAS、CFD、u CRISPR、BEdeepoff等多个工具,可以更全面地评估单碱基编辑系统的特异性,为用户选择BEs和sgRNA提供参考。此外,BE-dot可以自动分析得到脱靶位点处所有可能的编辑产物,并转换为avinput格式供ANNOVAR进行功能注释,避免了以往手工注释的繁琐。结论 BE-dot能为单碱基编辑技术应用于纠正或引入SNV设计编辑方案,并且能够从编辑效率、脱靶图谱、脱靶带来的功能影响等方面对编辑方案进行全面的评估。 展开更多
关键词 单碱基编辑器 单向导RNA设计 脱靶图谱预测
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BEguider:一个单碱基编辑器sgRNA设计与编辑效率预测工具
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作者 高靖静 王晓月 《生物信息学》 2023年第2期106-113,共8页
单碱基编辑器是实用且高效的基因编辑工具,其编辑效率与单向导RNA(single guide RNA,sgRNA)序列的设计密切相关。目前单碱基编辑器sgRNA序列的设计缺少特定的法则,主要依靠经验和大量尝试完成。本研究基于卷积神经网络,开发了一个单碱... 单碱基编辑器是实用且高效的基因编辑工具,其编辑效率与单向导RNA(single guide RNA,sgRNA)序列的设计密切相关。目前单碱基编辑器sgRNA序列的设计缺少特定的法则,主要依靠经验和大量尝试完成。本研究基于卷积神经网络,开发了一个单碱基编辑器sgRNA序列设计工具BEguider。BEguider利用TensorFlow 2深度学习框架建立编辑效率预测模型,能够在人基因组范围内针对NGG PAM序列依赖的单碱基编辑器ABE7.10-NGG和BE4-NGG批量设计sgRNA序列,预测编辑效率。此外,通过整合Cas-OFFinder,BEguider能够提供对sgRNA脱靶情况的评估。利用BEguider设计sgRNA序列,有助于研究人员提高实验效率,节约实验成本。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 单碱基编辑器 sgrna设计 编辑效率 卷积神经网络
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优化sgRNA序列提高斑马鱼CRISPR/Cas9系统的突变效率 被引量:1
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作者 吕双娟 舒林娟 +4 位作者 林啟研 李思颖 李丹宁 肖越 莫显明 《四川动物》 北大核心 2021年第6期622-631,共10页
CRISPR/Cas9系统介导的定点突变已经在多种模式生物中实现,其中提高sgRNA的编辑效率是关键性因素。通过分析斑马鱼Danio rerio sgRNA序列特征,优化现有sgRNA设计原则,提高了CRISPR/Cas9系统在斑马鱼中的切割效率。根据现有的sgRNA设计原... CRISPR/Cas9系统介导的定点突变已经在多种模式生物中实现,其中提高sgRNA的编辑效率是关键性因素。通过分析斑马鱼Danio rerio sgRNA序列特征,优化现有sgRNA设计原则,提高了CRISPR/Cas9系统在斑马鱼中的切割效率。根据现有的sgRNA设计原则,利用软件CHOPCHOP和Benchling对斑马鱼内35个基因设计157个sgRNAs并分析其序列特征对基因突变效率的影响。结果表明,CRISPR/Cas9系统对斑马鱼产生高效靶向突变的sgRNA序列具有明显的碱基偏好性。当靶点序列和靶点种子序列的GC含量为50%~60%、紧邻靶点3’端的前间区序列邻近基序可变碱基为C、Cas9蛋白复合体的切割位点碱基对为AC时,靶点序列具有较高的切割效率。同时,对6个已发表数据集的959个sgRNAs的序列特征进行重新分析,得到了类似的结果。优化的sgRNA设计原则,能显著提高靶基因的突变效率。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9系统 基因敲除 sgrna设计 优化 斑马鱼
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A PLATFORM TO AID SELECT THE OPTIMAL TOOL TO DESIGN GUIDE RNAS
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作者 Qianqian YANG Lei MA 《Frontiers of Agricultural Science and Engineering》 CSCD 2023年第2期296-305,共10页
CRISPR-mediated gene-editing technology has arguably driven an unprecedented revolution in biological sciences for its role in elucidating gene functions.A multitude of software has been developed for the design and a... CRISPR-mediated gene-editing technology has arguably driven an unprecedented revolution in biological sciences for its role in elucidating gene functions.A multitude of software has been developed for the design and analysis of CRISPR/Cas experiments,including predictive tools to design optimally guide RNA for various experimental operations.Different in silico sgRNA design tools have various application scenarios and identifying the optimal design tools can often be a challenge.This paper describes the sgRNA design workflow in experiments,the classification of sgRNA designers,previously published benchmarking work of in silico designers,and the criteria involved how to select an sgRNA web server.Through basic testing,this paper comprehensively overviews and compares the features of 43 web server designers to provide a reference for the readers.Ultimately,the project developed an integrated platform,called Aid-TG,which helps users find appropriate tools quickly. 展开更多
关键词 CRISPR/Cas Aid-TG gene editing sgrna design web server
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计算机辅助CRISPR向导RNA设计 被引量:1
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作者 王远立 啜国晖 +2 位作者 闫继芳 石雷 刘琦 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1744-1756,共13页
基于CRISPR/Cas9系统的基因编辑已被成功应用于多种细胞类型中。计算机辅助的向导RNA(Guide RNA)设计是使用CRISPR系统成功进行基因编辑的关键步骤之一。目前的计算工作主要致力于利用计算模型来提高sgRNA的打靶效率并降低其脱靶。文中... 基于CRISPR/Cas9系统的基因编辑已被成功应用于多种细胞类型中。计算机辅助的向导RNA(Guide RNA)设计是使用CRISPR系统成功进行基因编辑的关键步骤之一。目前的计算工作主要致力于利用计算模型来提高sgRNA的打靶效率并降低其脱靶。文中对于目前存在的sgRNA设计工具进行综述,并且说明可以通过建立高效的计算模型,对当前的异质基因编辑数据进行整合挖掘,以获得无偏差的sgRNA设计规则,并预测影响sgRNA设计的关键特征。笔者认为,对于sgRNA打靶和脱靶效果的系统总结和评价,将有助于使用CRISPR系统进行更加精准的基因编辑和基因治疗。 展开更多
关键词 CRISPR 基因编辑 计算机辅助向导RNA设计 脱靶
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