羊脱细胞真皮基质的体内外毒性实验

目的：利用溶血反应、热原反应和细胞毒性反应实验了解羊脱细胞真皮基质（acellular dermal matrix,ADM）在动物体内外的毒性反应强度.方法：溶血反应：分别制作交联型和非交联型羊ADM的浸提液,为交联组和非交联组;并设置阳性对照组10mL灭菌注射用水,阴性对照组10 mL 0.9％氯化钠溶液.将新鲜抗凝稀释兔血加入实验组和对照组试管中,离心后取上清液测量吸光度值,计算溶血度.热原实验：按照条件入选16只新西兰兔,分为初试A,B两组各3只和复试C,D两组各5只.分别将交联与未交联的两种ADM浸提液注射人两组新西兰兔体内,注射后每隔0.5 h测量一次体温,共测量6次,以6次中最高一次减去正常体温即为该兔的体温升高度数.据此判断是否符合生物制品热原实验的评价标准.MTT实验：收集对数期的小鼠成纤维细胞细胞,种植于含有不同浓度羊ADM浸提液的培养基,测量吸光度值进行细胞活力测定.结果：实验A,B组溶血度均小于5％,热原反应测得新西兰兔体温升高之和低于1.8℃.MTT实验显示10％～90％羊ADM浸提液培养基对体外细胞的毒性为1级,100％的羊浸提液对体外细胞的毒性为2级,交联型与非交联型组的浸提液对体外细胞的毒性的无显著性差异（P＞0.05）.均对体外细胞的增殖影响轻微.结论：羊DM植入新西兰兔体内引起的溶血反应和热原反应在评价标准之内,在体外对细胞的增殖和活力影响不明显.

羊脱细胞真皮基质微粒异种移植的动物研究

目的:探讨羊脱细胞真皮基质微粒与自体微粒混合移植对创面愈合质量的影响。方法:在30只Wistar大鼠背部制作4.0 cm×4.0 cm大小的全层皮肤缺损创面,并将之随机分为3组,A组以自体微粒皮+羊脱细胞真皮基质微粒按5:1的比例混合,涂布于创面,覆盖交联型羊脱细胞真皮基质;B组以自体微粒皮+羊脱细胞真皮基质微粒按2:1的比例混合,涂布于创面,覆盖交联型羊脱细胞真皮基质;C组以单纯的自体微粒皮涂布于创面,覆盖异体皮。连续4周观察大鼠创面愈合的进展和局部反应,并对比3组的创面收缩率。结果:3组的创面愈合时间基本相仿,3组自体微粒皮扩展时间和速率基本一致。A组羊脱细胞真皮基质微粒被分散包裹,逐渐与周边组织融合,有新生血管长入,基质渐被取代,与自体微粒皮相混合,肌肉表面形成点状或斑片状的真皮组织,愈后创面收缩率最低。B组羊脱细胞真皮基质含量较高,部分基质被包裹难以吸收,虽也有少量新血管长入,但不利于基质的降解,后期基质微粒仍与周边组织游离,影响创面的愈合,肌肉表面形成较少的点状或斑片状真皮组织,愈后创面收缩率较大。C组愈合较快,愈后皮下缺少真皮组织,创面收缩率最大。结论:自体微粒与羊脱细胞真皮基质微粒按5:1的比例混合移植,有利于真皮组织的再生,可使创面愈合质量提高。

羊脱细胞真皮基质异种移植后白介素4和γ-干扰素的表达

目的:评价自制的羊脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)的免疫原性。方法:自制羊ADM,然后制成交联型ADM和未交联型ADM。将160只大鼠随机分配为4组:A组,于大鼠皮下埋植未交联型羊ADM;B组,于大鼠皮下埋植交联型羊ADM;C组,于大鼠皮下埋植异体皮;对照组,大鼠做皮下游离切开后无埋植物直接缝合。观察实验组埋植区外观变化,有无明显的排斥反应,取埋植区组织显微镜下观察局部的炎症反应情况。埋植后3 d及1,2,3周检测各组大鼠血清中白介素4(IL-4)和γ-干扰素(IFN-γ)的表达情况。结果:肉眼观察埋植区切口愈合良好,无明显的免疫排斥反应,羊ADM逐渐被吸收减少。镜下观察羊ADM与周围的组织连接较紧密,有一定量的炎性细胞浸润至羊ADM深处并有增多趋势,羊ADM结构逐渐被破坏。A,B,C组和对照组的IL-4和IFN-γ的表达在第3天差异无统计学意义(P>0.05)。3 d后对照组创面炎症反应消退,IL-4和IFN-γ的表达下降明显,而A,B,C组的表达仍然处于高位,体现出羊ADM的埋植使IL-4和IFN-γ的表达增高,与羊ADM引起的免疫反应有关。IL-4/IFN-γ的值显示:与对照组相比,3 d内A,B,C组差异无统计学意义(P>0.05),1周、2周、3周差异均有统计学意义(P<0.05),A,B,C组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:自制的羊ADM移植后引起的排斥反应强度较低,具有较低的免疫原性;交联和未交联羊ADM对IL-4和IFN-γ的表达的影响无明显差异。