致猪水肿病大肠杆菌鄂E株SLT-IIeB基因的克隆、序列分析及原核表达

以湖北本地分离的致猪水肿病大肠杆菌鄂E株为模板,PCR扩增去掉信号肽和跨膜区的SLT-IIeB基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-KG。同时对筛选出的阳性质粒pGEX-SLT-IIeB进行测序,测序结果与Genbank上发表的12个SLT-IIeB基因序列的同源性达100%,表明该基因保守性很好。重组质粒pGEX-SLT-IIeB经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达,SDS-PAGE分析表明表达产物GST-SLT-IIeB有特异性表达带,Western-blot检测证实表达产物具有免疫反应性。

表达SLTEC保护性抗原的重组猪霍乱沙门氏菌C500株的构建及生物学特性

【目的】利用平衡致死系统构建表达产类志贺氏毒素大肠杆菌(Shiga-liketoxin Escherichia coli,SLTEC)保护性抗原的减毒猪霍乱沙门氏菌。【方法】构建表达SLT-IIeB-FedF的重组质粒,再将其电转入终宿主菌减毒猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株中构建成口服活疫苗株,经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SLT-IIeB-FedF融合蛋白的表达情况,并观察重组菌体外培养的稳定性。【结果】利用宿主-载体平衡致死系统构建了表达SLTEC保护性抗原的重组减毒猪霍乱沙门氏菌,经SDS-PAGE电泳出现了1条蛋白质量约为37kDa的蛋白条带。且在没有选择压力的条件下体外能稳定地繁殖、生长和传代。【结论】成功构建表达SLTEC保护性抗原的重组减毒猪霍乱沙门氏菌,为发展猪水肿病-副伤寒的口服疫苗奠定了初步基础。