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抗菌肽Shiva-1基因的人工合成与克隆 被引量:6
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作者 卢强 刘维全 +5 位作者 江禹 王吉贵 杨振国 王宏伟 房金波 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期160-162,共3页
参照抗菌肽 Shiva-1的氨基酸序列 ,兼顾鱼类、昆虫和大肠杆菌偏爱的密码子 ,设计了 Shiva-1基因序列 ,加上适宜基因工程操作的酶切位点 ,人工合成了 2条分别为 92 bp和 91 bp的寡聚核苷酸片段。经互补链延伸反应、Eco RI酶切 ,将完整的 ... 参照抗菌肽 Shiva-1的氨基酸序列 ,兼顾鱼类、昆虫和大肠杆菌偏爱的密码子 ,设计了 Shiva-1基因序列 ,加上适宜基因工程操作的酶切位点 ,人工合成了 2条分别为 92 bp和 91 bp的寡聚核苷酸片段。经互补链延伸反应、Eco RI酶切 ,将完整的 Shiva-1基因反向克隆至 p UC1 8载体 ,经 PCR检测和序列分析证明 ,已正确克隆了抗菌肽 展开更多
关键词 抗菌肽 shiva-1 链延伸反应 基因克隆
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Shiva-1a基因在杆状病毒中的表达及其表达产物抑菌活性的检测 被引量:2
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作者 许丹 许信刚 +2 位作者 王志昇 闫东东 童德文 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期33-37,共5页
根据GenBank上公布的shiva-1a的成熟肽基因序列,人工合成shiva-1a基因并加入6×His标签。将shiva-1a基因克隆到杆状病毒转座载体pBacFast-Dual中,筛选重组质粒,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选得到重组杆状病毒DNA,以... 根据GenBank上公布的shiva-1a的成熟肽基因序列,人工合成shiva-1a基因并加入6×His标签。将shiva-1a基因克隆到杆状病毒转座载体pBacFast-Dual中,筛选重组质粒,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选得到重组杆状病毒DNA,以脂质体介导法转染Sf-9昆虫细胞,待细胞出现病变后,收集上清液从而获得重组杆状病毒。用此杆状病毒感染的Sf-9细胞,Western blot检测出分子量约5 ku的shiva-1a多肽,与预期结果大小一致。体外抑菌试验证明,表达的shiva-1a多肽对大肠杆菌(DE3菌株)具有抑菌活性。 展开更多
关键词 shiva-1a基因 杆状病毒表达系统 抗菌肽
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Transgenic Paulownia Expressing shiva-1 Gene Has Increased Resistance to Paulownia Witches' Broom Disease 被引量:4
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作者 Tao DU Yao WANG Qin-Xue HU Jie CHEN Sheng LIU Wen-Jin HUANG Mu-Lan LIN 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2005年第12期1500-1506,共7页
Stem segments from diseased Paulownia tomentosaXP, fortunei and leaves from healthy control were transformed with the expression vector p438PRSI via Agrobacterium tumefaciens. The p438PRSI vector contained shiva-1 gen... Stem segments from diseased Paulownia tomentosaXP, fortunei and leaves from healthy control were transformed with the expression vector p438PRSI via Agrobacterium tumefaciens. The p438PRSI vector contained shiva-1 gene, which encodes an antibacterial peptide under the control of a CaMV35S promoter. The regenerated plants from transformed explants were planted in a greenhouse and nursery. PCR and Southern blotting analysis showed that the shiva-1 gene was successfully integrated into the Paulownia genome. Transcription of the integrated shiva-1 gene was confirmed by RT-PCR. Bioassay in the green house and phytoplasma DNA-dot blotting demonstrated that resistance to Paulownia witch's broom disease (PWB) increased significantly in shiva-l-transgenic Paulownia. Further investigations indicated that higher Shiva- 1 expression correlated with fewer phytoplasma and less symptoms in diseased transgenic Paulownia. Together, our findings strongly suggest that breeding shiva-1-Paulownia is an effective strategy to control PWB disease. 展开更多
关键词 Agrobacterium tumefaciens PAULOWNIA Paulownia witch's broom PHYTOPLASMA shiva-1.
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人工合成杀菌肽对人肝癌细胞的杀伤作用 被引量:17
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作者 张卫民 彭朝晖 +2 位作者 黄自然 吴小兵 冯建钓 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 1998年第3期158-160,共3页
目的探讨人工合成杀菌肽(Shiva-1)对肿瘤细胞的杀伤及选择性杀伤作用机制。方法采用~3H-TdR 掺入法,细胞内游离钙含量及动态变化测定。扫描、透射电子显微镜法,观察人工合成杀菌肽 Shiva-1对人肝癌细胞的生长抑制、细胞 DNA 合成,细胞... 目的探讨人工合成杀菌肽(Shiva-1)对肿瘤细胞的杀伤及选择性杀伤作用机制。方法采用~3H-TdR 掺入法,细胞内游离钙含量及动态变化测定。扫描、透射电子显微镜法,观察人工合成杀菌肽 Shiva-1对人肝癌细胞的生长抑制、细胞 DNA 合成,细胞内游离钙离子含量的动态变化及对超微结构的影响。结果人工合成杀菌肽Shiva-1可抑制癌细胞生长及~3H-TdR 掺人细胞 DNA,使细胞内游离钙含量迅速降低,细胞超微结构改变;正常猴肾细胞 CV1未见损伤。结论人工合成杀菌肽 Shiva-1对肿瘤细胞具有杀伤及选择性杀伤作用;作用起始部位在细胞的膜性结构;作用机制不同于化学抗癌药物。细胞内游离钙含量降低可能与其选择性杀伤作用有关。 展开更多
关键词 杀菌肽 杀伤作用 肝癌
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