Influence of Ultrasonic Treatment on the Allergenic Properties of Shrimp (Penaeus vannamei) Allergen

现在的学习被承担决定紧张超声是否高能减少虾变应原的过敏性质。减少这些变应原的引起过敏症的性质将对过敏个人有益。虾蛋白质摘录和虾肌肉的样品被高紧张的超声对待，水为不同时间时期在 0 ℃ or50 ℃洗澡。对待，未经治疗的样品然后被 SDS 页，西方的污点和竞争性抑制 ELISA (Ci-ELISA ) 分析决定虾 allergenicity。Theresults 表演当摘录在 0 ℃被对待时，那高紧张的超声没在 allergenicity 上有效果。然而，重要减少在主要的虾变应原的水平被观察，钢笔一 1，当样品在 50 ℃被对待时。在 allergenicitywith Ci-ELISA 的决心，在 IgE 绑定的减小也被观察。

UPLC-MS法测定肉制品中虾过敏原含量的不确定度评定

对采用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS)法测定肉制品中虾过敏原含量的不确定度进行评定。通过建立数学模型分析UPLC-MS法测定肉制品中虾过敏原含量的方法流程和不确定度的来源,逐一计算不确定度分量并计算合成不确定度,得出扩展不确定度。检测结果的不确定度来源分为样品称量、重复性试验、方法准确度、样品前处理过程和样品溶液测定过程,其中样品溶液测定过程引入的不确定度占比最高,而这部分不确定度的来源主要为标准曲线拟合和对照品称量过程。经计算,方法的合成相对标准不确定度为0.057 9,合成标准不确定度为1.21 mg/kg,取置信度为95%时的扩展因子k=2,计算得到用此方法测定肉制品中虾过敏原含量的相对扩展不确定度为0.116,扩展不确定度为2.42 mg/kg。评定结果中各不确定度分量的占比结果表明:实验过程中应采用调整对照品称样量、合理化标准曲线工作溶液浓度范围的方式以减少方法整体的不确定度。因此,建议在对实际样品进行含量测定时,其报告的检测结果应带有相同单位的测量不确定度值。

超高效液相色谱-串联质谱法测定肉制品中的虾过敏原

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)法检测肉制品中虾过敏原的定量方法。方法:选取基质较为复杂的肉制品(西式火腿、香肠和肉丸)作为研究对象。样品经磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer solution,PBS)超声提取30 min,离心(10000 r/min,15℃,10 min)后加入乙腈去除脂肪,取样液加入内标肽段(2.5μmol/L,40μL)和胰蛋白酶(1 mg/mL,10μL)在37℃下酶解16 h后上液质进行分析,样品经T3柱进行分离,0.1%甲酸-水溶液和乙腈梯度洗脱,多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)正离子模式采集数据,内标法定量。结果:采用该方法测定肉制品中虾过敏原蛋白含量,其中定量肽段在0.001~2.0μmol/L范围内,线性关系良好,决定系数R2为1.0000,检出限为0.67 mg/kg,定量限为2.00 mg/kg;在三个加标浓度水平下,回收率为83.2%~104.5%,精密度为2.63%~7.92%。结论:该方法具有特异性强、灵敏度高和回收率好等优势,适用于肉制品中虾过敏原的筛查定量。

对虾原肌球蛋白致敏性消减技术研究进展

近年来,关于虾及其制品引起的过敏报道持续增加,严重影响消费者的健康以及生命安全。目前,关于虾过敏没有较好的治疗办法,只能通过避免食用来预防过敏的发生。虾过敏中有80%是由原肌球蛋白引起的,研究原肌球蛋白致敏性的消减技术,对研发低敏或脱敏产品具有重要意义。文章详细介绍了常见的物理、化学、生物以及联合处理等加工技术对原肌球蛋白致敏性的影响,以期为研发低敏水产品或脱敏食品提供参考。

美拉德反应中麦芽糖、葡萄糖对虾过敏原活性影响的研究

虾类加工过程能够改变虾类过敏原的结构和性质,从而影响其致敏活性。实验选取麦芽糖、葡萄糖等还原糖,与虾过敏原进行美拉德反应,通过检测虾过敏原蛋白的分子量、赖氨酸含量及免疫活性的变化,研究美拉德反应对虾过敏原免疫活性的影响。SDS-PAGE结果表明,美拉德反应使虾过敏原分子量增高,但赖氨酸含量的变化没有明显的规律性;而不同的还原糖对虾过敏原免疫活性的影响不同,葡萄糖使虾过敏原免疫活性降低约10%,麦芽糖能够使虾过敏原的免疫活性降低60%。实验表明,在合适的条件下,美拉德反应能够有效降低虾过敏原的免疫活性。

不同处理方法对虾过敏蛋白分子量及抗原性的影响

本文研究不同处理方法对虾过敏蛋白分子量及抗原性的影响。利用酶解、超高压、微波3种方法处理虾过敏蛋白,利用SDS-PAGE对虾过敏蛋白分子量大小进行测定,用OPA法对各种酶解条件下蛋白质的水解度进行测定,间接竞争ELISA法测定各种处理后过敏蛋白抗原性的变化。结果表明蛋白酶处理后虾过敏蛋白特征条带消失,而经超高压和微波处理的分子量大小没有变化;间接竞争ELISA检测表明三种处理均会导致虾过敏蛋白致敏性不同程度降低或消失。

不同虾类的过敏原及其过敏原性

The consumption of seafood is widespread in China.The increase in the rate of seafood allergies,as well as their persistence and severity,become an important food safety issue.To improve seafood allergy patients’ life quality,it is important to find a kind of seafood which has little or even none allergens.Different kinds of seafood live in different circumstances,it may have different allergens.This study compared the difference among varieties of shrimp.In the experiments,three kinds of shrimp were selected and the protein profiles were analyzed using SDS-PAGE.Then Immunoblotting and EAST inhibition were used to determine the allergenicity of them.The results show that main allergens of the three kinds of shrimp have molecules-36 kD,similar allergenicity,and critical cross-reactivity.

辐照对虾过敏原生化性质的影响

研究了以0、3、57、1、0kGy的辐照处理对虾过敏原的生化性质的影响。结果表明虾过敏原(Pen a1)提取液经辐照处理后,过敏原蛋白质的结构发生了变化,浊度和疏水性增加。并发现Pen a 1的溶液状态要比固体状态及活体状态对辐照处理更敏感。

果糖和木糖在美拉德反应中对虾类过敏原活性影响的研究

目的:研究果糖和木糖在美拉德反应中对虾类过敏原活性的影响。方法:选取果糖和木糖两种还原糖,在一定的条件下与虾类过敏原反应,通过检测虾类过敏原蛋白的分子量、赖氨酸含量及免疫活性的变化,研究美拉德反应对虾类过敏原免疫活性的影响。结果:木糖和果糖在与虾类过敏原反应后使得其分子量增高,并且作用时间越长,分子量增加越多;但赖氨酸含量的变化没有明显的规律性;酶联免疫的结果显示美拉德反应12h时果糖能够使虾过敏原活性增加44%,但随着时间的延长,虾过敏原的活性回复到初始的水平;而木糖对虾过敏原的免疫活性的影响在10%以内。结论:果糖和木糖在美拉德反应中不能有效降低虾过敏原的免疫活性。

虾类和蟹类的过敏原组分分析

目的:分析虾类和蟹类的过敏原组分。方法:聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot分析虾类和蟹类的主要过敏原组分。结果:不同种类的虾其主要过敏原组分相对分子质量(Mr)在36000附近,不同种类的蟹主要过敏原组分Mr在29000、36000、66000、89000附近。结论:不同种类的虾蟹存在共同过敏原。

河虾主要过敏组分的分离、纯化、鉴定及其致敏性分析

目的:鉴定河虾中的过敏原组分,对主要过敏原组分进行纯化并分析其致敏性强弱。方法:用磷酸盐缓冲液(PBS)制备河虾蛋白粗提液,将其与11例虾过敏症患者血清IgE进行Westernblot,鉴定各种分子量的河虾过敏原组分;河虾蛋白粗提液用硫酸铵沉淀、G-50凝胶层析和阴离子交换层析等方法纯化其主要过敏原组分,再用虾过敏患者血清IgE进行Westernblot鉴定;并将纯化的相对分子质量(Mr)为21000、36000、800003种主要过敏原组分与虾过敏症患者血清IgE做间接ELISA,以分析其致敏性强弱。结果:West-ernblot结果显示,河虾蛋白粗提液出现9个阳性条带;其中3种主要过敏原组分21000、36000、80000与患者血清的反应率为36.4%,63.6%,45.5%;将这3种Mr的蛋白组分分别做间接ELISA,结果显示21000、36000、80000过敏原组分与11例虾过敏症患者的混合血清IgE结合的吸光值都显著高于河虾蛋白粗提液。结论:河虾中至少存在9个过敏原组分;21000、36000、8000等3种蛋白组分为河虾的主要过敏原组分,其中以36000过敏原组分致敏率和致敏性最强。进一步研究将探明21000、36000、80000等3种河虾过敏原组分的共同抗原表位,以期为明确食物过敏原检测、临床诊断和虾过敏原疫苗设计提供基础。

虾类和蟹类过敏原的交叉反应性研究

目的:分析虾类和蟹类过敏原交叉反应性,探讨其在食物过敏症的预防、诊断和治疗中的意义。方法:采用SDS-PAGE分析虾蟹的蛋白组分,Western blot分析其过敏原组分,Western blot和ELISA抑制试验研究虾类和蟹类的过敏原交叉反应性。结果:虾类、蟹类过敏原蛋白组分相似性与其种属关系相关,相对分子量(Mr)在20 000、36 000、38 000、44 000、68 000、75 000、85 000处具有相同条带;Mr为36 000的蛋白是虾的主要过敏原,Mr为36 000、66 000、85 000的蛋白是蟹的主要过敏原;青蟹蛋白和日本沼虾蛋白对其余虾蟹过敏原有抑制作用,并且随着抑制物浓度增加抑制效应增强。结论:虾类和蟹类过敏原有相似性,其中Mr在36 000处相互之间存在较强的交叉反应。

虾过敏及虾过敏原

综述了虾过敏及虾过敏原,涉及过敏原的理化性质、生物活性、免疫学性质的研究,并对现存的问题做了简要介绍。

虾过敏原蛋白纯化中硫酸铵沉淀法的改进

目的优化虾过敏原蛋白纯化的硫酸铵沉淀工艺,提高纯化效果。方法测定不同饱和度硫酸铵溶液的体积和pH,将过敏原蛋白粉末加入固定饱和度和pH的硫酸铵溶液中沉淀,并用SDS-PAGE方法检测不同硫酸铵浓度下蛋白质组分的变化。结果PH7.5的30%饱和度硫酸铵溶液可有效地分离虾过敏原蛋白,进一步柱层析得到只有一条电泳带的样品。结论通过改进硫酸铵沉淀工艺,可提高虾过敏原蛋白的纯化效果。

虾类原肌球蛋白的Balb/c小鼠致敏动物模型构建研究

目的虾类主要过敏原原肌球蛋白(Tropomyosin,Tm)的Balb/c小鼠致敏动物模型的构建及Tm的低过敏性处理效果评价。方法本研究选用Balb/c小鼠,设立常见致敏蛋白卵清蛋白(OVA)组、虾主要过敏原Tm组、经无花果蛋白酶消减处理的Tm(Tm-E)和阴性对照PBS组,将各组样品与氢氧化铝佐剂(3∶1)混合后采用腹腔注射方式以构建Tm致敏动物模型,每次注射时间间隔为1周。第4天采集小鼠血清,通过ELISA评价血清中IgE和IgG抗体的效价变化。结果 OVA和Tm刺激38 d后产生大量IgE和IgG抗体;阴性对照组在整个刺激过程中其血清中不含有IgE和IgG抗体;Tm-E组在致敏24 d、38 d时其IgE的OD值分别较Tm组低77.83%和64.06%(P<0.01)。结论本研究成功构建了虾主要过敏原Tm的致敏动物模型,此外发现无花果蛋白酶解处理方式(酶活与底物比13.6 U/g,35℃酶解10 min)可有效降低Tm的过敏原性。

凡纳滨对虾次要过敏原肌质钙结合蛋白的质谱鉴定及免疫交叉反应

目的:质谱鉴定凡纳滨对虾相对分子质量(Mr)为21 000的次要过敏原组分肌质钙结合蛋白(SCP),分析它与其他虾、蟹等甲壳类过敏原的免疫交叉反应,以阐明SCP可作为甲壳类食物过敏原检测、检验及脱敏的标准过敏原物质。方法:运用MALDI-TOF/TOF-MS鉴定凡纳滨对虾Mr为21000的过敏原组分,利用软件BLAST、ClustalW分析甲壳类食物中该蛋白的氨基酸序列同源性,同时用纯化的21 000过敏原免疫小鼠制备其特异性多克隆抗体,通过该抗体与其他8种甲壳类食物蛋白粗提液的Western blot法结果分析该过敏原的免疫交叉反应。结果:质谱鉴定结果显示,凡纳滨对虾21 000过敏原为肌质钙结合蛋白;氨基酸序列同源性分析显示其与斑节对虾、中国对虾、克氏原螯虾、细趾小龙虾、褐虾的SCP序列一致性为81%～100%;Western blot结果显示,针对SCP的特异性多克隆抗体与凡纳滨对虾、刀额新对虾、斑节对虾、口虾蛄、罗氏沼虾、克氏原螯虾、远海梭子蟹、锈斑鲟、中华绒螯蟹粗提液在SCP对应的21 000左右处均有反应条带。结论:凡纳滨对虾Mr为21 000的次要过敏原为肌质钙结合蛋白,其氨基酸序列与多种甲壳类具有很高的同源性以及较强的免疫交叉反应。

PCR检测食品中致敏原虾源性成分

目的建立食品中致敏原虾源性成分的PCR检测方法。方法选择虾的16SrRNA基因作为物种鉴定的特异性标记基因,设计适合于PCR扩增的引物,进行虾的16SrRNA基因特异性和灵敏性检测。结果通过对14种虾、5种蟹、24种鱼、12种贝类以及章鱼等56种样品进行PCR检测,结果表明,可以很好地鉴别虾源性成分。为研究食品加工过程对检测灵敏度的影响,以虾肉和鱼肉为代表,进行133℃热处理30min的过程,检测灵敏度可达到在鱼肉粉中检出0.05%含量的虾源性成分。结论该方法特异、灵敏、准确,适于食品中致敏原虾源性成分的检测。

免疫印迹法对4种海虾主要过敏原的鉴定

以凡纳滨对虾、中国明对虾、刀额新对虾以及虾蛄4种海虾为研究对象,对这4种海虾过敏原蛋白组分进行研究。首先利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对4种海虾过敏原组分进行分析,然后经免疫印迹鉴定其主要过敏原。结果显示:凡纳滨对虾的主要过敏原为99、33、19、14kD的蛋白质组分;中国明对虾的主要过敏原为39、33、28kD的蛋白质组分;刀额新对虾的主要过敏原为33kD和24kD的蛋白质组分;虾蛄的主要过敏原为56kD和48kD的蛋白组分。

酶解处理对小鼠模型中虾主要致敏蛋白的致敏性影响分析

为探究酶解处理对动物模型中虾主要致敏蛋白的致敏性影响,68只雌性BALB/c小鼠随机分为生理盐水对照组、虾致敏蛋白组、酶解虾致敏蛋白组、酶对照组,腹腔注射各组溶液,测定小鼠的脾指数,血清中s Ig G、s Ig E、组胺含量,并观察灌胃处理后的小鼠小肠切片,探究酶解后蛋白的抗原性变化。结果表明,酶解处理使虾中主要致敏蛋白的α-螺旋和β-折叠比例分别下降3.5%和1.5%,β-转角跟无规则卷曲比例分别上升4.3%和1.7%,这些变化使小鼠体内s Ig E水平降低了40.44%。但虾致敏蛋白组的s Ig G和脾指数与酶解蛋白组相比差异不显著,且酶解蛋白组肠切片显示其炎症反应较致敏蛋白组更为明显。综上所述,酶解处理减弱了虾致敏蛋白的抗原性,在一定程度上降低了其致敏性,但是经过多次免疫,酶解后的致敏蛋白在小鼠体内依然能引起很强的过敏反应。本研究为探索致敏蛋白降敏机理提供了技术支撑。