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靶向Survivin基因siRNA诱导肝癌细胞凋亡的实验 被引量:7
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作者 王颖 蔡刚祥 吴亮 《医药导报》 CAS 2006年第7期648-651,共4页
目的探讨靶向survivin的siRNA转染肝癌细胞阻抑survivin表达,及其对肝癌细胞凋亡、增殖与细胞化疗敏感性的影响。方法设计合成特异性靶向survivin的siRNA序列。肝癌细胞株HepG2接种于6孔培养板内,分为5组:空白对照组、阴性对照组和低、... 目的探讨靶向survivin的siRNA转染肝癌细胞阻抑survivin表达,及其对肝癌细胞凋亡、增殖与细胞化疗敏感性的影响。方法设计合成特异性靶向survivin的siRNA序列。肝癌细胞株HepG2接种于6孔培养板内,分为5组:空白对照组、阴性对照组和低、中、高浓度转染组(分别给予50,100和200nmol.L-1siRNA转染)。作用36h后收集各组细胞。Westernblot法检测各组细胞survivin蛋白表达情况,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测survivinmRNA表达水平,流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡指数,四氮唑盐(MTT)法检测氟尿嘧啶(5-FU)和顺铂(DDP)对各组细胞的生长抑制率。结果各浓度siRNA转染组细胞survivin蛋白和mRNA表达有不同程度减弱。各浓度siRNA转染组细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.05),高浓度转染组最明显(P<0.05)。各浓度siRNA转染组细胞增殖指数明显低于各对照组(P<0.05),高浓度转染组最明显(P<0.05)。等浓度化疗药物5-FU和DDP对各浓度siRNA转染组细胞的抑制率明显高于对照组(P<0.05),高浓度转染组最明显(P<0.05)。结论不同浓度survivinsiRNA转染能下调survivin蛋白和mRNA表达,诱导肝癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性。 展开更多
关键词 survivin sirna 细胞凋亡 肝细胞癌 原发性
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siRNA抑制survivin基因周期的影响表达对HeLa细胞 被引量:1
2
作者 徐晓颖 李秀荣 +3 位作者 李娜 雷宏伟 苏旭 李国权 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2010年第4期368-372,共5页
目的设计靶向survivin基因的干涉片段,构建真核表达载体pSUPER/survivin并转染宫颈癌HeLa细胞,探讨siRNA抑制survivin表达对联合1射线宫颈癌HeLa细胞周期的影响。方法化学合成干涉引物,退火获得survivin基因的干涉片段,连入pSUPER... 目的设计靶向survivin基因的干涉片段,构建真核表达载体pSUPER/survivin并转染宫颈癌HeLa细胞,探讨siRNA抑制survivin表达对联合1射线宫颈癌HeLa细胞周期的影响。方法化学合成干涉引物,退火获得survivin基因的干涉片段,连入pSUPER载体并测序。将测序正确的pSUPER/survivin载体转染HeLa细胞株,RT—PCR法和流式细胞术检测HeLa细胞中survivin基因的表达,流式细胞术检测转染联合'射线照射后各组细胞的细胞周期数据。结果本实验成功的构建了pSUPER/survivin载体。转染pSUPER/survivin的HeLa细胞其survivin基因表达水平明显低于未转染的HeLa细胞及转染空载体pSUPER的HeLa细胞。1射线照射后,转染pSUPER/survivin的HeLa细胞发生了S期细胞比例下降,及G2/M期阻滞。结论成功的构建了pSUPER/survivin载体,siRNA干涉survivin可以作为提高放射敏感性的潜在分子靶点,通过减少S期细胞比例,促进肿瘤细胞凋亡,通过增加G2/M期阻滞增加放射线的杀伤。 展开更多
关键词 sirna干涉survivin基因 细胞周期 Γ射线 宫颈癌HELA细胞
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siRNA阻抑Survivin基因表达对肝癌细胞周期影响的研究
3
作者 韩灵敏 宋华 高鲁 《齐齐哈尔医学院学报》 2011年第23期3779-3781,共3页
目的采用RNA干扰(RNAi)技术抑制人肝癌HepG2细胞中Survivin基因表达,观察小分子干扰RNA(siRNA)对肝癌细胞周期的影响。方法构建人肝癌HepG2的survivin-siRNA,将其导入肝癌细胞系后研究。HepG2细胞分为四组:siRNA干扰组、siRNA干扰对照... 目的采用RNA干扰(RNAi)技术抑制人肝癌HepG2细胞中Survivin基因表达,观察小分子干扰RNA(siRNA)对肝癌细胞周期的影响。方法构建人肝癌HepG2的survivin-siRNA,将其导入肝癌细胞系后研究。HepG2细胞分为四组:siRNA干扰组、siRNA干扰对照组、未转染的对照组、空白载体组。作用48h后Western印迹检测基因沉默效果,MTT法测量细胞生长情况,流式细胞术分析siRNA对肝癌细胞增殖周期的影响。结果 Western印迹法显示干扰组survivin基因的表达受到明显抑制。MTT法显示经survivin基因干扰后的HepG2细胞相比对照组细胞吸光度A值较低;尤其是24、48小时降低更为明显(P<0.05)。流式细胞术显示干扰组的G2/M细胞百分率相对干扰对照组显着增大(P<0.05)。结论 siRNA转染能够抑制细胞survivin基因表达,使人肝癌细胞株HepG2细胞阻滞于G2/M期。 展开更多
关键词 sirna survivin基因 肝癌 细胞周
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存活素siRNA表达质粒的构建及其对MCF-7细胞细胞周期和增殖的调控(英文) 被引量:22
4
作者 李莉萍 梁念慈 罗超权 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第7期742-748,共7页
背景与目的存活素特异地在肿瘤组织中过表达,许多报道表明抑制它的功能对肿瘤治疗有利。RNA干扰被证明是一项能有效而特异地抑制基因表达的新技术。本研究的目的在于构建存活素基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒,并检测该质粒在乳腺... 背景与目的存活素特异地在肿瘤组织中过表达,许多报道表明抑制它的功能对肿瘤治疗有利。RNA干扰被证明是一项能有效而特异地抑制基因表达的新技术。本研究的目的在于构建存活素基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒,并检测该质粒在乳腺癌细胞中的生物学功能。方法应用含有U6启动子的mU6pro载体构建存活素siRNA质粒,RT-PCR和Westernblot法检测该质粒转染MCF-7细胞后存活素表达的变化,流式细胞仪和MTT法分别检测其对细胞周期和对细胞增殖的影响。结果存活素siRNA质粒明显下调MCF-7细胞中存活素的表达,阻断细胞周期在G1期,显著抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。结论通过RNA干扰,存活素的表达在mRNA和蛋白质水平上被下调。 展开更多
关键词 存活素 小分子干扰RNA表达质粒 乳腺癌细胞 细胞周期 细胞增殖
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siRNA干扰半乳凝素-3后对食管癌Eca-109细胞株增殖的影响 被引量:2
5
作者 刘建明 宋旭东 +1 位作者 孙军祥 董丽儒 《河北医药》 CAS 2010年第20期2796-2798,共3页
目的探讨siRNA干扰半乳凝素-3(Galectin-3)mRNA后,食管癌Eca-109细胞株增殖活性的影响。方法将Galectin-3-siRNA转染食管癌Eca-109细胞株后(转染组成2、3),分别用流式细胞术、免疫细胞化学和MTT检测转染效率、Galectin-3蛋白IOD值、OD... 目的探讨siRNA干扰半乳凝素-3(Galectin-3)mRNA后,食管癌Eca-109细胞株增殖活性的影响。方法将Galectin-3-siRNA转染食管癌Eca-109细胞株后(转染组成2、3),分别用流式细胞术、免疫细胞化学和MTT检测转染效率、Galectin-3蛋白IOD值、OD值和细胞增殖抑制率。结果转染组食管癌Eca-109细胞株Galectin-3蛋白IOD值、OD值和细胞增殖抑制率与空白对照组和阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论运用siRNA可以有效抑制Galectin-3蛋白的表达及细胞增殖活性,Galectin-3参与食管癌Eca-109细胞株的增殖,Galectin-3可成为治疗食管癌的靶基因。 展开更多
关键词 Galectin-3 RNA 小分子干扰 食管肿瘤 靶基因 细胞周期调控
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Rho A蛋白通路在DLC-1基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制 被引量:10
6
作者 吴平平 苏昀 +3 位作者 金治 吴鹏 徐佳佳 黄培林 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2009年第4期247-251,共5页
目的:探讨Rho A蛋白通路在DLC-1(frequently deleted in liver cancer-1)基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制。方法:构建pcDNA3.1-DLC1质粒载体,脂质体法转染HT29细胞,筛选稳定细胞系;pull-down方法分析Rho A蛋白活性;实时定... 目的:探讨Rho A蛋白通路在DLC-1(frequently deleted in liver cancer-1)基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制。方法:构建pcDNA3.1-DLC1质粒载体,脂质体法转染HT29细胞,筛选稳定细胞系;pull-down方法分析Rho A蛋白活性;实时定量PCR检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、p21的表达变化;流式细胞仪检测细胞周期分布。结果:野生型人结肠癌HT29细胞DLC-1基因表达呈阴性,经转染获得DLC-1稳定表达细胞系。与野生型及空载组HT29细胞相比,转染组细胞RhoA蛋白活性下降;Cyclin D1表达下调,p21表达上调;G1期及凋亡细胞数增加,而G2期细胞数下降。结论:转染DLC-1基因引起人结肠癌HT29细胞Rho A蛋白活性下调,进而可能通过对Cyclin D1、p21表达的调控使细胞周期G1期阻滞并诱导凋亡,同时分裂前期细胞数减少,细胞增殖受抑。 展开更多
关键词 肝癌缺失基因-1 RHO A蛋白 CYCLIN D1基因 P21基因 细胞周期 HT29细胞株
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SiRNA联合介导Livin和Survivin基因沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的实验研究 被引量:2
7
作者 陈小刚 罗鹏程 +4 位作者 张青汉 袁平成 姜卫东 吴尚君 黄恩应 《临床泌尿外科杂志》 2014年第6期544-548,共5页
目的:观察siRNA联合介导Livin和Survivin基因的沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的作用。方法:构建Livin和Suvivin联合靶向的小干扰RNA(siRNA)重组表达载体shRNA,然后将目的载体转染于人肾癌细胞株786-O。应用实时荧光定量聚合酶链反... 目的:观察siRNA联合介导Livin和Survivin基因的沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的作用。方法:构建Livin和Suvivin联合靶向的小干扰RNA(siRNA)重组表达载体shRNA,然后将目的载体转染于人肾癌细胞株786-O。应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot方法分别检测转染前细胞经顺铂、5-FU和丝裂霉素处理后的Livin和Survivin基因的mRNA与蛋白水平的变化。应用CCK-8试验检测转染前后细胞对顺铂、5-氟尿嘧啶(5-FU)和丝裂霉素的半数致死量(IC50)、细胞增殖的变化。结果:CCK-8结果显示,联合介导Livin和Survivin基因沉默组细胞较分别单独介导细胞组化疗的敏感性明显增强(P<0.05),且转染前后细胞对顺铂、5-FU和丝裂霉素的IC50发生显著变化(P<0.05)。结论:SiRNA联合介导Livin和Survivin基因表达下调,发挥协同增强的siRNA作用。 展开更多
关键词 肾癌 sirna LIVIN基因 survivin基因 786-O细胞
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Raf激酶抑制蛋白对HepG2肝癌细胞生物学特性影响的研究 被引量:1
8
作者 侯艳红 张磊 +2 位作者 段云卉 李丹 张林 《现代肿瘤医学》 CAS 2012年第2期249-254,共6页
目的:Raf激酶抑制蛋白(RKIP)是磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族的重要成员,近来的一些研究表明RKIP基因的蛋白产物在人类肝癌组织中表达显著下调。本研究旨在探讨RKIP基因对于肝癌细胞增殖状态,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及浸润转移能力... 目的:Raf激酶抑制蛋白(RKIP)是磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族的重要成员,近来的一些研究表明RKIP基因的蛋白产物在人类肝癌组织中表达显著下调。本研究旨在探讨RKIP基因对于肝癌细胞增殖状态,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及浸润转移能力等恶性表型的影响,以初步阐明其功能意义。方法:将RKIP基因插入载体pcDNA3.1构建PC-RKIP真核表达载体。脂质体转染肝癌细胞系HepG2建立稳定转染细胞系(Hep-RKIP),而后使用生长曲线法、平板克隆形成实验法、流式细胞仪,细胞迁徙实验法等方法分析稳定表达株相关生物学特性变化。同时设立空载体转染组和空白细胞组为对照。结果:与转染pcDNA3.1空载体及空白HepG2肝癌细胞相比,转染PC-RKIP载体的稳定表达细胞株生长有显著减慢,后两组之间亦无显著差异,平板克隆形成实验结果显示PC-RKIP转染组平均克隆形成率显著低于其它两组(P<0.05),细胞周期检测显示PC-RKIP转染组处于G0/G1期的细胞比例显著高于未处理的HepG2细胞和转染pcDNA3.1空载体的HepG2细胞(P<0.05),而处于G2-M期的细胞比例显著均低于其它两组(P<0.05),其它各期细胞比例均无显著差异。流式细胞仪法检测细胞凋亡结果显示PC-RKIP转染组调亡比例为6.4%左右,显著高于对照组(P<0.05)。细胞迁徙实验结果提示PC-RKIP转染组穿膜率与其它两组相比显著降低(P<0.05)。结论:RKIP基因可能具有抑制细胞生长增殖及分裂作用,同时可影响细胞周期及细胞凋亡,对肝癌细胞侵袭转移能力可能有一定抑制作用,对抑制细胞恶性表型有一定意义。 展开更多
关键词 肝癌 RKIP基因 细胞周期 转染
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沉默CDC25A基因后肝癌裸鼠移植瘤组织中差异表达基因的筛选
9
作者 陈思 唐艳萍 +4 位作者 李科志 杨春 黄小青 陈秀娟 曹骥 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期123-128,共6页
目的:探讨应用基因芯片技术筛选出可能受细胞分裂周期因子25A(cell division cycle 25A,CDC25A)调控的基因,阐明并验证CDC25A对肝癌相关基因的表达具有调控作用。方法:本课题组前期通过siRNA干扰技术沉默人肝癌HepG2细胞中CDC25A的表达... 目的:探讨应用基因芯片技术筛选出可能受细胞分裂周期因子25A(cell division cycle 25A,CDC25A)调控的基因,阐明并验证CDC25A对肝癌相关基因的表达具有调控作用。方法:本课题组前期通过siRNA干扰技术沉默人肝癌HepG2细胞中CDC25A的表达并成功构建了肝癌裸鼠移植瘤模型。基于上述研究成果,在本研究中应用Affymetrix基因表达谱芯片技术进一步筛选沉默CDC25A后肝癌移植瘤组织中的差异表达基因,并进行GO及KEGG分析,应用qPCR对部分差异表达基因进行验证。结果:通过芯片技术筛选出沉默CDC25A基因的肝癌移植组织中的差异表达基因188个,其中上调基因78个、下调基因110个。这些差异表达基因主要涉及细胞增殖、细胞凋亡、蛋白复合物结合、细胞外间隙等方面,参与黏着斑、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)受体相互作用等通路的改变。q PCR对部分差异表达基因验证的结果显示,HIPK2 mRNA表达上调,微纤丝关联蛋白5(microfibrillar-associated protein 5,MFAP5)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1,CCND1)mRNA表达下调,与芯片检测结果一致。结论:应用人基因表达谱芯片技术成功筛选出沉默CDC25A后肝癌裸鼠移植瘤组织中的差异表达基因,为探究CDC25A影响肝癌细胞生长提供了支持线索。 展开更多
关键词 肝癌 细胞分裂周期因子25A 人基因表达谱芯片 移植瘤 GO分析 KEGG分析
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沉默EZH2基因表达对宫颈癌细胞增殖能力影响的分析 被引量:2
10
作者 冀静 李琛 +2 位作者 黄慧芳 裴美丽 方静 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期2586-2592,共7页
本实验旨在探讨EZH2基因在宫颈癌中表达情况、对宫颈癌细胞增殖能力的影响及其机制。通过免疫组织化学法检测20例正常宫颈、20例CIN及60例宫颈鳞癌组织中EZH2蛋白表达;采用RT-PCR法检测4个宫颈癌细胞株中EZH2 m RNA的表达。通过Lipofect... 本实验旨在探讨EZH2基因在宫颈癌中表达情况、对宫颈癌细胞增殖能力的影响及其机制。通过免疫组织化学法检测20例正常宫颈、20例CIN及60例宫颈鳞癌组织中EZH2蛋白表达;采用RT-PCR法检测4个宫颈癌细胞株中EZH2 m RNA的表达。通过Lipofectamin2000介导EZH2 si RNA瞬时转染C33A细胞株,Western blotting法检测si RNA的干扰效率。MTT、流式细胞仪检测EZH2沉默后细胞增殖及细胞周期变化;Western blotting检测p21表达变化。结果显示,正常宫颈组织、CIN、宫颈鳞癌中EZH2阳性表达率分别为15%、30%、76.7%,呈逐级升高趋势,后者与前两者见差异有统计学意义(p<0.01);EZH2的表达同宫颈鳞癌细胞分化程度、间质浸润深度及淋巴结转移显著相关(p<0.05)。EZH2 m RNA在宫颈癌细胞株He La、Si Ha、C33A及Caski中均表达,其中C33A细胞中表达最高。si RNA沉默EZH2基因明显抑制宫颈癌C33A细胞增殖,阻滞细胞周期于G1期;Western blotting检测p21表达上调。由此得出结论,EZH2基因在宫颈癌中高表达;沉默EZH2基因可通过上调p21蛋白的表达阻滞细胞周期于G1期、抑制宫颈癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 EZH2基因 宫颈癌 sirna 细胞增殖 细胞周期
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肝癌缺失基因1对人卵巢癌细胞OVCAR-3增殖和迁移的影响
11
作者 史惠蓉 张海玲 +1 位作者 吴开元 刘惠娜 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期315-320,共6页
目的:初步探讨肝癌缺失基因1(deleted in livercancer 1,DLC1)对人卵巢癌细胞株OVCAR-3增殖和迁移的影响。方法:采用脂质体介导重组质粒pEGFP-C3-DLC1转染人卵巢癌OVCAR-3细胞后,RT-PCR及蛋白质印迹法检测DLC1mRNA和蛋白的表达。MTT法、... 目的:初步探讨肝癌缺失基因1(deleted in livercancer 1,DLC1)对人卵巢癌细胞株OVCAR-3增殖和迁移的影响。方法:采用脂质体介导重组质粒pEGFP-C3-DLC1转染人卵巢癌OVCAR-3细胞后,RT-PCR及蛋白质印迹法检测DLC1mRNA和蛋白的表达。MTT法、FCM法和Transwell小室法分别评价DLC1基因转染前后细胞增殖、细胞周期和细胞迁移能力的变化,蛋白质印迹法检测黏着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)和c-Jun氨基末端蛋白激酶(c-Jun NH2-terminalprotein kinase,JNK)蛋白及其磷酸化水平的变化。结果:成功转染pEGFP-C3-DLC1后,OVCAR-3细胞中可检测到DLC1mRNA和蛋白的稳定表达。稳定转染DLC1基因后,OVCAR-3细胞的增殖和迁移能力受到明显抑制,而且停滞于G0/G1期的细胞比例增加,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。转染DLC1基因后的OVCAR-3细胞中p-FAK(Y925)和p-JNK(Thr183/Tyr185)蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:DLC1基因转染OVCAR-3细胞后可能通过下调p-FAK(Y925)和p-JNK(Thr183/Tyr185)蛋白表达水平,使OVCAR-3细胞停滞于G0/G1期,从而抑制OVCAR-3细胞的体外增殖和迁移能力。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 转染 细胞增殖 细胞周期 细胞运动 肝癌缺失基因1
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p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响研究
12
作者 朱振双 陈伟庆 +1 位作者 房殿亮 张杨 《中国药房》 CAS CSCD 2012年第41期3888-3890,共3页
目的:利用p15-shRNA表达载体干扰细胞周期相关基因p15,探讨p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响。方法:用梯度浓度的顺铂诱导HepG2细胞耐药并建立动态耐药模型HepG2/顺铂/2.0,以不同浓度(30、60、90nmol·L-1)的干... 目的:利用p15-shRNA表达载体干扰细胞周期相关基因p15,探讨p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响。方法:用梯度浓度的顺铂诱导HepG2细胞耐药并建立动态耐药模型HepG2/顺铂/2.0,以不同浓度(30、60、90nmol·L-1)的干扰质粒p15-shRNAY2和阴性对照质粒(shRNA-F)转染HepG2/顺铂/2.0细胞后48h检测p15荧光阳性细胞,筛选最佳干扰浓度;以筛选结果转染HepG2/顺铂/2.0细胞,与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较,检测细胞存活情况、周期分布和p15、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:最佳干扰浓度为60nmol·L-1;与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较,p15-shRNAY2转染细胞的存活率明显增加,G1期细胞明显减少,p15、Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白表达明显增加(P均<0.01)。结论:p15-shRNA可抑制p15基因表达,干扰细胞周期使G1期的比例减少,增加HepG2/顺铂/2.0对顺铂的耐药性。 展开更多
关键词 细胞周期 P15基因 肝癌 顺铂耐药 SHRNA干扰
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抗增殖蛋白与肝癌的研究进展 被引量:2
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作者 杨晨 高柳 冯怡博 《解剖科学进展》 2018年第2期205-207,共3页
抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)在细菌、酵母、原虫、哺乳类动物等不同种属的细胞中广泛分布,且高度保守,参与细胞周期调控、增殖与凋亡、核转录以及维持线粒体形态等多种生物进程。PHB是肝发育的必要因素,PHB1蛋白在人类肝癌细胞株中表达... 抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)在细菌、酵母、原虫、哺乳类动物等不同种属的细胞中广泛分布,且高度保守,参与细胞周期调控、增殖与凋亡、核转录以及维持线粒体形态等多种生物进程。PHB是肝发育的必要因素,PHB1蛋白在人类肝癌细胞株中表达下降,PHB基因缺失会抑制人肝癌细胞株细胞增殖、引起细胞凋亡。本综述系统性阐述抗增殖蛋白在肝癌发生、发展过程中的作用,有助于我们揭示相关机制,为肝癌的防治提供理论基础。 展开更多
关键词 人肝癌细胞株 抗增殖 蛋白 细胞周期调控 细胞凋亡 哺乳类动物 线粒体形态 细胞增殖
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