目的:探讨异烟肼、利福平、吡嗪酰胺(HRZ)三联抗结核药/表皮转化生长因子(TGF)-β1 si RNA纳米脂质体对体外BCG感染的人巨噬细胞中Ag85A及TGF-β1表达的影响。方法:体外培养人单核细胞株THP-1诱导分化成巨噬细胞,分为4组,空白组为单纯...目的:探讨异烟肼、利福平、吡嗪酰胺(HRZ)三联抗结核药/表皮转化生长因子(TGF)-β1 si RNA纳米脂质体对体外BCG感染的人巨噬细胞中Ag85A及TGF-β1表达的影响。方法:体外培养人单核细胞株THP-1诱导分化成巨噬细胞,分为4组,空白组为单纯巨噬细胞培养;模型组为巨噬细胞与卡介苗(bacillus calmetteguerin,BCG)以1∶5的比例共培养3h,制备BCG感染的巨噬细胞模型;对照组为BCG感染的巨噬细胞与HRZ三联抗结核药纳米脂质体共培养;实验组为BCG感染的巨噬细胞与三种不同浓度的HRZ三联抗结核药/TGF-β1 si RNA纳米脂质体(C1组为35mg/ml,C2组为40mg/ml,C3组为50mg/ml)共培养。采用RT-PCR检测各组人巨噬细胞中Ag85A及TGF-β1的mRNA表达量,Western-blot方法检测Ag85A及TGF-β1的蛋白表达量。结果:与空白组相比,模型组Ag85A和TGF-β1的m RNA及蛋白量表达明显上调(P<0.05);对照组中Ag85A的mRNA及蛋白量和TGF-β1的mRNA水平与模型组相比明显下调(P<0.05);实验组3种不同浓度(C1组、C2组、C3组)HRZ三联抗结核药/TGF-β1 si RNA纳米脂质体处理后,Ag85A和TGF-β1的mRNA及蛋白表达量与模型组和对照组相比进一步下调(P<0.05),随着纳米脂质体浓度的增加,Ag85A和TGF-β1 m RNA及蛋白表达量有明显下降趋势,C1组与C3组相比Ag85A m RNA及蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05);C1组与C2组、C3组相比TGF-β1 mRNA及蛋白量表达差异有统计学意义(P<0.05);C2组与C3组相比Ag85A m RNA和TGF-β1蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HRZ三联抗结核药/TGF-β1 si RNA纳米脂质体对体外BCG感染的人巨噬细胞具有明显的下调Ag85A基因表达作用及TGF-β1基因沉默作用。展开更多
目的研究癌基因纺锤体与着丝粒相关蛋白3(spindle and kinetochore-associated proteins 3,SKA3)在非小细胞肺癌中的表达规律及作用调控机制。方法选取山东省公共卫生临床中心病理科2019年1—12月检验的60例非小细胞肺癌组织蜡块作为观...目的研究癌基因纺锤体与着丝粒相关蛋白3(spindle and kinetochore-associated proteins 3,SKA3)在非小细胞肺癌中的表达规律及作用调控机制。方法选取山东省公共卫生临床中心病理科2019年1—12月检验的60例非小细胞肺癌组织蜡块作为观察组,同时随机选取30例癌旁正常肺组织作为对照组,制作非小细胞肺癌组织片。利用免疫细胞化学法(immunohistochemistry,IHC)检测SKA3在非小细胞肺癌及癌旁正常肺组织中的表达情况。以非小细胞肺癌细胞系两步A549及SK-MES-1为体外研究模型,用平板克隆实验、Transwell侵袭实验、流式细胞术分别检测敲低SKA3对非小细胞肺癌细胞增殖能力、侵袭能力及凋亡能力的影响。结果免疫组化技术显示SKA3在非小细胞肺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常肺组织(68.3%vs 16.6%),差异有统计学意义(χ^(2)=18.678,P<0.05),平板克隆试验显示脂质体转染siRNA细胞株敲低SKA3表达后观察癌细胞克隆数为(11±2)个,明显少于对照组的(97±11)个,差异有统计学意义(t=-652.977,P<0.05),流式细胞仪检测显示脂质体转染干扰组细胞G1/G0期和S期细胞比率分别为(71.7±6.1)%和(20.2±2.9)%,对照组相应为(53.4±5.4)%和(31.3±4.2)%,两组比较差异有统计学意义(t=13.922、-14.669,P<0.05)。结论SKA3在肺癌中高表达,可促进肺癌细胞增殖及侵蚀,有希望成为非小细胞肺癌的预防和治疗靶点。展开更多
文摘目的:探讨异烟肼、利福平、吡嗪酰胺(HRZ)三联抗结核药/表皮转化生长因子(TGF)-β1 si RNA纳米脂质体对体外BCG感染的人巨噬细胞中Ag85A及TGF-β1表达的影响。方法:体外培养人单核细胞株THP-1诱导分化成巨噬细胞,分为4组,空白组为单纯巨噬细胞培养;模型组为巨噬细胞与卡介苗(bacillus calmetteguerin,BCG)以1∶5的比例共培养3h,制备BCG感染的巨噬细胞模型;对照组为BCG感染的巨噬细胞与HRZ三联抗结核药纳米脂质体共培养;实验组为BCG感染的巨噬细胞与三种不同浓度的HRZ三联抗结核药/TGF-β1 si RNA纳米脂质体(C1组为35mg/ml,C2组为40mg/ml,C3组为50mg/ml)共培养。采用RT-PCR检测各组人巨噬细胞中Ag85A及TGF-β1的mRNA表达量,Western-blot方法检测Ag85A及TGF-β1的蛋白表达量。结果:与空白组相比,模型组Ag85A和TGF-β1的m RNA及蛋白量表达明显上调(P<0.05);对照组中Ag85A的mRNA及蛋白量和TGF-β1的mRNA水平与模型组相比明显下调(P<0.05);实验组3种不同浓度(C1组、C2组、C3组)HRZ三联抗结核药/TGF-β1 si RNA纳米脂质体处理后,Ag85A和TGF-β1的mRNA及蛋白表达量与模型组和对照组相比进一步下调(P<0.05),随着纳米脂质体浓度的增加,Ag85A和TGF-β1 m RNA及蛋白表达量有明显下降趋势,C1组与C3组相比Ag85A m RNA及蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05);C1组与C2组、C3组相比TGF-β1 mRNA及蛋白量表达差异有统计学意义(P<0.05);C2组与C3组相比Ag85A m RNA和TGF-β1蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HRZ三联抗结核药/TGF-β1 si RNA纳米脂质体对体外BCG感染的人巨噬细胞具有明显的下调Ag85A基因表达作用及TGF-β1基因沉默作用。