siRNA表达框架对TNF-α和IL-1的特异性抑制

[目的]利用siRNA表达框架研究RNA干扰技术对小鼠腹腔活化巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1的抑制作用及其干扰序列的特异性。[方法]原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,构建针对小鼠TNF-α和IL-1的siRNA表达框架,转染细胞,用ELISA方法检测TNF-α和IL-1分泌情况。[结果]TNF-α干扰组TNF-α分泌量(21.87±1.20)pg/mL较IL-1干扰组(28.02±1.03)pg/mL及对照组(27.64±1.92)pg/mL均明显降低,差异有显著性意义(P<0.05)。IL-1干扰组IL-1分泌量(40.37±4.02)pg/mL较TNF-α干扰组(57.86±3.91)pg/mL及对照组(59.55±3.57)pg/mL均明显降低,差异有显著性意义(P<0.05)。[结论]构建的针对TNF-α和IL-1的siRNA表达框架能够明显抑制巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1,且干扰作用具有序列特异性。

应用siRNA表达框架进行原代细胞RNA干扰的操作方法

介绍应用siRNA表达框架对原代培养的细胞进行RNA干扰。RNA干扰是由双链RNA介导的特异同源靶基因转录后沉默的过程,它已经广泛应用到基因功能研究、基因表达调控机制和抗病毒感染等热门领域,在哺乳动物的原代细胞中进行RNA干扰的研究为功能基因研究提供了重要意义。siRNA表达框架与脂质体的转染率直接影响RNA干扰的效果,本文介绍了如何设计和构建siRNA表达框架,筛选最佳的靶位点。

RNA干扰对小鼠腹腔活化巨噬细胞分泌TNF-α的影响

[目的]探讨RNA干扰对小鼠腹腔活化巨噬细胞表达TNF-α的抑制作用。[方法]原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,构建针对小鼠TNF-α的siRNA表达框架,转染细胞,用RT-PCR方法检测TNF-αmRNA的水平,用ELISA方法检测TNF-α分泌情况。[结果]从凝胶电泳图像TNF-α/β-actin灰度值比可以看出干扰组TNF-αmRNA的水平0.18±0.03较阳性对照组0.91±0.05及阴性对照组0.85±0.10明显降低(P<0.05)。干扰组TNF-α分泌量(21.87±1.20)pg/mL较阳性对照组(28.02±1.03)pg/mL及阴性对照组(27.64±1.92)pg/mL均明显降低(P<0.05)。[结论]RNA干扰可以有效地抑制原代培养小鼠腹腔巨噬细胞TNF-αmRNA水平及其蛋白分泌。