P53和siRNA-c-myc质粒对乳腺癌细胞生物学特性影响的研究

目的通过真核转染技术对乳腺癌细胞进行转染,探讨P53和siRNA-c-myc质粒对乳腺癌细胞生物学特性影响。方法治疗组是利用真核转染技术来共表达P53和siRNA-c-myc质粒,使其在质粒的介导下导入人体乳腺癌细胞内,通过观察细胞的形态以及其增殖能力从而探究其对乳腺癌的治疗作用,对照是以正常的乳腺癌细胞为研究对象。结果治疗组成功的将P53和siRNA-c-myc重组质粒导入人体乳腺癌细胞内,重组细胞的形状发生了明显的变化,更接近正常的细胞,与对照组相比其增殖能力下降。结论 P53和siRNA-c-myc质粒对乳腺癌具有抑制作用,在乳腺癌的协同治疗中起到了重要的作用。

P53和siRNA-c-myc质粒对乳腺癌的治疗作用研究

目的探讨P53及siRNA-c-myc对乳腺癌的影响。方法测定乳腺癌标本内P53蛋白阳性表达率,采用siRNA干扰乳腺癌细胞株c-myc的表达,检测其癌细胞增殖分化的情况。结果乳腺癌患者中P53蛋白阳性表达率明显高于对照组(P<0.05),siRNA导入组细胞增殖明显受到抑制(P<0.01)。结论 P53和c-myc与乳腺癌的发生发展密切相关,检测乳腺癌中P53蛋白的表达情况可作为判断癌症转移和预后的参考指标,c-myc可作为基因疗法中重要的靶点。

P53和siRNA-c-myc质粒对乳腺癌的作用机制研究

目的探讨P53及siRNA-c-myc对乳腺癌的作用机制。方法测定乳腺癌标本内P53蛋白阳性表达率,采用siRNA干扰乳腺癌细胞株c-myc,检测其癌细胞增殖分化的情况。结果乳腺癌患者中P53蛋白阳性表达率明显高于对照组(P<0.05),siRNA导入组细胞增殖明显受到抑制(P<0.01)。结论 P53和c-myc与乳腺癌的发生发展密切相关,检测乳腺癌中P53蛋白的表达情况可作为判断癌症转移和预后的参考指标,c-myc可作为基因疗法中重要的靶点。

P53和siRNA-c-myc质粒对乳腺癌的作用机制实验分析

目的:探讨P53和siRNA-c-myc质粒对乳腺癌的作用机制。方法:测定乳腺癌标本内P53蛋白表达率;同时采用siRNA干扰乳腺癌细胞株c-myc的表达,并检测癌细胞的增殖分化情况。结果:与对照组相比,P53蛋白表达率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);siRNA导入组的细胞增殖则明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:P53和cmyc与乳腺癌有着密切的关系,这也为乳腺癌治疗提出一种新思路。

RNAi技术沉默K562细胞中c-myc基因的初步研究

目的运用RNAi技术,设计针对c-myc的小干扰RNA(siRNA),研究其干扰效果。方法针对c-mycmRNA的第1357靶位点设计siRNAs,经LipofectamineTM2000脂质体法转染K562细胞,进行RT-PCR、细胞计数和MTT法及流式细胞仪检测,观察其干扰效果。结果转染组与阴性对照组和空白对照组相比,c-mycmRNA表达明显减弱,细胞计数和MTTD(λ)值均有显著降低,并有明显的凋亡率。结论运用RNAi技术,可以有效地干扰c-myc的表达,并进一步诱导细胞凋亡。

siRNA抑制c-myc基因的表达对宫颈癌细胞增殖的影响

目的:利用siRNA(small interference RNA)技术研究c-myc基因的对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法:依据Promega公司在网上提供的设计软件,设计针对c-myc基因的siRNA,合成DNA模板,体外转录合成siRNA。通过阳离子聚合物jet- SITM-ENDO将合成的siRNA转染入HeLa细胞,以未转染细胞以及错义序列siRNA-scr转染细胞为对照。用细胞计数法检测siRNA对HeLa细胞增殖的影响。流式细胞法检测细胞周期及蛋白表达的变化,RT-PCR法比较转染前后c-myc mRNA表达水平的变化。结果:细胞计数法结果显示,转染24 h后c-myc基因siRNA明显抑制MCF-7细胞增殖,转染48 h后,抑制效率稳定。c-myc基因siRNA转染后能有效地抑制HeLa细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,siRNA转染组c-myc mRNA、蛋白的表达量明显低于空白对照组、错义序列组。结论:体外转录合成的siRNA可有效降低HeLa细胞c-myc基因的表达,抑制细胞增殖。

BC047440-siRNA对肝癌HepG2细胞增殖抑制及其分子机制的初步探讨

目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制肝癌相关基因BC047440的表达,观察其受抑制后对细胞增殖能力的影响并初步分析其抑制增殖的分子机制。方法设计针对BC047440基因的siRNA,构建pGenSil-1-BC047440-siRNA真核表达载体。分别用脂质体法将介导siRNA的真核绿色荧光表达载体pGenSil-1-BC047440-siRNA、空载体质粒pGenSil-1转染人肝癌HepG2细胞建立稳定细胞株;随后实验分为3组:转染siRNA表达载体组(PP2)、转染空质粒组(PP1)和未处理的亲本HepG2细胞组(PP0)。采用荧光定量PCR检测BC047440mRNA表达变化;CCK-8分析细胞增殖活性;平板克隆形成实验检测单个细胞的增殖能力;最后选取NF-κB下游增殖相关基因c-myc、bcl-2、cyclin D1,用荧光定量PCR检测其mRNA水平的变化。结果成功转染并获得PP1、PP2组抗性克隆,PP2组与PP0组比较,BC047440mRNA水平明显降低,抑制率约为75%;细胞增殖实验中PP2组细胞增殖能力明显降低,平板克隆形成实验结果显示PP2组克隆形成率为(8.42±0.82)%,明显低于PP1组[(39.31±5.39)%]和PP0组[(40.96±3.21)%](P<0.01)。检测NF-κB下游增殖相关的几个基因时发现PP2组c-myc mRNA表达明显降低,约为PP0组的12/25;其余基因无明显变化。结论干扰BC047440基因表达可以抑制肝癌细胞的增殖,初步揭示BC047440基因可以对c-myc起正向调控作用,从而促进肝癌细胞的增殖,提示抑制BC047440基因可能成为控制人肝癌细胞生长的有效靶点。

c-myc特异性siRNA对HL-60细胞作用的研究

目的研究针对c-myc基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对白血病细胞株HL-60细胞增殖及c-myc蛋白表达的影响,探讨应用siRNA进行白血病基因治疗的可能性。方法制备特异性对应c-myc基因的siRNA转染HL-60细胞,倒置显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增殖状态,免疫细胞化学染色法检测c-myc蛋白表达的改变。结果siRNA转染HL-60细胞后,细胞生长受抑,增殖能力减弱,其增殖抑制作用于转染后48h、72h最明显,增殖抑制率分别为53.2%和51.5%;免疫细胞化学染色结果显示c-myc蛋白阳性率从空白组(76.67±4.35)%下降至(23.33±3.56)%。结论针对c-myc基因的siRNA对HL-60细胞增殖及c-myc蛋白表达有明显抑制作用,有望为白血病提供新的治疗途径。

C-myc小干扰RNA对HL-60细胞凋亡的影响

目的:研究c-myc小干扰RNA对白血病细胞凋亡的影响,探寻白血病基因治疗的新方法。方法:应用针对c-myc的小干扰RNA转染HL-60细胞48 h后,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,琼脂糖凝胶电泳法检测DNA梯形带和流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡。结果:c-myc小干扰RNA作用后,HL-60细胞生长受抑,可见细胞核固缩,胞桨内出现凋亡小体。阴性对照组和空白对照组没有明显变化。DNA电泳干扰组出现典型的梯状条形带,对照组未出现明显凋亡梯形带。流式细胞仪分析干扰组细胞凋亡率可达26.21±0.75%,明显高于阴性对照组的4.58±0.48%和空白对照组的3.76±0.30%。结论:c-myc小干扰RNA对HL-60细胞有明显的抑制作用,可抑制细胞增殖,导致细胞凋亡,有望成为白血病靶向基因治疗的新工具。

siRNA沉默c-myc对肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖的影响

目的应用siRNA干扰肾上腺皮质癌SW-13细胞c-myc基因的表达,探讨siRNA沉默c-myc对肾上腺皮质癌细胞增殖的影响。方法将siRNA-c-myc转染入SW-13细胞中,采用荧光定量PCR和Western blot检测转染后c-myc的表达,MTT分析SW-13细胞的增殖,荧光定量PCR检测转染后FHIT在SW-13细胞中的表达。结果 c-myc mRNA在转染48 h后明显下降,c-myc蛋白在转染72 h后明显下降。SW-13细胞增殖能力在转染24 h后开始下降,48 h和72 h后受到明显抑制。沉默c-myc基因后,FHIT在SW-13细胞的表达有所升高。结论 siRNA沉默c-myc使肾上腺皮质癌细胞增殖受到抑制。siRNA沉默c-myc基因为肾上腺皮质癌的靶向治疗提供新的理论依据。

SUMO-1基因沉默对肝癌细胞株SMMC-7721 bcl-2及c-myc基因表达的影响

目的探讨SUMO-1基因沉默后对肝癌细胞株SMMC-7721bcl-2及c-myc表达的影响。方法将人工合成的针对人SUMO-1基因的siRNA片段转染人肝癌细胞株SMMC-7721,采用RT-PCR、Westernblot方法检测siRNA沉默SUMO-1基因的效果及SUMO-1基因沉默后对bcl-2及c-myc基因表达的影响。结果人工合成的针对SUMO-1基因的siRNA片段能显著地抑制SMMC-7721SUMO-1基因的表达,24、48、72h沉默率分别为9.80%、73.43%、46.56%。SUMO-1基因表达下调后SMMC-7721细胞内bcl-2及c-myc基因表达也明显下调,差异有统计学意义。结论 siRNA是一种理想的沉默SMMC-7721SUMO-1基因表达的方法,SUMO-1基因沉默后SMMC-7721细胞内的bcl-2及c-myc基因表达均明显下调,说明SUMO-1基因控制癌基因bcl-2及c-myc的表达。

c-myc小干扰RNA诱导人髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡

本研究探讨c-myc小干扰RNA对白血病细胞系HL-60诱导凋亡的作用。将体外合成的siRNA转染HL-60细胞,观察形态学变化,应用MTT法绘制细胞生长曲线,用细胞集落培养观察c-myc siRNA对HL-60细胞增殖的影响;应用DNA片段化分析细胞的凋亡,RT-PCR及Western blot检测c-myc siRNA作用前后c-myc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果表明:c-myc siRNA能明显抑制HL-60细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)约为150nmol/L;DNA片段化的检出证实c-myc siRNA能有效诱导HL-60细胞调亡,凋亡率与药物作用时间呈正相关。c-myc siRNA与HL-60细胞作用后c-myc基因和蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论:c-myc siRNA能有效抑制HL-60细胞增殖,降低c-myc基因和蛋白的表达,诱导其凋亡。

沉默c-myc基因对Jiyoye细胞增殖与凋亡的影响

目的运用RNA干扰(RNAi)技术,探讨经慢病毒载体介导的小干扰RNA(siRNA)转染Jiyoye细胞对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响,以期为靶向c-myc基因的白血病和恶性淋巴瘤基因治疗提供体外实验依据。方法设计、合成一对针对c-myc基因的c-myc-3寡聚核苷酸链和一对阴性对照c-myc-neg寡聚核苷酸链。退火,然后连接到pLVX干扰载体上,包装,慢病毒介导转染人Jiyoye细胞株。转染后培养72h,流式细胞术检测各组细胞转染率,pLVX-c-myc-3转染Jiyoye细胞,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖;AnnexinV-异硫氰酸荧光素/碘化吡啶(FITC/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果①转染72 h后,阳性细胞比例c-myc-neg组与c-myc-3组差异无统计学意义(P>0.05);两组细胞平均荧光强度差异、细胞转染率差异无统计学意义(P>0.05)。②转染168 h,转染pLVX-c-myc实验组细胞生长缓慢,与阴性对照组和空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。转染pLVX-c-myc 72 h后,实验组细胞抑制率为(46.40±1.41)%,阴性对照组细胞抑制率为(17.03±1.32)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。③转染pLVX-c-myc 72 h后,实验组早期凋亡细胞比例(25.6±4.2)%,阴性对照组早期凋亡细胞(15.1±4.2)%,空白对照组早期凋亡细胞为(12.7±1.8)%,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组晚期凋亡细胞比例(11.5±4.7)%,阴性对照组为(9.3±4.7)%,空白对照组为(8.4±2.8)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论设计合成构建的干扰序列pLVX-c-myc-3,可沉默c-myc基因,抑制Jiyoye细胞增殖,诱导细胞凋亡,为进一步探讨沉默c-myc基因在白血病和淋巴瘤靶向治疗中的作用提供了实验依据。

小干扰RNA抑制c-Myc表达对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的应用小干扰RNA(siRNA)干扰乳腺癌MCF-7细胞的c-Myc表达,了解c-Myc对肿瘤细胞增殖和凋亡的作用。方法将c-Myc siRNA,经LipofectamineTM2000脂质体转染MCF-7细胞后,实时定量RT-PCR和Western Blotting法检测细胞c-Myc mRNA和蛋白的表达,MTT法和流式细胞仪检测干扰后细胞的增殖和凋亡水平。结果转染后MCF-7细胞的c-Myc的mRNA与蛋白表达明显减弱,增殖能力显著降低,凋亡率明显提高。结论运用RNAi技术,可以有效地干扰MCF-7细胞c-Myc的表达,抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡。

套细胞淋巴瘤C-myc基因、LSD1表达及临床意义

目的探究套细胞淋巴瘤C-myc基因、LSD1表达及临床意义。方法回顾性分析2010年1月~2015年12月就诊于我院的30例套细胞淋巴瘤(MCL)患者的临床资料,将其纳入研究组,并将同时期的30例增生性淋巴结炎患者临床资料纳入对照组。采用SP免疫组织化学方法检测两组病例病理组织中C-myc、LSD1蛋白表达情况,并应用小干扰RNA(siRNA)沉默套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞的C-myc基因,Western blot检测C-mycsiRNA作用后凋亡相关蛋白C-myc、Bcl-2、Procaspase3表达水平。分析C-myc、LSD1蛋白表达与套细胞淋巴瘤临床病理分期的相关性及C-mycsiRNA对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞凋亡相关蛋白C-myc、Bcl-2、Procaspase3的影响。结果经Spearman相关性分析显示,C-myc、LSD1蛋白表达与MCL临床病理分期无相关性(P>0.05)。C-mycsiRNA处理Jeko-1细胞24 h后,Western blot检测显示凋亡相关蛋白C-myc、Bcl-2、Procaspase3表达呈浓度依赖性下降。结论C-myc、LSD1蛋白表达与MCL临床病理分期无相关性,干扰Jeko-1细胞C-myc基因后可下调凋亡相关蛋白C-myc、Bcl-2、Procaspase3表达水平,C-myc基因可能成为靶向治疗的新靶点。

RNA干扰抑制c-myc基因表达对D341细胞增殖的影响

目的探讨应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制髓母细胞瘤D341细胞株的c-myc基因对D341细胞的生长、细胞周期及凋亡的变化。方法制备特异性针对c-myc基因的siRNA,转染D341细胞,实时定量RT-PCR、Western blot检测c-myc基因表达情况,流式细胞仪进行细胞周期及凋亡检测。结果siRNA转染D341细胞后,c-myc基因表达在转染后24h抑制效率最高,c-myc蛋白在48h抑制效率最高,并随siRNA浓度的增大,沉默c-myc基因效率增高。RNA干扰抑制D341细胞c-myc基因后,细胞生长停滞于G1期。结论针对c-myc基因的siRNA对D341细胞c-mycmRNA及蛋白有明显抑制作用,细胞生长受到抑制,有望成为髓母细胞瘤的新的治疗途径。

c-myc靶向小干扰RNA诱导乳腺癌细胞凋亡的作用

目的构建小干扰RNA(siRNA)表达载体,体外观察其诱导乳腺癌细胞凋亡效应。方法基因克隆技术构建人cmyc癌基因特异性siRNA表达载体,体外转染MCF7,48h后检测c-myc癌基因表达状况并观察MCF7凋亡诱导效应。结果(1)成功构建siRNA表体载体:pEGFP-C1/U61、pEGFP-C1/U62和pEGFP-C1/U63;(2)siRNA表达载体转染MCF748h后,pEGFP-C1/U62组显著抑制胞内c-myc表达(80%);(3)转染24h和48h后,pEGFP-C1/U62组凋亡率分别为11.01%和21.30%,明显高于对照组(P<0.01)。结论构建的cmyc靶向siRNA表达载体能显著下调cmyc在MCF7中的过表达,诱导乳腺癌细胞株MCF7凋亡。

DNA-PKcs失活对c-Myc蛋白表达的影响

目的:通过DNA-PKcs表达抑制的细胞模型,研究DNA-PKcs与癌基因c-myc表达调控的关系。方法:利用siRNA技术或抑制剂建立DNA-PKcs表达抑制细胞模型,Western印迹检测DNA-PKcs和c-Myc蛋白表达变化,Northern印迹检测癌基因c-myc的mRNA表达,SEAP检测系统检测c-myc转录活性变化。结果:稳定表达DNA-PKcssiRNA的细胞DNA-PKcs蛋白和c-Myc蛋白表达明显降低,同时c-myc转录活性也被抑制,但c-myc在mRNA水平无明显变化。渥曼青霉素(wortmannin,0.2μmol/L)同样也可抑制c-Myc蛋白表达和转录活性,而对c-myc的mRNA表达无影响。结论:DNA-PKcs参与c-myc基因的表达调控,DNA-PKcs是一个潜在的肿瘤治疗靶分子。

C-myc-siRNA通过调控ROS诱导子宫内膜癌细胞凋亡

为探讨原癌基因C-myc-siRNA对子宫内膜癌细胞凋亡的影响,本研究利用细胞计数盒(cell counting Kit-8, CCK-8)法分别检测C-myc-siRNA转染组和空载体转染组(Vector-NC)的子宫内膜癌细胞活力;蛋白免疫印迹法(Western blotting)分别检测C-myc-siRNA转染组和空载体转染组(Vector-NC)的子宫内膜癌细胞凋亡蛋白Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2的变化;流式细胞仪分别检测C-myc-siRNA转染组和空载体转染组(Vector-NC)活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)的变化;蛋白免疫印迹法(Western blotting)分别检测预处理NAC (ROS抑制剂)后,C-myc-siRNA转染组和空载体转染组(Vector-NC)的子宫内膜癌细胞凋亡相关蛋白Bax以及Bcl-2的变化。结果表明:C-myc-siRNA转染子宫内膜癌细胞后,促凋亡相关蛋白Bax的表达显著高于空载体转染组,且抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达明显低于空载体转染组(p<0.05);C-myc-siRNA转染子宫内膜癌细胞后,细胞ROS水平明显增加(p<0.05);NAC预处理显著减弱C-myc-siRNA对子宫内膜癌细胞凋亡的促进作用(p<0.05)。本研究结论表明,C-myc-siRNA能够通过调控ROS诱导子宫内膜癌细胞凋亡。