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Effects of Human Insulin Gene Transfection on the Adipogenic Differentiation of Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells in Silk Fibroin Scaffolds <i>in Vitro</i> 被引量:1
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作者 Cheng Zhang Yi Liu +2 位作者 Jun Tang Meisi Xue Sijia Min 《Open Journal of Regenerative Medicine》 2015年第2期15-25,共11页
The resorption of the transplanted fat over time limited the use of autologous fat for the reconstruction of soft tissue defect. Tissue engineering (TE) adipose with silk fibroin scaffold could be a promising substitu... The resorption of the transplanted fat over time limited the use of autologous fat for the reconstruction of soft tissue defect. Tissue engineering (TE) adipose with silk fibroin scaffold could be a promising substitute for soft tissue filling. In this study, we try to develop a tissue engineering adipose in vitro by seeding silk fibroin scaffold with human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUCMSCs) after transfected with recombinant human insulin gene lentivirus. Our aim was to observe the effects of the insulin gene transfection on the adipogenesis of hUCMSCs when cultured with silk fibroin scaffolds. The hUCMSCs infected with recombinant lentiviral pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP were seeded on silk fibroin scaffolds and cultured in adipogenic differentiation medium for 5 - 7 days. The expression of adipogenic gene PPARγ-2 was tested by RT-PCR after 7 days culture of adipogenic induction. The accumulation of cytoplasmic droplets of neutral lipids was assessed by Oil Red O staining. The RNA and protein expression of transfected insulin gene in hUCMSCs were detected by QPCR and western blot. The effect of recombinant lentivirus transfection on the growth and proliferation of hUCMSCs was observed by MTT test. We observed that the 2-ΔΔCt value of insulin gene expression of hUCMSCs in the transfected group was 300.25 times higher than that in the untransfected group. The western blot showed that a positive band was discerned at the site of a relative molecular mass of 8 × 103 Dalton in transfected group. After adipogenic culture for 7 days, under the fluorescent inverted phase-contrast microscope, after Oil Red O staining, a lot of adipocytes appeared in silk fibroin scaffold;round adipose droplets showed intracellularly;the size of the adipocytes was not homogenous, and the density of adipocytes in transfected group was significantly higher than that in untransfected group (P = 0.007, P < 0.01). RT-PCR results showed that the expression of adipogenic gene PPARγ-2 in transfected group was much stronger than that in untransfected group. MTT test showed that there was no significant difference in optical density (A) at each time point between transfected group and nontransfected group (P = 0.056, P > 0.05). And there was also no significant difference in optical density (A) between cell group and cell-scalffold group (P = 0.066, P > 0.05). We concluded that insulin gene could obviously promote the adipogenic differentiation of hUCMSCs, and a tissue engineering adipose could be constructed by the silk fibroin scaffolds seeded with human insulin gene-modified hUCMSCs effectively in vitro. 展开更多
关键词 Tissue Engineering ADIPOSE Human UMBILICAL Cord Mesenchymal Stem Cells silk Fibroin Insulin Recombinant LENTIVIRUS gene Transfection
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丝路物语——织物葡萄纹样文化基因分析与再生设计实践
2
作者 米高峰 许露月 《工业工程设计》 2024年第4期33-40,共8页
旨在挖掘丝绸之路上织物葡萄纹样所蕴含的文化基因,探索其在数字时代下的活化再生与创新应用。首先,通过文献查阅与实地考察,收集归纳织物葡萄纹样案例;其次,基于文化基因理论,选取代表性样本,从显性与隐性层面介入分析;再次,依据研究结... 旨在挖掘丝绸之路上织物葡萄纹样所蕴含的文化基因,探索其在数字时代下的活化再生与创新应用。首先,通过文献查阅与实地考察,收集归纳织物葡萄纹样案例;其次,基于文化基因理论,选取代表性样本,从显性与隐性层面介入分析;再次,依据研究结果,设定设计要素,建立资源库,引入CGM模型实现纹样再生;最后,借助数字技术,将再生纹样以数字动态化形式应用。借由对织物葡萄纹样的学理思考与再生设计,实践了丝路遗产的数字传承路径,亦为传统物象的当代表达拓展了新语料。 展开更多
关键词 织物葡萄纹样 丝路文化 文化基因 CGM模型 再生设计
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家蚕茧丝数量性状的分子遗传基础研究进展
3
作者 李春林 代方银 《蚕学通讯》 2024年第3期48-54,共7页
家蚕品种选育的目标经济性状多属于典型的数量性状,其遗传基础研究是家蚕育种发展的重要基础。由于茧丝产量与品质直接关系到养蚕业和丝绸工业的效益,故近百年来茧质相关性状是家蚕数量遗传研究的重点。21世纪以来,随着基因组学的发展... 家蚕品种选育的目标经济性状多属于典型的数量性状,其遗传基础研究是家蚕育种发展的重要基础。由于茧丝产量与品质直接关系到养蚕业和丝绸工业的效益,故近百年来茧质相关性状是家蚕数量遗传研究的重点。21世纪以来,随着基因组学的发展和功能基因研究体系的日臻完善,家蚕数量性状遗传研究进入一个新的阶段。近年来,家蚕茧丝产量和茧丝纤度主效基因的鉴定先后获突破,家蚕泛基因组计划研究成果为该领域的发展奠定了更加坚实的基础。本文着重对家蚕茧丝数量性状的分子遗传基础研究最新进展进行综述,以期为针对家蚕茧丝性状的分子改良提供参考。 展开更多
关键词 家蚕 茧丝性状 分子基础 基因鉴定
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“海丝”视野下福清传统红砖文化基因类型研究
4
作者 周丽彬 陈丽卿 黄聪捷 《福建建设科技》 2024年第4期11-14,共4页
福清传统红砖蕴含着福建海丝文化基因的艺术风貌和秩序特征,包含着福清人的文化认同、场所认同和价值观念。文章深入解析“海丝”视野下的福清文化基因遗传密码,通过结构、色彩、图纹、肌理等基因因子的识别和类型组构,总结归纳福清传... 福清传统红砖蕴含着福建海丝文化基因的艺术风貌和秩序特征,包含着福清人的文化认同、场所认同和价值观念。文章深入解析“海丝”视野下的福清文化基因遗传密码,通过结构、色彩、图纹、肌理等基因因子的识别和类型组构,总结归纳福清传统红砖文化基因形态类型特征。展现了福建海丝文化的理性之美、大度之美和共情之美,以期保护、传承地方文化多样性,为建设宜居宜业和美乡村提供新艺术设计思路。 展开更多
关键词 海丝文化基因 福清传统红砖 类型图谱 文化传承
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“一带一路”倡议下丝路精神的重要价值和实践路径
5
作者 陈旻玥 《文化创新比较研究》 2024年第20期173-176,共4页
中国作为兼具陆海优势的国家,其海洋强国的建设离不开海洋文化的全球传播。而要实现这一宏伟目标,必须依托“一带一路”倡议下的陆海文化交流与融合。丝绸之路所承载的丝路精神——和平合作、开放包容、互学互鉴、互利共赢,不仅是“一... 中国作为兼具陆海优势的国家,其海洋强国的建设离不开海洋文化的全球传播。而要实现这一宏伟目标,必须依托“一带一路”倡议下的陆海文化交流与融合。丝绸之路所承载的丝路精神——和平合作、开放包容、互学互鉴、互利共赢,不仅是“一带一路”建设的精神支柱和动力源泉,更是推动文化交流的宝贵财富。在深刻领会丝路精神的基础上,该文从文化基因和传播媒介两个维度探索实践路径,以更好地传承和弘扬丝路精神,加强不同文明间的对话与互鉴,进而促进全球各国的共同发展与繁荣。这一过程不仅有助于提升中国海洋文化的国际影响力,也将为世界文明交流互鉴贡献中国智慧和中国方案。 展开更多
关键词 “一带一路” 丝路精神 重要价值 实践路径 文化基因 传播媒介
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蜕皮激素氧化酶基因在家蚕丝腺中的表达特征及重组表达分析
6
作者 刘雪冰 李珊 +3 位作者 张基开朗 杨宏国 程廷才 刘春 《蚕学通讯》 2023年第2期1-9,共9页
昆虫蜕皮激素氧化酶(EO)是分解蜕皮激素的关键酶之一,该酶通过蜕皮激素3位异构化途径将蜕皮激素分解成3异构化蜕皮激素,从而调控蜕皮激素的滴度。课题组前期通过家蚕转录组学分析发现一个在丝腺组织特异表达的蜕皮激素氧化酶基因(EOs),... 昆虫蜕皮激素氧化酶(EO)是分解蜕皮激素的关键酶之一,该酶通过蜕皮激素3位异构化途径将蜕皮激素分解成3异构化蜕皮激素,从而调控蜕皮激素的滴度。课题组前期通过家蚕转录组学分析发现一个在丝腺组织特异表达的蜕皮激素氧化酶基因(EOs),为了研究该基因的时空表达模式及蛋白质功能,对丝腺蜕皮激素氧化酶基因的表达谱进行了分析,同时利用原核表达系统对其进行重组表达及分离纯化。RT-PCR和qRT-PCR检测表明,EOs在家蚕幼虫5龄期的丝腺组织特异表达,且主要在中部丝腺的前部表达;免疫荧光实验结果表明,EO不仅存在于家蚕中部丝腺细胞,而且还会分泌到丝腺腺腔中。将EOs全长cDNA克隆到pMD-19T载体中,再进一步亚克隆到原核表达载体PET-28a,然后将构建好的pET28-BmEOs质粒转入大肠埃希菌BL21中进行表达,通过SDS-PAGE检测发现在1mmol/LIPTG诱导后的上清中有一条大小约60kD的蛋白质条带,经Westernblot检测该蛋白质可与抗体发生特异性结合,表明BmEOs被成功表达。将大量上清经过Ni亲和柱纯化后,获得了纯化的目的蛋白质。研究结果为进一步分析丝腺中蜕皮激素氧化酶基因及蛋白质的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 家蚕 蜕皮激素氧化酶 丝腺 基因表达 免疫荧光定位 原核表达 蛋白质纯化
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家蚕丝腺响应高低温胁迫的转录组分析
7
作者 段惠元 卿卓 +7 位作者 叶占峰 任晓晓 杨万军 孙运朋 罗泽虎 邢丹 罗朝斌 凡迪 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期113-126,共14页
丝腺是家蚕合成和分泌丝蛋白的唯一器官,温度在丝腺合成丝蛋白的过程中具有重要调控作用,对蚕丝产量和品质都有重要影响。了解丝腺对饲养温度的响应机制对有效调控熟蚕吐丝有重要借鉴作用,以实用蚕品种贵蚕7号为研究对象,在丝腺发育和... 丝腺是家蚕合成和分泌丝蛋白的唯一器官,温度在丝腺合成丝蛋白的过程中具有重要调控作用,对蚕丝产量和品质都有重要影响。了解丝腺对饲养温度的响应机制对有效调控熟蚕吐丝有重要借鉴作用,以实用蚕品种贵蚕7号为研究对象,在丝腺发育和丝蛋白合成关键时期(5龄期)分别采用20℃、25℃和30℃不同温度条件进行饲养,并取游走期丝腺进行转录组比较分析。结果发现高温组(30℃)和低温组(20℃)与正常适宜饲养温度组(25℃)相比,共鉴定到109053个差异表达基因。其中30℃饲养条件下存在67个显著上调表达基因,196个显著下调表达基因;20℃饲养条件下存在101个显著上调表达基因,124个显著下调表达基因。高温组和低温组之间分别存在4个和7个特异差异表达基因。进一步对这些差异基因进行GO和KEGG功能富集分析,发现高温组差异表达基因主要集中于氨基酸代谢、保幼激素代谢和能量代谢等与丝蛋白合成紧密相关的信号通路,低温组差异表达基因主要富集于苯丙素的生物合成、谷胱甘肽代谢等与物质代谢合成相关的信号通路,共同富集的通路主要集中于物质运输和能量代谢。这说明高温和低温胁迫影响丝腺发育或丝蛋白合成分泌的分子途径既存在显著差异又有部分相似之处,高温可能同时影响到丝腺的发育和丝蛋白的合成来影响蚕丝产量,而低温可能主要是通过能量代谢间接影响丝蛋白的合成。上述结果为理解家蚕丝腺对饲养温度的响应机制提供了参考依据。 展开更多
关键词 丝腺 温度 转录组测序 代谢途径 基因表达
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超声引导下甲状腺FNAB联合BRAF V600E基因检测对甲状腺微小结节的诊断价值 被引量:2
8
作者 朱莉莎 杜朝阳 +1 位作者 黎兵 喻昆霖 《宜春学院学报》 2023年第6期76-78,119,共4页
目的:探讨超声引导下甲状腺细针穿刺活检(FNAB)联合丝/苏氨酸特异性激酶基因突变基因V600E(BRAF V600E)检测对甲状腺微小结节的诊断价值。方法:选取2020年10月~2021年10月于我院进行甲状腺切除术患者67例,术前均接受甲状腺FNAB及BRAF V6... 目的:探讨超声引导下甲状腺细针穿刺活检(FNAB)联合丝/苏氨酸特异性激酶基因突变基因V600E(BRAF V600E)检测对甲状腺微小结节的诊断价值。方法:选取2020年10月~2021年10月于我院进行甲状腺切除术患者67例,术前均接受甲状腺FNAB及BRAF V600E基因检测,并与术后病理结果进行比对分析。结果:与术前单一进行FNAB相比,术前FNAB联合BRAF V600E基因检测的术后病理符合率(94.03%),特异度(97.14%),敏感度(90.63%)均高于单一FNAB检查,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:超声引导下甲状腺FNAB联合BRAF V600E检测可提高甲状腺微小结节术前检出率,对患者治疗及疾病诊断具有较高的参考价值。 展开更多
关键词 甲状腺微小结节 超声引导 细针穿刺活检 丝/苏氨酸特异性激酶基因突变基因V600E 病理诊断
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蜘蛛拖丝蛋白基因的构建及在大肠杆菌中的表达 被引量:21
9
作者 李敏 章文贤 +1 位作者 黄智华 黄建坤 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期331-334,共4页
蜘蛛大壶腹线产生的拖丝是非常优良的纤维蛋白 ,具有独特的强度和弹性。基于拖丝蛋白高度重复序列和部分cDNA序列 ,合成蜘蛛拖丝蛋白基因单体 ,通过头尾相连的构建策略 ,得到拖丝蛋白多聚体 ,与原核高效表达载体pET30a(+)连接 ,转化大... 蜘蛛大壶腹线产生的拖丝是非常优良的纤维蛋白 ,具有独特的强度和弹性。基于拖丝蛋白高度重复序列和部分cDNA序列 ,合成蜘蛛拖丝蛋白基因单体 ,通过头尾相连的构建策略 ,得到拖丝蛋白多聚体 ,与原核高效表达载体pET30a(+)连接 ,转化大肠杆菌BLR(DE3) ,用IPTG诱导表达。表达产物经His .Bind树脂金属螯合亲和层析一步纯化 ,纯度达 90 %以上 ,表达量为 2 0mg L。SDS PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达产物分子量为 37kD 。 展开更多
关键词 蜘蛛 拖丝蛋白基因 大肠杆菌 表达
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转pK2.10-拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株的筛选 被引量:11
10
作者 王春生 刘欣 +1 位作者 原璐 安铁洙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1262-1265,共4页
为了筛选转pK2.10-拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株,本研究参照GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因序列(AY555585和AH015065)设计并人工合成拟蜘蛛基因四聚体(4S),与pcDNA3.1载体(K2.10启动子)相连构建真核表达载体(pcDNA3.1-K2.10-4S),采... 为了筛选转pK2.10-拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株,本研究参照GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因序列(AY555585和AH015065)设计并人工合成拟蜘蛛基因四聚体(4S),与pcDNA3.1载体(K2.10启动子)相连构建真核表达载体(pcDNA3.1-K2.10-4S),采用脂质体介导法转染绵羊成纤维细胞,通过药物筛选、阳性细胞鉴定及体外培养等方法,获得了转蜘蛛拖丝蛋白基因的绵羊成纤维细胞株。结果,用pcDNA3.1-K2.10-4S表达载体转染冷冻复苏的绵羊成纤维细胞后,利用G418筛选法获得neo基因的抗性细胞,即阳性细胞;采用PCR方法对阳性细胞鉴定显示,所构建的载体整合到了细胞基因组中;对阳性细胞的染色体核型分析显示,阳性细胞核型稳定,与正常细胞的核型无差异;阳性细胞经冷冻复苏后仍能保持原有的特性。该细胞株的建立为进一步开展转拟蜘蛛拖丝蛋白基因的克隆羊研究奠定了基础。 展开更多
关键词 拟蜘蛛拖丝蛋白基因 载体构建 转染 绵羊成纤维细胞
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玉米自交系K 12花丝红色基因的分子标记 被引量:8
11
作者 孙玲凌 林兴娥 +2 位作者 谢慧玲 付志远 汤继华 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期480-482,共3页
利用自交系K12和琼68的1套分离群体对玉米红花丝基因进行了遗传分析,发现K12的红花丝由1对显性基因控制,利用数量性状和质量性状基因定位的方法将K 12中控制红花丝的基因定位在第10染色体上,与SSR引物um c 1576的遗传距离为3.0 cM.
关键词 玉米 红花丝 基因定位 分子标记
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大腹圆蛛主壶腹腺cDNA文库构建和丝蛋白基因筛选 被引量:5
12
作者 任洪林 柳增善 +2 位作者 潘风光 赵君 李延松 《生物技术》 CAS CSCD 2002年第5期1-3,共3页
首次通过反转录 -置换法和使用pUC18质粒成功构建大腹圆蛛 (Araneusventricosus)主壶腹腺 (majorampullategland)cDNA基因文库 ,并以鸟枪法从中筛选出具有典型重复结构的大腹圆蛛主壶腹丝蛋白cDNA基因AvF1,大小为 174 4bp ,编码区为15 7... 首次通过反转录 -置换法和使用pUC18质粒成功构建大腹圆蛛 (Araneusventricosus)主壶腹腺 (majorampullategland)cDNA基因文库 ,并以鸟枪法从中筛选出具有典型重复结构的大腹圆蛛主壶腹丝蛋白cDNA基因AvF1,大小为 174 4bp ,编码区为15 72bp ,编码氨基酸 5 2 4个 ,分子量为 4 2 4 89 5 5Da,典型的重复结构为(GGP)nGGX。与现有已知的蛛丝蛋白基因中三带金蛛 (Argiopetrifas ciata)鞭毛样丝基因 (AtfF)有最高的同源性 6 9 3%。大腹圆蛛主壶腹腺cDNA文库的构建和蛛丝蛋白新基因的克隆 ,为提供大腹圆蛛蛛丝蛋白基因背景和进一步研究蛛丝蛋白奠定了基础。 展开更多
关键词 大腹圆蛛 主壶腹腺 CDNA文库 构建 丝蛋白基因 筛选 蜘蛛丝
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基因枪轰击法将蜘蛛丝蛋白基因(ADF3)转入海岛棉的研究 被引量:10
13
作者 黄全生 刘霞 +4 位作者 王义琴 王冬梅 杨克锐 李建平 葛峰 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2004年第4期248-250,共3页
用海岛棉茎尖作为基因枪转化的靶材料,建立了可重复的海岛棉转化系统。将海岛棉茎尖分生组织经过3~6周的诱导、继代培养生长后,可以形成足够量的再生植株。用含有Npt-Ⅱ基因和蜘蛛丝蛋白基因的质粒轰击新疆海岛棉4个品种茎尖分生组织,... 用海岛棉茎尖作为基因枪转化的靶材料,建立了可重复的海岛棉转化系统。将海岛棉茎尖分生组织经过3~6周的诱导、继代培养生长后,可以形成足够量的再生植株。用含有Npt-Ⅱ基因和蜘蛛丝蛋白基因的质粒轰击新疆海岛棉4个品种茎尖分生组织,在含有70~100mg/l卡那霉素的培养基上筛选、预再生、再生及生根培养,获得的24株抗卡那霉素转基因再生植株。所获得的转基因植株经卡那霉素筛选,再生植株总DNA提取,Southern点杂交分子检测,初步证明有2株转化植株目的基因已整合到海岛棉基因组中,同时也已得到种子。研究为通过植物基因工程的方法以期改良棉花纤维品质提供了一条新的途径。 展开更多
关键词 基因枪轰击法 蜘蛛丝蛋白基因 海岛棉 转基因 茎尖分生组织
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应用基因技术的纺织新纤维——蜘蛛丝 被引量:5
14
作者 李辉芹 钟智丽 巩继贤 《毛纺科技》 CAS 北大核心 2002年第5期16-18,共3页
介绍了新型纺织材料蜘蛛丝的形成结构和性质 ,以及利用基因技术规模化生产蜘蛛丝纤维的几种方法和途径 ,以利于对蜘蛛丝纺织产品的研究和开发。
关键词 基因技术 新纤维 蜘蛛丝 性质 纺织材料
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拟蜘蛛拖丝蛋白基因人工合成及其原核表达 被引量:5
15
作者 王春生 原璐 +2 位作者 罗芳 梁洋 安铁洙 《四川动物》 CSCD 北大核心 2010年第2期184-188,共5页
根据GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因序列(AY555585和AH015065)、拖丝蛋白基因的结构特点和密码子的简并性,设计378bp的拖丝蛋白基因单体,并对其人工聚合成二聚体。Primer5.0分析结果表明,决定拖丝弹性和抗拉力的氨基酸(Gla和Ala)含量(41.43... 根据GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因序列(AY555585和AH015065)、拖丝蛋白基因的结构特点和密码子的简并性,设计378bp的拖丝蛋白基因单体,并对其人工聚合成二聚体。Primer5.0分析结果表明,决定拖丝弹性和抗拉力的氨基酸(Gla和Ala)含量(41.43和18.22)接近天然丝蛋白氨基酸含量(42.81和26.32);利用Antheprot软件对二聚体编码氨基酸的二级结构预测结果显示,与丝蛋白的氨基酸链相近,由2个相同的部分排列而成,即β-片层(占48%)、6个α-螺旋间隔(占15%)、散在的转角(占12%)和若干不规则卷曲(占25%)。将二聚体与pET-28a(+)连接构建原核表达载体,IPTG诱导重组菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子质量为26.6×103kD的重组蛋白。上述结果为进一步开展有关转蜘蛛拖丝蛋白基因在绵羊被毛中表达的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 拖丝蛋白基因 人工合成 二聚体 原核表达
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大腹圆蛛Fosmid文库的构建及MaSp基因筛选方法的探讨 被引量:3
16
作者 张云龙 陈格飞 +3 位作者 陈国亮 林森珠 张蒙恩 孟清 《生命科学研究》 CAS CSCD 2010年第1期21-26,共6页
介绍了构建大腹圆蛛Fosmid基因组文库及牵引丝蛋白(MaSp)基因克隆筛选的全过程.采用改良CTAB法提取大片段基因组DNA,通过自主构建的电洗脱核酸回收装置分离回收30~40kbDNA片段,经补平磷酸化、与pCC2FOS载体连接、体外包装和转染EPI300T... 介绍了构建大腹圆蛛Fosmid基因组文库及牵引丝蛋白(MaSp)基因克隆筛选的全过程.采用改良CTAB法提取大片段基因组DNA,通过自主构建的电洗脱核酸回收装置分离回收30~40kbDNA片段,经补平磷酸化、与pCC2FOS载体连接、体外包装和转染EPI300TM-T1R,首次构建了无偏向性的大腹圆蛛Fosmid文库,其滴度为4.5×105cfu/mL,覆盖基因组倍数为10.以α-32P标记寡核苷酸探针对文库进行初步筛选,获得含MaSp基因的12个阳性克隆.该文库符合Fosmid文库的品质要求,为进一步筛选并研究大腹圆蛛MaSp基因序列奠定了基础. 展开更多
关键词 大腹圆蛛 FOSMID文库 牵引丝 MaSp基因
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外源丙氨酸提高蜘蛛牵引丝蛋白天然基因在原核系统中的表达 被引量:5
17
作者 马鹤雯 张立树 +2 位作者 郑伟 张永亮 张玉静 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期47-51,共5页
蜘蛛丝蛋白天然基因的体外表达受诸多因素的限制。在获得生长于中国的Nephilaclavipes蜘蛛牵引丝蛋白Spidroin2cDNA(No.AF441245)的基础上,利用限制性内切酶双酶切反应构建含有Spidroin2cDNA的重组表达质粒pET-28b(+)-Sp。将该质粒转化... 蜘蛛丝蛋白天然基因的体外表达受诸多因素的限制。在获得生长于中国的Nephilaclavipes蜘蛛牵引丝蛋白Spidroin2cDNA(No.AF441245)的基础上,利用限制性内切酶双酶切反应构建含有Spidroin2cDNA的重组表达质粒pET-28b(+)-Sp。将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)宿主细胞感受态菌中,以不同浓度的IPTG进行诱导,并通过诱导时间、培养温度、加入外源丙氨酸等途径提高Spidroin2cDNA的表达量,同时利用多克隆抗体对表达产物进行Westernblot检测。重组质粒pET-28b(+)-Sp的测序结果表明Spidroin2cDNA基因以正确的阅读框插入到原核表达载体中;SDS-PAGE结果表明菌体表达蛋白中存在着大小约为31kDa的目的蛋白带(加入外源丙氨酸条件下),Westernblot检测结果进一步证实,目的基因在大肠杆菌中得到正确表达。实验证明,蜘蛛牵引丝蛋白Spidroin2cDNA可在原核细胞内正确表达,外源丙氨酸的加入对于提高天然蜘蛛丝蛋白基因在原核系统的表达作用明显。 展开更多
关键词 蜘蛛 牵引丝蛋白 天然基因 原核表达
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家蚕CyPA基因的克隆、表达谱及进化分析 被引量:1
18
作者 李春峰 刘文明 +2 位作者 黄科 范晓东 周泽扬 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期349-356,共8页
CyP蛋白家族在蛋白质折叠过程中起着重要作用。本研究克隆了家蚕Bombyx mori CyPA基因(BmCyPA),该基因由2个外显子和1个内含子组成,推导开放阅读框编码165个氨基酸,分子量为19.4kD,等电点为8.79。序列分析表明BmCyPA在不同物种间具有高... CyP蛋白家族在蛋白质折叠过程中起着重要作用。本研究克隆了家蚕Bombyx mori CyPA基因(BmCyPA),该基因由2个外显子和1个内含子组成,推导开放阅读框编码165个氨基酸,分子量为19.4kD,等电点为8.79。序列分析表明BmCyPA在不同物种间具有高度的保守性,含有肽酰脯氨酸顺反异构酶活性位点及与CsA侧链结合的氨基酸,提示BmCyPA可能具有肽酰脯氨酸顺反异构酶活性和与CsA结合的特性。组织表达谱及EST数据分析显示,BmCyPA在丝腺中高丰度表达。通过对不同物种来源的CyP基因的进化分析,进一步预测了BmCyP基因的功能,BmCyP可能与丝蛋白的正确折叠相关。 展开更多
关键词 家蚕 CyP基因 丝腺 基因克隆 系统进化 表达谱
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玉米丝裂病发生的数量遗传分析 被引量:20
19
作者 魏昕 李丽华 +5 位作者 王娟 樊庆琦 兰海 吴元奇 荣廷昭 潘光堂 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期2235-2240,共6页
【目的】分析玉米丝裂病发生的遗传机制,为选育抗丝裂病品种和高效改良感病材料提供理论依据和技术支持。【方法】运用六世代平均值分析法和植物数量性状主基因+多基因混合遗传模型多世代联合分析的方法,对普通玉米自交系R08与975-12杂... 【目的】分析玉米丝裂病发生的遗传机制,为选育抗丝裂病品种和高效改良感病材料提供理论依据和技术支持。【方法】运用六世代平均值分析法和植物数量性状主基因+多基因混合遗传模型多世代联合分析的方法,对普通玉米自交系R08与975-12杂交组合的P1、P2、F1、F2:3、B1:2和B2:26个世代群体的种子丝裂病进行分析。【结果】玉米丝裂病的遗传符合1对加性主基因+加性-显性多基因模型。在F2:3、B1:2和B2:23个家系世代,主基因方差分别为201.45,31.99和31.99;多基因方差依次为11.04、81.14和0.00。主基因加性效应值为11.31;多基因加性效应值为-4.47,显性效应值为10.85。主基因遗传率在F2:3和B1:2两个分离家系群体中为81.31%和21.56%,多基因遗传率为4.46%与54.68%。B2:2家系中未检测出多基因的存在。【结论】玉米丝裂病主要由加性主基因控制,在抗病育种中可在早代高强度选择,对感病自交系可采取回交转育的方法进行改良。 展开更多
关键词 玉米 丝裂病 主基因+多基因 数量遗传分析
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金水乌鸡PRL基因多态性研究 被引量:3
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作者 潘爱銮 皮劲松 +3 位作者 杜金平 梁振华 申杰 蒲跃进 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第11期4457-4458,4597,共3页
[目的]研究金水乌鸡PRL基因多态性,为金水乌鸡的保种和持续选育与提高积累分子基础数据。[方法]采用PCR-RFLP方法研究金水乌鸡白羽丝毛系165只乌鸡PRL基因多态性,分别采用HaeⅢ和HhaⅠ2种内切酶对各DNA样品的PCR产物进行单酶切,分析基... [目的]研究金水乌鸡PRL基因多态性,为金水乌鸡的保种和持续选育与提高积累分子基础数据。[方法]采用PCR-RFLP方法研究金水乌鸡白羽丝毛系165只乌鸡PRL基因多态性,分别采用HaeⅢ和HhaⅠ2种内切酶对各DNA样品的PCR产物进行单酶切,分析基因型与产蛋数的相关。[结果]金水乌鸡PRL基因的PCR产物的HhaⅠ酶切片段未出现多态性。金水乌鸡PRL基因的PCR产物的HaeⅢ酶切片段呈现RFLP多态性,有AA、AB、BB3种基因型,A基因频率较高。相关分析结果表明,不同基因型的产蛋数差异不显著。[结论]A基因可能是影响产蛋数的优势基因。 展开更多
关键词 金永乌鸡 PRL基因 多态性
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