鲢鱼卵高分子质量CPI-I的纯化与鉴定

以鲢鱼卵为材料制备半胱氨酸蛋白酶抑制因子(CPIs)的粗提浓缩液,进而经Q Sepharose Fast Flow阴离子层析和Sephacryl S-200分子筛层析,获得部分纯化了的CPI-I。以偶氮酪蛋白(azocasein)法监测粗提液及层析纯化中CPIs的抑制活性。层析过程中,以灵敏度更高的荧光合成肽底物(Z-Phe-Arg-MCA)法监测洗脱物的CPIs抑制活性的热稳定性。最终鲢鱼卵CPI-I被纯化了72倍,酶回收率为10.25%。利用Sephacryl S-200分子筛层析Marker标准曲线以及反相酶谱法,初步判断CPI-I的分子质量为89kD。高碘酸-Schiff试剂(PAS)染色法证明该蛋白为糖蛋白。CPI-I能够抑制鲢鱼组织蛋白酶L,且具有显著的热稳定性。

鲢鱼卵中低分子CPIs的纯化鉴定及改善鱼糜凝胶强度的效果研究

通过比较鲢鱼卵半胱氨酸蛋白酶抑制因子(cysteine proteinase inhibitors,CPIs)粗提过程中的比活力(Azocasein法),确定其最佳粗提条件为:以含0.1 mmol/L苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)的20 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.0)作为匀浆缓冲液,并于30℃对匀浆样进行pH 3.0酸处理10 min,然后碱回调至pH 8.0,CPIs纯度提高了15.54倍。进一步经SP Sepharose Fast Flow阳离子层析验证表明,与pH 4.0相比,pH 3.0酸处理能高效除去活性峰Ⅱ中的酸碱及热不稳定杂蛋白,使CPIs比活力提高了48.22倍。采用Sephacryl S-200分子筛层析,获得部分纯化的低分子CPIs组分Ⅱ-b和Ⅱ-c,比活力和纯化倍数分别为1 098.59 U/mg、312.10倍和1 769.23 U/mg、502.62倍。电泳分析表明,明胶底物-SDS-反相酶谱法无法鉴定Ⅱ-b和Ⅱ-c的抑制活性;而与木瓜蛋白酶在适宜条件下反应后进行的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)则初步鉴定Ⅱ-b和Ⅱ-c中均含有至少7 kD和10 kD两种低分子CPIs。最后经质构分析表明,Ⅱ-b和Ⅱ-c以5 U/g添加入鲢鱼鱼糜时,均能够极显著提高鲢鱼鱼糜凝胶强度(48.77%和55.55%),抑制软化。

鲢早期发育阶段鱼体脂肪酸组成变化

用气相色谱仪分析了鲢受精卵和仔鱼的脂肪酸组成及其变化。受精卵中共检测到 1 9种脂肪酸 ;SFA含量最高 ,其次为 PUFA,MUFA最少。 SFA中以 1 6 C∶ 0为主 ,MUFA中以1 8C∶ 1为主 ,PUFA中以 DHA、AA和 EPA为主 ;n- 3 /n- 6为 2 .45。初孵仔鱼中 HUFA因卵膜的脱落而减少 ,以后逐渐积累 ;鲢仔鱼具有将 1 8C PUFA转化为长链 HUFA的能力 ;在早期发育阶段 ,鲢仔鱼主要消耗 1 6 C∶ 0作为能量代谢的基质。

卵清蛋白对白鲢鱼糜凝胶性能的影响

通过检测白鲢鱼糜凝胶的质构特性以及微观结构,研究鸡卵清蛋白对白鲢鱼糜质构,色泽,凝胶特性持水性和微观结构的影响,与感官试验进行对比。并采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对相关作用机理进行分析。实验结果表明：鱼糜中加入卵清蛋白可以明显的提高白鲢鱼糜的品质。在卵清蛋白含量低于60 g/kg时,随着卵清蛋白的增加,鱼糜的硬度,胶着性和咀嚼性着些质构性质都有所提高（P〈0.05）;鱼糜的白度和持水性能也在不断的增加,而鱼糜凝胶强度的最佳值则出现在卵清含量为40 g/kg。通过电镜扫描图和电泳图的分析,卵清蛋白对白鲢鱼糜凝胶性能的改良可能是通过卵清蛋白作为粘合剂使得鱼糜更好的粘合在一起得到的结果。综合鱼糜凝胶的所有特性,卵清蛋白的适合添加量为40-60 g/kg。

鲢鱼卵中两种高分子半胱氨酸蛋白酶抑制因子的纯化与鉴定

以鲢鱼卵为材料,通过匀浆、酸处理和超滤制备半胱氨酸蛋白酶抑制因子(cystine proteinase inhibitors,CPIs)粗提液,进而经Sephacryl S-100分子筛层析、Blue Sepharose 6 Fast Flow染料亲和层析、SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析、Con A Sepharose 4B亲和层析,获得两种纯化的高分子CPIs,即Con A不吸附部分a-1和吸附部分的糖蛋白a-2。二者分别被纯化了102.62倍和274.28倍,酶活回收率分别为2.02%和1.42%。通过TSK G2000 SWXL凝胶过滤高效液相色谱结合十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及其反相酶谱法分析,表明a-2及再次经高效液相色谱法回收的a-1在电泳图上均呈单一带,a-2为单一峰,且a-1的分子质量为139 ku,a-2的分子质量为92 ku。二者均能抑制半胱氨酸蛋白酶(木瓜蛋白酶和鲢鱼组织蛋白酶L)但不抑制丝氨酸蛋白酶(胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶)。根据a-1和a-2的分子质量及抑制活性特征和糖蛋白特性,推测二者可能为鲢鱼卵Kininogens的不同形式。

蛋清液与蛋清粉对鲢鱼鱼糜凝胶性的改良效果比较

为比较蛋清液与蛋清粉对鲢鱼鱼糜凝胶性的改良效果,将蛋清液与相同质量分数的蛋清粉溶液添加至鲢鱼鱼糜中。利用质构仪和色差计分析蛋清液与蛋清粉溶液对鲢鱼鱼糜凝胶性和色泽的影响。结果表明,普通鲢鱼鱼糜的凝胶强度、水分压出量、白度分别为586.64 g/cm、6.35%和71.86,添加蛋清粉溶液和蛋清液可使其分别变为696.72 g/cm和676.27 g/cm、5.74%和5.86%及77.08和76.66,蛋清粉对鱼糜凝胶性的改善效果明显优于蛋清液。确定蛋清液或蛋清粉溶液的添加量为8%,此时蛋清液与蛋清粉可明显改善鲢鱼鱼糜制品的凝胶性与白度。

雌核发育银鲫与两性生殖彩鲫卵壳蛋白组分的比较分析及其受精前后的变化

以雌核发育银鲫和两性生殖彩鲫的成熟卵为材料 ,分离卵壳 ,经处理得到卵壳可溶性蛋白组分。SDS -PAGE梯度凝胶电泳分析在雌核发育银鲫中揭示出3条较明显的差异蛋白带。同时 ,采用相同处理方法对受精前后卵壳蛋白组分进行比较分析后发现 ,这些差异蛋白带在受精后发生了变化 ,其带纹表现为减弱或消失 ,表明这些差异蛋白可能与受精过程相关。

糖基化改性蛋清粉提高鲢鱼鱼糜凝胶性的研究

为提高鲢鱼鱼糜制品的凝胶性,将蛋清粉与糖基化改性蛋清粉添加至鲢鱼鱼糜中。利用质构仪、色差计分析蛋清粉与糖基化改性蛋清粉对鲢鱼鱼糜凝胶性与色泽的影响。结果表明:未添加蛋清粉的鱼糜凝胶强度、白度为585.62 g·cm和75.56,添加1.5%的蛋清粉可将鲢鱼鱼糜的凝胶性与白度提高至627.85 g·cm和78.50,添加2.0%的糖基化改性蛋清粉可将鲢鱼鱼糜的凝胶性与白度提高至684.36 g/cm和76.25。可以看出,糖基化改性蛋清粉对鲢鱼鱼糜品质的改善效果要优于普通蛋清粉。

5种药物对异育银鲫“中科3号”受精卵孵化的影响

在水温21~23℃,pH 6.2~6.5条件下,采用半静水试验法,按等对数间距设置药物质量浓度梯度,日换水50%,补充药物50%,24 h观察记录1次,比较美婷Ⅱ、霉灵、纳他霉素、杀毒矾和高锰酸钾5种药物对异育银鲫"中科3号"受精卵水霉抑制作用及孵化率的影响。试验结果显示,试验药物对受精卵水霉生长均有一定抑制作用,其抑霉率为美婷Ⅱ>霉灵>高锰酸钾、纳他霉素和杀毒矾,但杀毒矾对异育银鲫"中科3号"受精卵的毒副作用较大,显著降低了受精卵孵化率,不宜使用;美婷Ⅱ、霉灵、纳他霉素和高锰酸钾对异育银鲫"中科3号"受精卵的适宜使用质量浓度分别为4.90~6.50、1.97~3.87、1.50、2.50 mg/L,使用方法为长时间浸浴,可有效抑制受精卵孵化过程中水霉的生长,显著提高受精卵孵化率,适合在异育银鲫"中科3号"受精卵孵化过程中使用。

干热处理蛋清粉改善鲢鱼鱼糜凝胶性的研究

为提高鲢鱼鱼糜制品的凝胶性,将蛋清粉与干热处理蛋清粉添加至鲢鱼鱼糜中。利用质构仪、色差计分析蛋清粉与干热处理蛋清粉对鲢鱼鱼糜凝胶性与色泽的影响。试验结果表明,未添加蛋清粉的鱼糜凝胶强度、白度为585.62 g·cm和75.56,添加1.5%的蛋清粉或2.5%的干热处理蛋清粉可显著提高鲢鱼鱼糜的凝胶性与白度,且干热处理蛋清粉的改善效果要优于普通蛋清粉。扫描电镜结果表明,普通鲢鱼鱼糜所称凝胶空隙较大,质地松软,而添加蛋清粉后凝胶质地变紧密,尤其是添加干热处理蛋清粉后,其凝胶间隙明显变小,凝胶切面变平滑。