水飞蓟宾调控TLR4/NF-κB通路介导的细胞凋亡改善膝骨性关节炎模型大鼠软骨损伤

目的观察水飞蓟宾(silybinin,SB)对膝骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型鼠软骨损伤的作用,并探讨其对Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(NF-κB)通路和细胞凋亡的影响。方法选取SD大鼠作为本研究的对象,并将其分为正常对照组、模型组、SB组,每组各8只,一共24只。采用木瓜蛋白酶关节腔注射构建KOA大鼠模型并进行SB干预6周后,截取大鼠膝关节,苏木精-伊红染色法和番红-固绿染色法观察各组组织病理学变化,并采用国际骨关节炎研究协会(osteoarthritis research society international,OARSI)评分标准进行组织学评分;Western Blot检测TLR4、NF-κB、p65、BAX、BCL-2、Caspase-3蛋白表达变化。结果模型组膝关节软骨组织OARSI评分与正常对照组相比明显升高(P<0.0001);同时,检测发现软骨组织中TLR4、NF-κB、p65、BAX、Caspase3蛋白表达水平明显升高,相反抗凋亡蛋白BCL-2的表达水平则明显降低(P<0.0001)。与模型组相比,SB组关节软骨组织OARSI评分明显降低(P<0.001)。结论水飞蓟宾通过抑制软骨下骨中TLR4/NF-κB通路的激活来抑制细胞凋亡的发生,从而修复KOA模型大鼠损伤的关节软骨。

水飞蓟宾构象的理论研究

目的 水飞蓟宾 RRRR对映体分子中存在多个可变的二面角 ,可以产生许多立体构象 ,旨在从理论上寻找其合理构象。方法 采用二面角系统搜索后 ,结合 AM1方法确定主要构象 ,以 B3L YP/6 - 31G*方法优化构型后 ,在 B3L YP/3- 2 1G水平计算了振动频率和热力学参数。结果 得到了各二面角的分布情况 ,找出了主要的局部构象 ,明确了 C9- C11和 C18- C2 2旋转主要引起分子构象变化 ,4种主要构象能量差异较小 ,都有存在的可能性 ,二面角 C19- C18- C2 2 - C32和 C8- C9- C11- C16变化的能量曲线表明 ,C9- C11旋转的能垒很小 ,受 C19的羟甲基影响 ,C18- C2 2旋转能垒较大。结论 水飞蓟宾 RRRR对映体主要以 4种构象的形式存在。

水飞蓟宾对大鼠实验性肝纤维化发生发展作用机制的研究

目的观察水飞蓟宾(silybinin)在大鼠实验性肝纤维化过程中抗肝维化作用及其可能的机制。方法雌性Wistar大鼠70只,随机分为正常对照组(n=5)、纤维化模型组(n=33)和水飞蓟宾治疗组(n=32),后两组各自再随机分为1周、2周、4周、6周组。纤维化模型组以CCl4造成化学性肝损伤;水飞蓟宾治疗组注射CCl4的同时以水飞蓟宾50mg/(kg·d)灌胃。各组动物(也包括正常对照组)按设计分别于给药后1周、2周、4周、6周末,在乙醚麻醉、无菌无热源条件下,行腹主动脉采血和肝组织取材进行病理学观察。用Western-blot和原位杂交方法检测各组肝脏结缔组织生长因子(CTGF)的表达;测定各组血浆内毒素(ET)含量,同时也测定羟脯氨酸(Hyp)、丙二醛(MDA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平。结果与正常对照组比较,纤维化模型组和水飞蓟宾治疗组各项指标均有显著升高,且ET含量升高先于CTGF;与纤维化模型组比较,水飞蓟宾治疗组肝脏病理学损伤性改变有明显的减轻,血浆ET、ALT水平以及肝组织MDA、Hyp含量均有显著的降低,CTGF表达也明显的下调。结论水飞蓟宾可有效地改善实验性肝纤维化程度,其机制可能与其降低肠源性内毒素血症、下调CTGF的表达有关。

水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物对小鼠巨噬细胞一氧化氮及活性氧生成的抑制作用

目的研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(SPC)对过氧化氢(H2O2)诱导小鼠巨噬细胞内一氧化氮(NO)及活性氧(ROS)生成的影响。方法健康6～8周龄昆明种小鼠,腹腔提取巨噬细胞,培养成活后调细胞水平至2×108L-1,空白对照组加入等量的9g/L盐水,H2O2组加入H2O2,使其终质量浓度为1mmol/L刺激细胞30min,SPC干预组加入不同水平SPC干预细胞2h后加入终质量浓度为1mmol/LH2O2刺激30min。免疫细胞化学法观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,Griess法测定上清液NO的生成量,荧光探针DCFH-DA法测定巨噬细胞内ROS生成。结果H2O2组上清液NO2-水平(相当于NO累积生成量)显著高于对照组(P<0.01),不同水平SPC干预组NO2-水平降低,即NO表达减少,且呈质量浓度依赖性降低(P<0.05)。各组细胞质内iNOS表达同上清液NO的生成量呈现相应的变化趋势。H2O2组小鼠巨噬细胞内ROS显著升高,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),不同水平SPC预先干预2h后,ROS生成量呈质量浓度依赖性降低(P<0.01)。结论SPC可能是通过抑制iNOS表达来抑制H2O2诱导的小鼠巨噬细胞内NO的生成,另外SPC也可抑制小鼠巨噬细胞内ROS生成,从而减轻组织细胞的氧化损伤。

水林佳为主治疗45例脂肪肝的临床分析

目的:观察水林佳为主治疗脂肪肝的临床疗效。方法:水林佳和肌苷片为治疗组;益肝灵片和甘利欣胶囊为对照组。治疗12周。结果及结论:治疗组总有效率为77.7%,对照组总有效率为51.1%,差异有显著性,P<0.05。水林佳片为主治疗脂肪肝,使用方便,疗效明确,且不良反应少,值得临床推广使用。

水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞核因子-κB活化及核因子-κB抑制蛋白α磷酸化的影响

目的研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物（SPC）对脂多糖（LPS）诱导小鼠巨噬细胞核因子-κB（NF-κB）活化及NF-κB抑制蛋白α（IκBα）磷酸化的影响。方法提取健康6～8周龄昆明种小鼠腹腔巨噬细胞，培养成活后调细胞水平为2×10^5mL^-1，对照组加：入等量9g／L盐水，LPS组加入LPS，使其终水平10μg／mL，LPS刺激细胞24h，SPC干预组加入不同水平SPC，干预细胞2h后加入终水平为10μg／mL LPS刺激24h。免疫细胞化学法观测NF—κB激活、IκBα磷酸化的表达。结果对照组小鼠巨噬细胞细胞核内NF-κB p65水平很低，LPS组细胞核NF-κB p65水平显著高于对照组〈P〈0．01），不同水平SPC干预组小鼠巨噬细胞NF—κB p65水平降低，即NF—κB p65表达减少。且呈水平依赖性降低（P〈0．01）。细胞质内磷酸化的IκBα表达同胞核NF-κB p65水平变化基本一致。结论，SPC抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞内NF—κB活化，可能是通过抑制IκBα磷酸化及降解途径完成。

恩替卡韦联合水飞蓟宾对慢性乙型病毒性肝炎患者肝功能及肝纤维化指标的影响

目的探讨恩替卡韦联合水飞蓟宾对慢性乙型病毒性肝炎患者肝功能及肝纤维化的影响。方法 200例慢性乙型病毒性肝炎患者依据治疗方式的不同分为两组各100例,观察组使用恩替卡韦联合水飞蓟宾治疗,对照组使用恩替卡韦治疗,比较两组的肝功能和肝纤维化指标。结果治疗6个月后,两组的ALT、 TBil、 AST、 HA、 IVC、 LN水平均显著低于治疗前,且观察组显著低于对照组(P <0.05)。结论恩替卡韦联合水飞蓟宾治疗慢性乙型病毒性肝炎患者能够有效缓解肝纤维化损伤,改善肝功能。

水林佳联合二甲双胍治疗非酒精性脂肪性肝炎疗效观察

目的：观察水林佳联合二甲双胍对非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）的临床疗效。方法：将2006年2月～2007年10月收治的56例NASH随机分为治疗组和对照组，每组28例，两组均予水林佳70mg每日3次口服，治疗组加用二甲双胍250mg每日3次口服，疗程均为3个月。观察治疗前后生化指标、肝脏B超及CT变化，药物不良反应。结论：两组疗程结束后丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶均较治疗前明显下降（P〈0．01，P〈0．05），组间比较，治疗组显著低于对照组（P〈0．05）；治疗组治疗后血脂较治疗前显著降低（P〈0．01），治疗后与对照组比较显著降低（P〈0．01）；对照组治疗前后血脂无显著差异（P〉0．05）。两组有少数患者出现轻度食欲缺乏等不适，可自行恢复。结论：水林佳联合二甲双胍对于NASH具有良好疗效，且无明显不良反应。

水飞蓟素的提取方法及药理活性研究进展

水飞蓟素具有多种药理活性,除保肝护肝作用外,对肿瘤、糖尿病、阿尔茨海默症等神经系统疾病也有较好治疗效果,是一种重要的医药原料。水飞蓟素多采用常温浸渍、碱提酸沉、超声和回流等方法提取,近年来涌现出超临界流体提取法、酶法、双水相萃取法、亚临界低温萃取法等新型提取方法。综述了水飞蓟素的提取方法及药理活性,以期为更好开发和利用水飞蓟资源提供参考。

水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物诱导HepG2细胞凋亡研究

目的研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(Silybin-phosphatidylcholine Compound,SPC)诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用及其机制。方法不同浓度SPC处理肝癌HepG2细胞,通过MTT法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察SPC对HepG2细胞的生长抑制作用及其细胞凋亡的影响。结果SPC可抑制HepG2细胞的增殖。其GI50为46.8μg/ml;50μg/ml的SPC作用HepG2细胞24h后,细胞出现早期调亡的形态;75μg/ml、100μg/ml的SPC对HepG2细胞凋亡率分别为(17.22±3.45)%和(25.50±5.72)%;50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml的SPC作用于HepG2细胞24h后,细胞内的Ca2+浓度显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论SPC能够诱导肝癌细胞系HepG2细胞凋亡,其机制与SPC升高细胞内Ca2+浓度有关。

水飞蓟宾纳米混悬剂的制备与体外评价

为提高难溶性药物水飞蓟宾的溶出度,本试验采用高压均质法制备水飞蓟宾纳米混悬剂(Sy-NS),并以粒径和多分散性指数(PDI)为指标,优化了处方因素(如稳定剂、投药量、冻干保护剂)和工艺参数。结果表明,由十二烷基硫酸钠(SDS)和聚乙烯基己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物(Soluplus)组成复合稳定剂,且在药物、SDS和Soluplus质量比为60∶1∶9的基础上高压均质,最后加入6%蔗糖和1%甘露醇为冻干保护剂,冷冻干燥可得到粒径为409.3 nm、PDI为0.332的Sy-NS,冻干前后粒径变化小。以含0.5%SDS的水溶液为溶出介质,考察了Sy-NS、物理混合物、原料药的溶出行为,结果显示2 h溶出率分别为61.8%、31.9%、26.5%。红外光谱(IR)、差示扫描量热(DSC)和X射线衍射(XRD)分析结果表明,制备过程中药物的状态发生了改变。