水飞蓟素脂质体对小鼠CCl_4急性肝损伤保护作用的实验研究

目的：研究水飞蓟素脂质体（L-SIL）对四氯化碳（CCl4）所致小鼠急性肝损伤的保护作用.方法：昆明种小鼠80只,随机分为空白组、CCl4急性肝损伤模型组及L-SIL低、中、高剂量组和益肝灵（T-SIL）低、中、高剂量组共8组,测量并比较各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平及肝组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）水平和丙二醛（MDA）含量,并观察各组小鼠肝组织病理学改变.结果：与CCl4急性肝损伤模型组相比,L-SIL各剂量组血清ALT、AST水平明显降低（P〈0.05～0.01）,L-SIL各剂量肝组织匀浆GSH-PX水平及L-SIL高剂量组SOD水平明显升高（P〈0.05～0.01）,并具有剂量依赖性,L-SIL高剂量组肝组织匀浆MDA含量明显降低（P〈0.01）.L-SIL对ALT、SOD、GSH-PX水平的作用优于相应剂量T-SIL组（P〈0.05～0.01）.组织学观察L-SIL中、大剂量组的肝损伤明显轻于模型组和相应剂量T-SIL组.结论：L-SIL对小鼠CCl4肝损伤有明显的保护作用,且其保护作用明显优于T-SIL.

PEG修饰水飞蓟素脂质体的制备及体外释放研究

目的:合成一种PEG硬脂酸单酯,应用Box-Behnken设计优化PEG修饰水飞蓟素脂质体的处方和工艺。方法:采用IR、1H-NMR法表征PEG硬脂酸单酯的结构,采用改进的薄膜分散法制备修饰脂质体,血浆透析法比较脂质体与修饰脂质体的体外释放曲线。结果:水飞蓟素修饰脂质体最佳处方含大豆磷脂∶胆固醇∶PEG硬脂酸单酯∶水飞蓟素为20∶4.8∶0.9∶1(w/w),修饰脂质体的平均粒径为100.9nm,包封率为91.2%,体外释放动力学符合Weibull方程。结论:PEG修饰水飞蓟素脂质体体外释放缓慢,注射给药体内能达到长循环作用。

水飞蓟素脂质体对BCG+LPS引起的小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的：研究水飞蓟素脂质体（L-SIL）对卡介苗（BCG）＋脂多糖（LPS）引起的小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法：昆明种小鼠80只随机分为空白组、模型组及L-SIL低、中、高剂量组和益肝灵（T-SIL）低、中、高剂量组共8组,测量并比较各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平和肝组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）水平以及丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量,观察肝脏、脾脏系数的变化,并观察各组小鼠肝组织病理学改变。结果：与模型组相比,L-SIL各剂量组血清ALT、AST水平明显降低（P〈0.05-0.01）,肝组织匀浆GSH-PX、SOD水平明显升高（P〈0.05-0.01）,MDA和NO含量明显降低（P〈0.01）,肝脏、脾脏系数明显降低（P〈0.05-0.01）。L-SIL对ALT、AST、GSH-PX水平和NO含量的作用强于同剂量T-SIL组（P〈0.05-0.01）。组织学观察L-SIL低、中剂量组的肝损伤明显轻于模型组和相应剂量T-SIL组。结论：L-SIL对小鼠BCG＋LPS引起的免疫性肝损伤有明显的保护作用,且其保护作用明显优于T-SIL。

水飞蓟素长循环脂质体制备与抗肿瘤活性研究

目的：制备水飞蓟素长循环脂质体,并考察其对Hep G2肝癌细胞的抑制率。方法：本研究以水飞蓟素为模型药,采用薄膜分散-挤压法制备了经胆固醇-聚乙二醇2000（Chol-PEG2000）修饰的长循环脂质体,并以外观、粒径、包封率等作为指标考察了氢化大豆磷脂用量、胆固醇用量、药脂比和Chol-PEG2000用量,评价了冻干前后脂质体的粒径、多聚分散系数（Pd I）、Zeta电位、包封率等理化性质;考察了水飞蓟素长循环脂质体在pH 7.4磷酸盐缓冲液（PBS）和大鼠血浆中的释放行为;评价了水飞蓟素长循环脂质体对Hep G2肝癌细胞的体外抗肿瘤细胞活性。结果：最终确定了长循环脂质体的处方组成：氢化大豆磷脂用量为10 mg/m L,胆固醇与氢化大豆磷脂用量比为1∶12.5,药脂比为1∶25,Chol-PEG2000用量为5.0%,所制备的水飞蓟素长循环脂质体的平均粒径为（102.4±39.4）nm,Pd I为0.194,Zeta电位为（-31.6±1.4）m V,包封率为94.7%±2.8%,呈球形或类球形分布,冻干前后粒径、Pd I、Zeta电位和包封率均无显著变化;水飞蓟素长循环脂质体在pH 7.4 PBS中释放缓慢,而在大鼠血浆中释放较快;水飞蓟素长循环脂质体的体外抗肿瘤活性显著高于水飞蓟素溶液（P〈0.05）,说明水飞蓟素长循环脂质体能够有效抑制肝癌细胞的生长与分裂。结论：采用薄膜分散-挤压法制备水飞蓟素长循环脂质体在体外表现出良好的抗肿瘤活性,为水飞蓟素长循环脂质体应用于临床研究奠定实验基础。

水飞蓟素脂质体的制备及其包封率的测定

目的建立一种水飞蓟素脂质体的制备方法、药物含量测定方法,并测定水飞蓟素脂质体的包封率。方法采用薄膜分散法制备了水飞蓟素脂质体,水飞蓟素脂质体混悬液经D101大孔吸附树脂柱分离后,分别收集脂质体和游离药物部分,用甲醇破坏含药脂质体部分,以VPODS为色谱柱,甲醇-水-冰醋酸(50∶50∶1)为流动相,检测波长为287nm,流速为1.0m L·min^(-1),用反相高效液相色谱法测定含药量,计算包封率。结果以水飞蓟素中水飞蓟宾作为质量控制标准,在此色谱条件下,药物与辅料及溶剂峰分离度符合要求,在2.5~80.0μg·m L^(-1)范围内线性关系良好(R^2=0.9994),此方法的回收率、日间及日内精密度均符合分析方法的要求。水飞蓟素脂质体的包封率为62.0%。结论方法准确可靠、简便,可用于水飞蓟素脂质体药物含量及包封率的测定。

水飞蓟素脂质体的制备、质量评价及其对HaCaT细胞增殖和摄取的影响

目的 制备水飞蓟素脂质体(silymarin liposomes,SM-L)并进行质量评价,考察SM-L对人永生化角质形成细胞(human immortal keratinocyte line,HaCaT)增殖和摄取的影响。方法 采用乙醇注入法制备SM-L,以包封率和ζ电位为考察指标,Box-Behnken响应曲面设计实验优化SM-L处方和制备工艺,并对SM-L进行质量评价;采用噻唑蓝(MTT)法考察SM-L对HaCaT细胞增殖的影响,细胞划痕实验考察SM-L对HaCaT细胞水平迁移能力的影响,共聚焦显微镜观察并以流式细胞术考察HaCaT细胞对SM-L的摄取情况。结果 优化的SM-L制备工艺为大豆磷脂、水飞蓟素和胆固醇的质量比为20∶7.94∶6.21,无水乙醇和水的最佳比例为1∶10。SM-L包封率为(85.44±0.87)%,平均粒径为(133.80±2.13)nm,多分散指数为0.134±0.020,ζ电位为(-14.1±0.3)m V,稳定性良好,36 h皮肤透过率为(14.58±6.37)%,皮肤滞留率为(65.80±4.04)%。细胞实验证明一定质量浓度范围的SM-L能促进HaCaT细胞增殖,SM-L相比水飞蓟素对HaCaT细胞的水平迁移促进作用有明显提高,并且SM-L能够有效提高HaCaT细胞对水飞蓟素的摄取。结论 制备所得的SM-L粒径均一,性质稳定,透皮性能好,并且可以促进HaCaT细胞增殖和对水飞蓟素的摄取,有很好的角质修复作用。