柑橘类黄酮成分的同步HPLC检测(英文)

目的:建立检测柑橘类黄酮(柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、橙黄酮、川陈皮素)的中药材质量控制用快速HPLC方法。方法:用仅含甲醇和水的无盐流动相梯度洗脱,Krom asil反相分析柱(100-5C18-250A,4.6 mm×250 mm,5μm),结合二级阵列管紫外扫描做峰识别。结果:对于要检测的5种柑橘类黄酮均得到满意的分辨率和线性范围,其加样回收率:95%-102%;重现性:RSD1.88%-2.93%:分析了6种酸橙类柑橘中药材黄酮含量。结论:建立了多成分柑橘类黄酮快速HPLC检测方法并可用于LC-MS。

HPLC法测定肾茶中3种甲氧基黄酮类活性成分

目的建立测定肾茶提取物中橙黄酮、半齿泽兰素、半齿泽兰素-5-甲醚含量的方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法，Symmetry C18（4．6mm×150mm，5μm）色谱柱，流动相为乙腈-0．05％磷酸缓冲液，梯度洗脱；流速：lmL·min^-1，柱温：30℃，检测波长：365nm，进样量为10μL。结果橙黄酮在0．50～5．00μg、半齿泽兰素在0．50～5．00μg、半齿泽兰素-5-甲醚在0．05-0．50μg范围内具有良好的线性关系；平均加样回收率分别为101．26％．100．28％和99．66％。RSD分别为1．73％，0皇2％和1．67％。结论该方法简便、准确，可用于肾茶的质量评价。

Isolation and Identification of Two Antibacterial Agents from <i>Chromolaena odorata</i>L. Active against Four Diarrheal Strains

Chromolaena odorata L (Asteraceae) is a bad invasive plant, found in the humid tropics and sub-tropics worldwide. It is used against dysentery, diarrhea, malaria, wound healing, headache and toothache in traditional medicine. In the present study, we investigated the antibacterial activities of different leaves extracts of Chromolaena odorata L. (cyclohexane, dichloromethane, ethyl acetate and butanol) against four clinical diarrheal strains (Klebsiella oxytoca, Salmonella enterica, Shigella sonnei and Vibrio cholera). We demonstrated that C. odorata leaves extracts show an antibacterial activity between 0.156 and 1.25 mg/mL. Bioassay-guided chromatography by bioautography with iodonitrotetrazolium-based colorimetric assay allowed the isolation and identification of two active compounds. After the combination of RP-HPLC, mass spectrometry analysis, 1D and 2D-NMR spectroscopy, we isolated and characterized two active molecules corresponding to 3’,4’,5,6,7-Pentamethoxyflavone (Sinensetin) and4’,5,6,7-Tetramethoxyflavone (Scutellareintetramethyl ether).

多甲氧基黄酮抗肿瘤作用研究进展

肿瘤是死亡率很高的一种疾病,严重威胁人类的生命和健康。从中药或天然药物中提取有效成分,研究其抗肿瘤作用或对某些抗肿瘤化学药物的增敏和抗耐药作用已成为当前医药学界关注的热点。多甲氧基黄酮是近年来发现的一类具有较强抗肿瘤活性的黄酮类成分。该文就多甲氧基黄酮类成分抗肿瘤作用及其机制的研究进展作一综述。

HPLC法测定胡柚皮中多甲氧基黄酮类成分的含量

目的:建立测定胡柚皮中多甲氧基黄酮(桔皮素和甜橙素)含量的高效液相色谱方法。方法:Kromasil C18(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.2%冰醋酸水溶液(40:60),流速为1.0mL/min,检测波长为330nm。结果:桔皮素和甜橙素分别在0.098 4～0.295 2μg和0.091 2～0.2736μg范围内线性关系良好,相关系数r均为0.999 9。桔皮素平均回收率为99.74%,RSD为0.19%;甜橙素平均回收率为100.3%,RSD为0.28%。结论:方法操作简便,分离效果好,灵敏度高,重复性好,可用于控制胡柚皮药材的质量。

多甲氧基黄酮的神经保护作用研究进展

多甲氧基黄酮(polymethoxyflavonoids,PMFs)是从柑橘属植物中提取的一类黄酮成分,生物活性广泛,具有神经保护作用。本文综述了PMFs在动物和细胞模型中对中枢神经系统损伤(阿尔茨海默病、帕金森病、脑缺血、脂多糖诱导的神经损伤等)的保护和改善作用,并重点阐述其潜在作用机制,旨在深入理解PMFs的药效及分子作用机制,为神经系统相关疾病的预防和治疗提供新的思路。

甜橙黄酮通过抑制铁死亡途径改善溃疡性结肠炎小鼠肠道黏膜功能障碍的研究

目的研究甜橙黄酮通过抑制铁死亡途径对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道黏膜功能障碍的影响。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、阳性组和低、中、高剂量实验组。除对照组外,其余各组建立UC模型。在造模的同时,对照组和模型组均给予灌胃等量0.9%NaCl,低、中、高剂量实验组灌胃10、20、40mg·kg^(-1)甜橙黄酮,阳性组给予灌胃50mg·kg^(-1)美沙拉嗪,每天1次,灌胃14d。观察小鼠一般情况、结肠长度、肠质量指数、疾病活动指数(DAI)、黏膜损伤指数(CMDI)评分,以试剂盒法检测D-乳酸(D-LA)、二胺氧化酶(DAO)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,以蛋白质印迹(Western blot)法检测紧密连接蛋白闭合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、非糖基化的xCT(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白的表达水平。结果对照组、模型组和低、中、高剂量实验组血清DAO分别为(9.23±1.28)、(34.61±3.95)、(29.36±3.34)、(23.41±2.74)和(16.75±2.57)U·mL^(-1),血清D-LA分别为(7.04±1.71)、(18.25±1.05)、(15.14±1.56)、(11.43±1.70)和(8.93±1.56)ng·mL^(-1),Occludin蛋白相对表达水平分别为0.89±0.08、0.25±0.05、0.37±0.03、0.48±0.05和0.66±0.07,Claudin-1蛋白相对表达水平分别为0.83±0.09、0.33±0.05、0.47±0.05、0.59±0.06和0.72±0.07,GPX4蛋白相对表达水平分别为0.85±0.06、0.23±0.05、0.36±0.04、0.53±0.06和0.72±0.08,SLC7A11蛋白相对表达水平分别为0.95±0.06、0.30±0.04、0.42±0.05、0.65±0.05和0.84±0.05。对照组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05);模型组的上述指标与低、中、高剂量实验组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论甜橙黄酮可抑制铁死亡途径,进而改善UC小鼠肠道黏膜功能障碍。

甜橙黄酮通过调节AMPK/mTOR信号通路改善呼吸道合胞病毒感染大鼠的肺组织损伤

目的:探讨甜橙黄酮通过AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对呼吸道合胞病毒(RSV)感染大鼠肺组织损伤的改善作用。方法:将30只雄性Wistar大鼠分为对照组、模型组、甜橙黄酮低剂量组(14 mg/kg)、甜橙黄酮中剂量组(28 mg/kg)、甜橙黄酮高剂量组(56 mg/kg)、甜橙黄酮高剂量+AICAR组(56 mg/kg+500 mg/kg的AMPK激活剂AICAR),计算大鼠肺指数。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法测定肺组织RSV病毒载量,酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠肺泡灌洗液炎症因子水平,HE染色测定肺组织病理,蛋白免疫印迹(Western blot)法测定AMPK/mTOR通路蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠肺组织存在炎性浸润,排列松散,肺指数、肺组织RSV病毒载量、肺泡灌洗液白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、炎症评分、p-AMPK/AMPK、mTORC1蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,甜橙黄酮低剂量组、甜橙黄酮中剂量组、甜橙黄酮高剂量组大鼠肺组织损伤减轻,大鼠肺指数、肺组织RSV病毒载量、肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF-α水平、炎症评分、p-AMPK/AMPK、mTORC1蛋白表达降低(P<0.05);与甜橙黄酮高剂量组相比,甜橙黄酮高剂量+AICAR组大鼠肺组织损伤加重,肺指数、肺组织RSV病毒载量、肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF-α水平、炎症评分、p-AMPK/AMPK、MTORC1蛋白表达升高(P<0.05)。结论:甜橙黄酮可能通过抑制AMPK/mTOR信号通路发挥对RSV诱导的大鼠抗炎、抗病毒、抗肺部损伤作用。

甜橙黄酮对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的作用及其机制研究

目的:探讨甜橙黄酮对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法:采用MTT法观察甜橙黄酮对AGS胃癌细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测甜橙黄酮对细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI标记定量检测细胞凋亡率,DNA片段化分析进一步验证甜橙黄酮对细胞凋亡的作用;Hoechst 33342染色后倒置荧光显微镜观察凋亡细胞形态;Western blot检测对p21和p53蛋白表达的影响。结果:甜橙黄酮可明显抑制AGS胃癌细胞的增殖,呈时间和剂量依赖性;甜橙黄酮可阻滞细胞于G2/M期和增加AGS胃癌细胞凋亡率,并随剂量增大作用增强;60μmol.L-1甜橙黄酮作用48 h产生凋亡特有的梯形条带;Hoechst 33342染色观察到甜橙黄酮给药组出现细胞核浓缩、边缘化以及凋亡小体等细胞凋亡的形态特征;甜橙黄酮可呈剂量依赖地增强p21和p53蛋白表达。结论:甜橙黄酮可显著抑制人AGS胃癌细胞的增殖,使细胞阻滞于G2/M期,并可诱导细胞凋亡,其机制可能与上调p21和p53蛋白有关。

甜橙黄酮对斑马鱼及人脐静脉内皮细胞抗血管新生活性的作用

目的:观察甜橙黄酮在斑马鱼及人脐静脉内皮细胞(HUVECs)上的抗血管新生能力,并探讨其相关作用机制。方法:以150 nmol/L内皮细胞生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(VRI)为阳性对照组、以相应浓度DMSO为空白对照组,观察不同浓度(3,10,30μmol/L)甜橙黄酮对转基因斑马鱼血管系统的影响,并通过实时荧光定量PCR检测相关血管新生基因表达的影响;分别采用XTT与流式细胞术检测3～100μmol/L甜橙黄酮对20 ng/ml内皮细胞生长因子(VEGF)诱导的HUVECs增殖和细胞周期的影响。结果:甜橙黄酮可以剂量依赖性地抑制斑马鱼节间血管(ISV)的形成,下调血管新生相关基因hras、kdrl和vegfaa的表达;可剂量依赖性抑制VEGF诱导的HUVECs增殖,并诱导HUVECs停滞于细胞周期G0/G1期。结论:甜橙黄酮可能通过阻滞细胞周期和影响相关基因的表达达到在斑马鱼体内模型和HUVECs体外模型的抗血管新生作用。

枳术丸与枳术颗粒多成分对比分析研究

目的建立液质分析方法,对比收载于《中国药典》2015年版的同方不同剂型的枳术丸和枳术颗粒中20个活性成分的含量。方法按《中国药典》2015年版制备工艺,采用3批原料制备枳术丸和枳术颗粒。建立高效液相色谱-三重四级杆-质谱(HPLC-Qq Q-MS)分析2种剂型中20个活性成分含量的方法。色谱条件为Poroshell 120 SB-C18色谱柱(100 mm×4.6 mm,2.7μm);流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B),梯度洗脱条件:0~7 min,23%B;7~17 min,23%~80%B;17~20 min,80%~100%B,20~30 min,100%B;体积流量0.5 m L/min;柱温30℃。结果 3批原料制备的枳术丸和枳术颗粒成品,20个活性成分的日服用量,丸剂是颗粒剂的1.48~13.37倍,总量相差493.01~615.07 mg。其中热不稳定性成分白术内酯I、白术内酯II和白术内酯III相差的倍数最大,其次为水溶性较差的川陈皮素。结论枳术丸和枳术颗粒成品中活性成分含量有明显差异,尤其是处方中水溶性差、热不稳定的成分。

指纹图谱结合一测多评法评价酸橙枳实质量的研究

目的通过对枳实进行多成分定性、定量分析,为不同产地酸橙枳实药材的质量控制提供依据。方法结合指纹图谱和一测多评(QAMS)模式,采用Waters X-Brige C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动性,梯度洗脱,检测波长为283 nm和330 nm,体积流量1 m L/min,柱温30℃,进样量10μL。结果建立了不同产地酸橙枳实药材的HPLC-UV指纹图谱,确定了21个共有峰,鉴别出了芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、橙皮素、甜橙黄酮、川陈皮素、桔皮素9种成分,且23批次枳实样品的相似度均大于0.9,聚类分析(CA)及主成分(PCA)分析结果显示的分类情况与该药材的产地分布情况相一致,以新橙皮苷为参照物的QAMS法测定结果均显示一定的差异性。结论从成分的角度来看,不同产地间药材质量存在一定差异,实验所建的QAMS法准确、高效、可行,与标准曲线法和外标法相比具有明显的优势,可应用于酸橙枳实的质量评价,为不同产地酸橙枳实药材的质量控制奠定实验基础。

整合文献计量学、血清药物化学及网络药理学辨识经典名方化肝煎关键质量属性研究

目的基于有效性初步辨识化肝煎治疗胃炎的关键质量属性。方法通过文献计量学分析探析化肝煎主要临床适应证;采用UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术对化肝煎体外化学成分及体内入血移行成分进行分析鉴定;使用Cytoscape软件,构建化肝煎"入血成分-胃炎靶点-通路"网络图,通过拓扑学分析,得到网络中与主要临床适应证密切相关的核心功效成分。结合文献数据支撑,确定化肝煎的关键质量属性。结果化肝煎临床上主要用于治疗各种类型的胃炎。体外共鉴定出化肝煎中泽泻醇B、贝母辛、圣草次苷、苯甲酰氧化芍药苷等75个成分,体内共检测到16个化肝煎入血原型成分,分别为莽草酸、丹皮酚、芍药苷、牡丹皮苷E、西贝母碱、贝母素甲、贝母素乙、贝母辛、对羟基苯甲酸、香风草苷、香草乙酮、6-去甲氧基桔皮素、甜橙黄酮、川陈皮素、3,5,6,7,8,3,,4’-七甲氧基黄酮、桔皮素。化肝煎治疗胃炎涉及AKT1、TNF、VEGFA、MAPK1、EGFR等95个潜在靶点,可能通过调控C型凝集素受体、PI3K-Akt、白细胞介素-17、肿瘤坏死因子等信号通路发挥治疗作用。甜橙黄酮、3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黄酮、川陈皮素、丹皮酚、芍药苷作为化肝煎的关键质量属性。结论辨识的化肝煎关键质量属性可为经典名方复方制剂研发提供依据。

基于HPLC-Q-TOF-MS及化学模式识别方法对陈皮的化学成分快速鉴别及产地判别研究

目的 研究不同产地陈皮Citri Reticulatae Pericarpium化学成分的差异,结合化学模式识别方法对陈皮的产地进行判别分析。方法 采用Agilent SB-C_(18)(150 mm×3.0 mm,2.7μm)色谱柱分离,以乙腈-0.1%甲酸水溶液进行梯度洗脱,质谱采用电喷雾离子源,在正离子模式下采集数据。对色谱图中各色谱峰进行精确质量数识别,利用二级质谱裂解规律、PCDL数据库及对照品对化学成分进行定性分析。结合主成分分析、聚类分析、判别分析等多元统计方法分析了新会陈皮与其他不同产地陈皮的差异成分,并利用这些分析方法鉴别了未知产地陈皮的来源。结果 从不同产地陈皮中鉴定出了29个共有化学成分,主要为多甲氧基黄酮及黄酮苷类化合物。建立9个差异化学成分的判别模型,实现了新会陈皮的准确判别,准确率达94.4%。结论 可作为陈皮产地鉴别和质量控制的有效方法,为道地药材新会陈皮的判别提供参考。

甜橙黄酮体外抑制氧化应激减轻肾小球微血管内皮细胞焦亡的机制研究

目的 探讨甜橙黄酮对糖尿病肾脏疾病的治疗作用及其作用机制。方法 采用硫氧还蛋白外源性抑制剂Px-12孵育人肾小球微血管内皮细胞(human renal glomerular microvascular endothelial cells,HRGEC)在体外建立细胞氧化损伤模型。分别应用甜橙黄酮、氧化应激抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)和细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)抑制剂PD98059进行预处理,而后与Px-12共同孵育细胞。设立对照组、Px-12组、甜橙黄酮组、甜橙黄酮+Px-12组、NAC组、NAC+Px-12组、PD98059组、PD98059+Px-12组。观察细胞形态,CCK-8测定细胞活性,并使用活性氧(reactive oxygen species,ROS)/O_(2)^(-)荧光探针测定各组HRGEC细胞氧化应激水平的差异。通过透射电镜观察各组细胞膜形态的变化,Western blotting检测膜穿孔蛋白(gasdermin D,GSDMD)、ERK1/2磷酸化和间隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)蛋白表达。结果 Px-12可诱导HRGEC细胞膜完整性破坏,并可使GSDMD蛋白剪切暴露其NT端,出现细胞焦亡(P<0.01);Px-12可明显上调ROS/O_(2)^(-)的表达,激活氧化应激水平(P<0.01);甜橙黄酮可明显抑制Px-12诱导的ROS/O_(2)^(-)增加(P<0.05),同时能够减少Px-12诱导的GSDMD-NT的形成(P<0.01)和ERK的磷酸化(P<0.05);Px-12可诱导Cx43的表达明显增加(P<0.01),PD98059则可以明显抑制Cx43的表达(P<0.01),而甜橙黄酮与其作用相似(P<0.01)。结论 甜橙黄酮可减轻Px-12诱导的HRGEC细胞焦亡,可能与调控ERK-MAPK/Cx43信号通路相关。