SIGIRR对HMGB1诱导的A549细胞炎性反应的影响

目的观察单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR)对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导的人肺泡上皮细胞株A549炎性反应的影响。方法构建含有SIGIRR cDNA全长的真核表达载体pCDNA3.1(+),瞬时转染人Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞,使SIGIRR在A549细胞中过表达,采用Western blot和RT-PCR法检测其表达。HMGB1刺激A549细胞后,双荧光素酶报告基因系统检测转染前后核转录因子κB(NF-κB)转录活性的改变,ELISA检测转染前后炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白表达水平的变化。结果转染SIGIRR表达载体的A549细胞,其SIGIRR表达量显著上升。HMGB1刺激后,双荧光素酶报告系统检测发现,NF-κB转录活性明显升高,而转染SIGIRR表达载体后NF-κB转录活性下降。ELISA实验结果表明,过表达SIGIRR的A549细胞在接受HMGB1刺激后其炎症因子TNF-α及IL-1β蛋白表达水平明显低于对照组。结论 SIGIRR表达上调可以抑制HMGB1诱导的A549细胞产生炎症因子TNF-α和IL-1β。A549细胞转染前后NF-κB转录活性的改变提示SIGIRR的抗炎作用可能与其参与NF-κB转录活性的调控有关。

单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白基因腺病毒载体构建及其在体内外表达效力检测

目的:构建携带小鼠源性单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白(mSIGIRR)基因重组腺病毒并对其体内外表达效力进行检测。方法:构建重组穿梭质粒pDC316-mSIGIRR,行酶切、测序鉴定。将穿梭质粒和骨架质粒共转293细胞,包装重组腺病毒Ad.mSIGIRR,行PCR及滴度鉴定。Ad.mSIGIRR感染A549细胞及小鼠肺组织后,通过RT-PCR、Western blot、免疫组化检测mSIGIRR表达情况。结果:扩增得到目的基因片段与Genbank中序列一致,获得表达mSIGIRR蛋白的重组腺病毒。病毒感染滴度为4×109pfu/mL,在体内外感染模型中均有较高表达效力。结论:成功构建携带mSIGIRR基因重组腺病毒,为进一步研究SIGIRR在炎症调控中的作用及分子机制奠定基础。

姜黄素对脂多糖诱导肺泡上皮细胞炎性反应及单免疫球蛋白白介素-1相关蛋白表达的影响

目的:探讨姜黄素对脂多糖诱导肺泡上皮细胞炎症反应及单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白表达的影响。方法:体外培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,用脂多糖及不同浓度姜黄素刺激后测定细胞活性;测定细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。20μmol/L的姜黄素处理后加入10μg/m L的脂多糖刺激,提取细胞核蛋白及膜蛋白,检测核转录因子kappa B和单免疫球蛋白白介素-1相关蛋白的表达水平。结果:5~30μmol/L的姜黄素及10μg/m L脂多糖对细胞活性无影响(P>0.05);5~30μmol/L的姜黄素抑制脂多糖诱导的TNF-α和IL-6的产生(P<0.05),其中20μmol/L与30μmol/L姜黄素的抑制作用最为明显,且两组之间差异无统计学意义(P>0.05);20μmol/L的姜黄素显著降低细胞核内磷酸化核转录因子kappa B p65的表达水平(P<0.05),同时上调细胞内单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白的表达(P<0.05)。结论:姜黄素可抑制脂多糖诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞炎性因子TNF-α和IL-6的释放以及核转录因子kappa B活化,上调负调控分子单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白表达水平是可能的机制之一。

单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白在脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠肺组织中表达的研究

目的通过构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型,观察单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR)在正常小鼠及ALI小鼠模型肺组织中的表达规律,为SIGIRR在ALI预防及治疗方面的应用提供基础。方法将30只雄性BALB/C小鼠随机分为对照组及脂多糖(LPS)组,每组15只。腹腔注射戊巴比妥钠麻醉满意后,行气管插管,呼吸机辅助呼吸。气管内缓慢滴入LPS溶液(1 mg/kg,500/μg)构建ALI模型。对照组按上述操作步骤,气管内注射人生理盐水。观察小鼠肺弹性阻力的变化;肺水肿程度观察;肺组织病理切片HE染色后光镜下观察肺组织病变情况;收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),FLSA法检测细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-6浓度;收集肺组织,ELISA法检测肺组织匀浆内一氧化氮(NO)浓度和髓过氧化物酶(MPO)活性;免疫组化检测肺组织中SIGIRR表达,Western blot检测各个时间点肺组织SIGIRR表达水平的变化。结果模型小鼠肺弹性阻力较对照组明显上升;模型小鼠肺组织湿/干重比值较对照组明显增高;模型小鼠肺组织的病理呈现典型的ALI病理改变特征,对照组小鼠则表现为正常的肺组织病理学特点;模型建立3 h后,ELISA法检测ALI小鼠BALF中IL-1β、TNF-α及IL-6浓度分别为(517±18)pg/mL.、(3523±168)pg/mL和(676±25)pg/mL,显著高于对照组(P<O.05);ELISA法检测模型小鼠肺组织匀浆液中NO的浓度和MPO的活性分别为(88.1±2.6)μmol/mL和(215±7)μIU/mL,显著高于对照组(P<0.05);免疫组化染色提示SIGIRR在正常的小鼠肺组织中存在表达,主要分布于肺泡及气道上皮细胞;模型小鼠肺组织Western blot结果表明:LPS诱导小鼠ALI后1h,SIGIRR的表达即开始下降,3 h后降至最低,随后缓慢恢复,至24 h时基本恢复正常表达水平。结论 SIGIRR在正常的小鼠肺组织中存在表达,主要分布于肺泡及气道上皮细胞,IPS诱导小鼠ALI后SIGIRR的表达短期内下降,至24 h后基本恢复正常表达水平。

铜绿假单胞菌脓毒症大鼠肝组织中TLR4/SIGIRR的表达与静脉血中IL-6和IL-12水平的变化

目的探讨铜绿假单胞菌(P-seudomonas aeruginosa,PA)脓毒症肝组织中单免疫球蛋白白细胞介素-1受体相关蛋白(Single immunoglobin IL-1 receptor related protein,SIGIRR)表达对TLR4的表达及IL-6、IL-12合成的影响。方法将60只SD级大鼠随机分为两组,对照组10只不做处理,试验组50只再细分为5组,分别在腹腔内注射PA,构建PA脓毒症模型;对照组、试验组分别于注射PA 1 h、2 h、4 h、8 h、12 h后无菌取肝脏,下腔静脉无菌抽血。采用实时荧光定量PCR仪检测肝组织中TLR4、SIGIRR的mRNA相对含量;采用双抗夹心ELISA法检测大鼠血清中IL-6、IL-12浓度。结果试验组TLR4表达均大于对照组(P<0.05),但试验组各组间TLR4表达差异无统计学意义(P>0.05);1 h组、2 h组、4 h组IL-6、IL-12水平均低于对照组(P<0.05),8h组、12 h组IL-6、IL-12水平均高于对照组(P<0.05),组间差异比较具有统计学意义(P<0.05)。结论 SIGIRR的上调表达可抑制大鼠血清IL-6、IL-12的产生,但对TLR4表达无影响,提示SIGIRR对TLR4信号通路的负调节作用不是通过直接抑制TLR4表达实现的。

基于ChinaPca全基因组数据和基因表达量探讨LRP1对前列腺癌发病的影响

目的探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(low density lipoprotein receptor-related protein-1,LRP1)基因对前列腺癌(prostate cancer,Pca)发病的影响。方法在ChinaPca GWAS数据中对9个LRP1的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)进行前列腺癌易感性验证;取前列腺癌组织标本12例、癌旁正常组织18例和前列腺炎组织4例进行免疫组化检测;对TCGA和GTEx数据库的LRP1基因表达数据进行分析;在String网站构建LRP1基因的交互作用网络。结果 ChinaPca GWAS数据分析显示,LRP1基因的rs11172113位点可能是前列腺癌遗传易感位点(P=0.083),TC基因型与Pca发病风险有关(OR=1.267,95%CI:1.066~1.505,P=0.007)。免疫组化检测和TCGA数据库分析结果显示,LRP1在前列腺癌组织和癌旁正常组织中的表达量差异无统计学意义(P>0.05),整合TCGA和GTEx数据库数据后LRP1在前列腺癌组织中的表达降低(P<0.05)。交互作用网络显示,LRP1与前列腺癌通路相关基因PLAT、PDGFB、PDGFRB有关联。结论 LRP1基因rs11172113位点可能是前列腺癌的遗传易感位点。LRP1基因在前列腺癌组织中呈低表达,可能通过调节PLAT、PDGFB和PDGFRB基因表达调控前列腺癌相关通路而导致前列腺癌发病。

全氟化碳对脂多糖诱导肺泡上皮细胞炎性反应及单免疫球蛋白白介素-1相关蛋白表达的影响

目的探讨全氟化碳(PFC)对脂多糖(LPS)诱导人肺泡上皮A549细胞炎性反应及单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白(SIGIRR)表达的影响。方法实验分为正常细胞组、全氟化碳+脂多糖(PFC+LPS)组、全氟化碳(PFC)组及脂多糖(LPS)组。各组细胞经相应处理24h后,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清中的TNF-α、IL-6和IL-10含量,用蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测核转录因子-κB(NF-κB)和SIGIRR的表达。结果 ELISA结果显示,LPS组TNF-α、IL-6水平较正常细胞组升高(P<0.05);PFC+LPS组TNF-α、IL-6水平较LPS组下降(P<0.05);与正常细胞组相比,PFC组IL-10水平升高(P<0.05),PFC+LPS组IL-10水平较LPS组升高(P<0.05)。Western-blot结果显示,与正常细胞组相比,LPS组核内磷酸化NF-κB p65表达上调(P<0.05),PFC+LPS组核内磷酸化NF-κB p65表达水平较LPS组降低(P<0.05);与正常细胞组相比,LPS组SIGIRR表达水平下调(P<0.05),PFC+LPS组SIGIRR表达水平较LPS组上调(P<0.05)。PFC本身对TNF-α、IL-6含量及NF-κB p65表达无影响,但PFC可促进A549细胞释放IL-10及上调SIGIRR表达(P<0.05)。结论 PFC可减轻A549细胞对LPS诱导的炎性反应,促进抗炎因子IL-10分泌及上调负调控分子SIGIRR表达是可能的分子机制。

核转录因子NF-κB调节人肾小管上皮细胞SIGIRR表达机制的研究

目的探讨人肾小管上皮细胞(HKC)内核转录因子NF-κB(NF-κB)反馈调控单免疫球蛋白白介素1受体相关蛋白(SIGIRR)表达的分子机制。方法分子克隆法构建pLNCX2-G418-SIGIRR过表达载体,经PT67细胞包装后感染HKC细胞,构建SIGIRR过表达细胞和对照细胞。使用IL-1β诱导,Western blot验证过表达SIGIRR可抑制NF-κB活化。使用NF-κB阻断剂和干涉NF-κB活性后,免疫荧光法验证活化的NF-κB可调控SIGIRR表达。在线工具预测SIGIRR启动子区存在NF-κB结合位点。分子克隆法从人基因组DNA内获取含有结合位点的SIGIRR启动子序列,连接至荧光素酶载体pGL3-Luc,构建pGL3-Luc-SIGIRR,并突变结合位点。使用荧光素酶报告基因实验和染色质免疫沉淀技术(ChIP)共同验证活化的NF-κB可结合在SIGIRR启动子区调控SIGIRR基因的表达。结果构建的pLNCX2-G418-SIGIRR逆转录病毒载体经酶切、测序验证后对比SIGIRR基因编码序列完全一致,重组体和对照载体经病毒包装后转入HKC细胞后成功构建HKC/SIGIRR实验组和HKC/Co对照组细胞系,在mRNA和蛋白水平的SIGIRR表达差异有统计学意义(P<0.05,P<0.001)。过表达SIGIRR细胞组相比对照组细胞可以减少IL-1β诱导的NF-κB的活化(P<0.001),抑制NF-κB活化和干涉NF-κB表达后,SIGIRR的表达出现下调。提取人基因组DNA后,分子克隆法获得SIGIRR目的启动子序列连接至载体,成功构建pGL3-Luc-SIGIRR荧光素酶载体并定点突变载体,经酶切和测序验证与目的序列完全一致。通过荧光素酶报告基因实验和CHIP实验证实NF-κB可结合SIGIRR启动子区域,调控SIGIRR表达。结论HKC细胞中SIGIRR可以影响NF-κB的活化,活化的NF-κB可以结合到SIGIRR的启动子区域,调控SIGIRR的基因表达变化,形成一个反馈体系,控制NF-κB的过度活化。

SIGIRR过表达抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞NF-κB的活化

目的:研究单免疫球蛋白白介素1受体相关蛋白(SIGIRR)对脂多糖(LPS)刺激的肺泡上皮细胞核因子-κB信号通路的调节作用。方法:以LPS刺激人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549。将含有SIGIRR cDNA全长的真核表达载体瞬时转染A549细胞,使SIGIRR在A549细胞过表达。用双萤光素酶报告系统检测LPS刺激后A549细胞NF-κB的转录活性,用ELISA法检测LPS刺激后细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白细胞介素-6(IL-6)的水平,对比转染与否对上述因子在A549细胞中释放水平的影响。结果:在A549细胞中,过表达SIGIRR可显著抑制NF-κB的转录活性,同时抑制LPS诱导的细胞因子IL-1β、TNF-α以及IL-6的表达。结论:SIGIRR过表达可以抑制LPS触发的肺泡上皮细胞中TLR4信号的转导,从而发挥减轻炎症反应、保护肺泡上皮细胞的作用。

SIGIRR过表达对LPS诱导的H292细胞NF-κB活性的影响

目的研究单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白(SIGIRR)对内毒素(LPS)诱导的人气道上皮H292细胞核转录因子-κB(NF-κB)活性影响。方法将含有SIGIRR cDNA全长的真核表达载体瞬时转染H292细胞24 h后,用Western blot的方法检测SIGIRR在细胞内的表达水平,同时设立空载体转染组作为对照。另外,于转染24 h后给予LPS刺激,分别于加入LPS后3、6、12、24 h收集细胞质、细胞核蛋白和培养上清液,用Western blot的方法检测各时间点细胞质和细胞核中NF-κB蛋白水平变化,用ELISA的方法检测各时间点培养上清液中TNF-α和IL-6水平。结果在给予LPS刺激前,用质粒瞬时转染的方法使SI-GIRR在H292细胞中过表达可以显著抑制NF-κB的转录活性,同时抑制LPS诱导的细胞因子TNF-α和IL-6的产生。结论过表达SIGIRR可减轻H292细胞对LPS诱导的炎症反应,这可能与SIGIRR抑制LPS-TLR4信号传导而减少NF-κB的活化有关。调控SIGIRR的表达有望成为新的治疗急性肺损伤(ALI)等炎症失控性疾病的靶点。

SIGIRR在人正常肺组织及脂多糖诱导的肺泡上皮细胞急性损伤中的表达

目的检测单一免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR)在正常肺组织及脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞急性损伤中的表达。方法收集手术切除的正常肺组织标本20例,分别采用免疫组织化学、Western blot、RT-PCR法检测SIGIRR的表达。以终浓度10μg/mL的LPS刺激人Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞,于刺激前,刺激后3、6、12及24h分别以Western blot法检测SIGIRR表达的变化。将含有SIGIRR cDNA全长的表达载体瞬时转染A549细胞,使SIGIRR在A549细胞过表达。通过MTT法检测LPS对A549细胞的损伤作用。结果不同检测方法发现SIGIRR在正常肺组织中均有表达;免疫组织化学检测可见SIGIRR表达于肺泡上皮细胞。LPS刺激后3、6及12h时SIGIRR表达较刺激前均下调,24h后回升至刺激前水平。MTT试验表明过表达SIGIRR的A549细胞在接受LPS刺激后生长抑制率显著低于对照组。结论SIGIRR能够表达于正常肺组织,且能够减轻LPS刺激导致的肺泡上皮细胞损伤。提示SIGIRR可能参与了LPS诱导的ALI的调节。

小鼠SIGIRR基因重组腺病毒的构建及鉴定

拟构建小鼠SIGIRR基因重组腺病毒并进行鉴定,为SIGIRR在小鼠急性肺损伤预防及治疗方面的研究提供基础。利用AdEasyTM系统构建SIGIRR基因重组腺病毒,并检测SIGIRR mRNA及蛋白在感染细胞及组织中的表达。通过多次扩增后,大量制备高滴度腺病毒。结果表明,本试验成功构建了携带小鼠源性SIGIRR基因的重组腺病毒表达载体Ad-mSIGIRR,病毒感染滴度为5×1010 pfu/mL,滴度符合下一步试验要求。Western blot和免疫组化方法分别检测到mSIGIRR在体内的高效表达,且经气管滴注感染小鼠后,不会引起正常小鼠肺组织发生病理变化。明确了SIGIRR基因的重组腺病毒可以在小鼠活体内使mSIGIRR过表达,且经气管滴注5×109pfu的病毒感染小鼠后,不会引起正常小鼠肺组织发生病理变化。

老年急性胰腺炎继发脓毒症外周血单免疫球蛋白白细胞介素-1受体相关蛋白表达及意义

目的探究老年急性胰腺炎(SAP)继发脓毒症外周血单免疫球蛋白白细胞介素-1受体相关蛋白(SIGIRR)表达及意义。方法选择2019年9月-2021年9月丽水市人民医院急诊科收治的老年SAP继发脓毒症患者50例为研究组,另随机选择同期老年SAP未继发脓毒症患者50例为对照组。收集患者临床资料,采用酶联免疫吸附法检测外周血SIGIRR、TOLL样受体(TLR)2、TLR4和白细胞介素受体-1R(IL-1R)水平。结果研究组入院时床边急性胰腺炎严重指数(BISAP)高于对照组(P<0.05);研究组血清SIGIRR、TLR2、TLR4和IL-1R水平高于对照组(P<0.05),多因素Logistic回归分析结果显示BISAP、SIGIRR、TLR2、TLR4和IL-1R均为SAP继发脓毒症危险因素(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线显示,血清SIGIRR、TLR2、TLR4和IL-1R水平预测继发脓毒症曲线下面积均>0.7,均具有统计学意义(P<0.05)。结论SIGIRR与TLRs及IL-1R协同参加老年SAP患者继发脓毒症发病过程,其水平对于预测脓毒症发生有一定临床意义。

SIGIRR胞内区酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活作用检测

目的：构建单免疫球蛋白白细胞介素-1受体相关蛋白（SIGIRR）胞内区酵母双杂交诱饵质粒，并检测其是否存在自激活作用。方法聚合酶链反应（PCR）扩增人SIGIRR胞内区基因片段（480～1230 bp），并将此基因片段重组入pSos载体中，构建诱饵质粒pSos-SIGIRR ，经酶切及测序鉴定构建正确后，将重组质粒与对照质粒共转化感受态酵母菌cdc25H ，接种于25℃SD/Glucose（-UL）和SD/Galactose（-UL）平板以及37℃ SD/Glucose（-UL）和SD/Galactose（-UL）平板上，连续观察6 d酵母菌生长状况；用Western blot法检测目的蛋白表达情况。结果正确构建了人SIGIRR胞内区酵母双杂交诱饵质粒pSos-SIGIRR ， pSos-SIGIRR在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用。Western blot结果显示，目的蛋白以170＆#215;103的融合蛋白形式表达。结论诱饵质粒pSos-SIGIRR可应用于酵母双杂交系统中，为在人肺互补脱氧核糖核酸（cDNA ）文库中寻找与SIGIRR相互作用蛋白奠定了重要基础。

右美托咪定通过调控SIGIRR/NF-κB信号对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的影响

目的探究右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺损伤(ALI)的影响及其作用机制。方法实验分为正常对照组(Control)、DEX对照组(DEX)、LPS诱导大鼠急性肺损伤组(LPS)以及LPS+DEX处理组(LPS+DEX)。待造模成功后24 h检测各组大鼠肺组织湿/干质量比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)IL-1β、TNF-α和IL-6含量;HE染色观察肺组织病理学改变;免疫组化和Western blot检测SIGIRR和NF-κB表达。结果与Control组相比,LPS组肺组织W/D以及BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α含量均增加(P<0.01),肺组织出现明显的ALI病理损伤,且SIGIRR表达降低(P<0.01),NF-κB磷酸化活化增强(P<0.01);与LPS组相比,LPS+DEX组肺组织W/D以及BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α含量均降低(P<0.05或P<0.01);肺组织病理性损伤明显减轻,且SIGIRR表达增加,NF-κB磷酸化活化降低(P<0.01)。结论右美托咪定可能通过降低SIGIRR降解,抑制NF-κB活化,降低炎症反应,从而减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤。

干扰素治疗慢性乙型肝炎预后与降钙素基因相关肽及受体活性蛋白1基因多态性的关联研究

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)rs155209和受体活性蛋白1(RAMP1)rs3754701两个基因位点突变是否与干扰素治疗慢性乙型肝炎(乙肝)预后有关。方法采用调查问卷的方法收集317例研究对象的一般资料,收集其抗凝血,提取DNA,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱实验平台进行SNPs分型,使用单因素及多因素logistic回归方法分析CGRP及RAMP1基因多态性与干扰素治疗慢性乙肝预后的关系。结果携带RAMP1基因rs3754701T者更容易出现DNA应答和ALT应答(OR=2.277,95%CI:1.386~3.741,P=0.001;OR=1.694,95%CI:1.073~2.675,P=0.024),而携带CGRP基因rs155209C者更不易出现DNA应答和ALT应答(OR=0.150,95%CI:0.083~0.271,P<0.001;OR=0.583,95%CI:0.367~0.925,P=0.022)。结论在中国北方汉族人群中,CGRP基因的rs155209和RAMP1基因的rs3754701位点与干扰素治疗慢性乙肝预后有关,rs3754701T在干扰素治疗后的DNA应答和ALT应答中起保护作用,而rs155209C携带者不易出现DNA应答和ALT应答。

单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白对香烟烟雾提取物刺激A549细胞后产生效应的影响

目的观察单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR)对香烟烟雾提取物(CSE)刺激的小鼠肺泡上皮细胞株A549炎性反应的影响。方法将A549细胞分为过表达SIGIRR组和对照组。构建含有SIGIRR c DNA全长的真核表达载体pc DNA3.1(+),瞬时转染小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞,使SIGIRR在A549细胞中过表达,采用半定量Western blot和RT-PCR法检测其表达。以CSE刺激对照组及过表达SIGIRR组中A549细胞后,ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)水平,双荧光素酶报告系统检测环氧化酶2(COX-2)表达水平,化学发光法检测活性氧(ROS)释放水平的变化。结果转染SIGIRR表达载体的A549细胞其SIGIRR表达量显著上升。对照组经CSE刺激后,COX-2表达、ROS释放、IL-6释放水平均显著增高,而过表达SIGIRR组的A549细胞经CSE刺激后,COX-2表达较对照组降低,ROS释放较对照组降低,IL-6释放水平也明显低于对照组(P<0.05)。结论 SIGIRR表达上调可以抑制CSE诱导的A549细胞产生ROS、COX-2及IL-6,提示SIGIRR表达上调可能对吸烟所致呼吸道炎症具有抑制作用。

SIGIRR对脂多糖诱导的人气道上皮细胞株炎症反应的抑制作用

目的观察单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白（SIGIRR）对内毒素-脂多糖（LPS）诱导的人气道上皮细胞株H292炎症反应的影响。方法以人气道上皮细胞株H292为研究对象，实验分为两组：A组（实验组，SIGIRR过表达组）；B组（对照组，空载体转染组）。将含有SIGIRRcDNA全长的真核表达载体瞬时转染H292细胞24h后，使SIGIRR在H292细胞中过表达，并设立空载体转染组作为对照组；分别采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot法检测SIGIRR表达。于基因转染24h后给予LPS刺激H292细胞，分别于加入脂多糖（LPS）后3、6、12、24h各时间点，Western blot法检测转染前后核因子-κB（NF-κB）转录活性的改变，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测转染前后炎性因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β录活性明显升高；而实验组转染SIGIRR表达载体后NF-KB转录活性下降。ELISA实验结果表明，过表达SIGIRR的H292细胞在接受LPS刺激后其炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白表达水平明显低于对照组。结论SIGiRR过表达可减轻H292细胞对LPS诱导的炎性反应，抑制H292细胞株产生TNF-α、IL-1β和IL-6等炎性因子。

Toll样受体4及其负调控因子在大鼠不同发育阶段肠组织表达的比较

目的:通过比较Toll样受体4(TLR4)及其负调控因子单Ig区IL-1相关受体(SIGIRR)和Toll作用蛋白(Tollip)在SD大鼠不同发育阶段肠段组织的表达,进一步了解新生儿坏死性小肠结肠炎的发病机制。方法:将孕20 d胎鼠剖腹产获得早产新生大鼠6只纳入早产组,顺产第1天新生大鼠6只纳入足月组,生后6周SD大鼠作为成年组。处死3组大鼠并解剖腹部,获得回肠末端肠道组织。通过荧光定量PCR的方法检测3组大鼠回肠末段组织的TLR4、SIGIRR、Tollip基因mRNA相对表达量,分别比较3个基因在3组SD大鼠肠组织中表达量。结果:早产组TLR4 mRNA的表达量是足月组的2.36倍,而成年组则是足月组的1/4,差异均有统计学意义(P<0.05)。早产组SIGIRR mRNA的表达量是足月组的1/7,而成年组则是足月组的1.37倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。早产组Tollip mRNA的表达量是足月组1/20,两组的差异有统计学意义(P<0.05),成年组的Tollip mRNA表达量未得到结果。结论:不成熟的肠道组织TLR4表达量多,TLR4负调控因子SIGIRR、Tollip表达下调。