新型噬菌体表面呈现载体的构建

作为抗体库筛选的一个有效方法,噬菌体表面呈现技术在单链抗体的研制中得到广泛的应用。以噬菌粒pCANTAB5E和pHB为基础,利用PCR和DNA重组方法,构建了一个新型的用于单链抗体噬菌体表面呈现的噬菌粒载体。随后用一株对大肠杆菌细胞有毒性的人源化单链抗体(1HSCFV)对其呈现单链抗体的效果进行了初步的评价,结果表明新型噬菌粒系统具有更好的呈现能力。

梭曼单链抗体的基因克隆和表达

成功地扩增了有机磷毒剂梭曼类似物１－羟基－１－对胺基苯基甲膦酸单频哪基醇酯与血蓝蛋白结合物免疫小鼠脾细胞中抗体重链和轻链基因片段，构建了单链抗体可变区基因（ＶＨ－ｌｉｎｋｅｒ－ＶＬＤＮＡ），并将该基因克隆到噬菌体表达载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ的外壳蛋白ｇ３ｐ基因中，使单链抗体以融合蛋白的形式在Ｅ．ｃｏｌｉＴＧ１中表达在噬菌体表面，构成噬菌体抗体库．通过免疫亲和淘洗和竞争抑制酶联免疫吸附测定法筛选，得到１２株克隆，其分泌的单链抗体与梭曼有结合活性．

从噬菌体抗体库分离抗NKAT4单链抗体

用一噬菌体抗体库分离人杀伤抑制受体特异性的单链抗体。经ＥＬＩＳＡ分析显示，５０个克隆中有１４个与ＮＫＡＴ４蛋白反应呈强阳性。这些克隆的重链可变区胚系为ＤＰ４７。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ显示表达在上清中的单链抗体为单体。本研究结果表明，从一噬菌体抗体库可比较简便地分离到杀伤抑制受体的特异性单链抗体。