基于转录组测序的兴国红鲤微卫星标记筛选

采用Illumina高通量测序技术,对兴国红鲤（Cyprinus carpio var.singuonensis）垂体和性腺等组织进行转录组测序分析,筛选微卫星标记并分析其组成及特征。结果显示：共获得13 652个微卫星标记,对所得位点进行分类,单核苷酸重复类型占47.86%,二、三、四、五、六核苷酸重复类型所占比例分别为34.43%、16.32%、1.25%、0.12%以及0.02%。随机选取30个SSR位点进行PCR验证,有20对可以扩增出清晰稳定的条带。在24个兴国红鲤个体中对上述位点进行多态性分析,结果表明,具有多态性的微卫星引物为9对。不同位点得到的等位基因范围为2~4,平均等位基因数为3.111 1±0.993 8,观测杂合度（Ho）、期望杂合度（He）以及多态信息含量（PIC）平均值分别为0.597 2±0.233 2、0.539 7±0.178 0和0.467 2±0.172 1。9个微卫星位点中,有4个显著偏离哈代-温伯格平衡（Hardy-Weinberg equilibrium,HWE）（P〈0.05）。Illumina高通量测序提供了一种直观、高效开发微卫星标记的方法,所选兴国红鲤群体遗传多样性维持较好。

赣昌鲫(日本白鲫♀×兴国红鲤♂)及其双亲同工酶的研究

采用不连续聚丙酰胺凝胶电泳法,研究了赣昌鲫(Carassius cuvieri♀×Cyprinus carpio var. singuonensis ♂)及其双亲的肌肉、肝脏、肾脏、心脏、脑、晶状体6种组织在超氧化物歧化酶(SOD)、苹果酸脱氢酶同工酶(MDH)、乳酸脱氢酶同工酶(LDH)、酯酶(EST)四种同工酶酶谱表达上的遗传差异。结果显示:赣昌鲫的SOD酶谱表达在6种组织中与母本一致;心脏、肝脏、肾脏的MDH表达酶带数与母本相同,且具偏母遗传特性,肌肉的MDH表达谱带数与父本肌肉相同,具偏父遗传特性;LDH、EST在各组织中的酶带表达形式则多数特征偏向于父本,部分与母本相似;LDH同工酶的表达显示出新杂种酶带特异性,EST同工酶在肾脏中也表达了自身特有的杂种酶带。结果表明,属间杂交的后代遗传物质上也存在着变异,存在可选育的性状。

兴国红鲤AR基因的鉴定及MT暴露对幼鱼肝中AR和vtg表达的影响

实验克隆了兴国红鲤(Cyprinus carpio var singuonensis)雄激素受体(androgen receptor,AR)基因的全长c DNA序列和卵黄蛋白原(vitellogenin,vtg)基因的部分c DNA序列,并对雌性个体组织及甲基睾丸酮(Methyltestosterone,MT)暴露下幼鱼肝胰腺(以下简称:肝)中AR和vtg的表达进行检测。兴国红鲤AR基因c DNA全长3 229 bp,包括104 bp的5'非编码区(untranslation region,UTR)、编码846个氨基酸的2 541 bp开放阅读框(open reading frame,ORF)和485 bp 3'UTR。氨基酸序列同源性分析表明,兴国红鲤AR与其他鲤科鱼类AR的同源性较高。组织表达特征研究表明,AR在雌性个体的肝、卵巢、中肾、肌肉和端脑中有表达,其中肝中的表达量最高;vtg主要在肝、端脑和鳃中表达。兴国红鲤幼鱼在50μg/L的MT中暴露4周后,采用qRT-PCR检测了肝中AR和vtg的表达情况。在处理第1、2周,AR的表达受到一定的抑制,而在第3、4周其表达量升高,但其表达无显著性变化;而vtg的表达量在第3、4周均有极显著的升高。

远缘鲫(白鲫♀×兴国红鲤♂)与其亲本若干遗传性状比较

目的:为种质鉴定及杂交育种等方面提供理论依据。方法:通过试验,从形态、生长、发育、生化方面比较了远缘鲫(白鲫♀×兴国红鲤♂)与其亲本的若干遗传性状。结果:远缘鲫主要形态特征如体色、鳍条数、腹膜颜色、脊椎骨数目、体长/体高、体长/尾柄高等接近于母本,侧线鳞数、口须、体长/头长、体长/尾柄长等形态特征接近于父本;肌肉必需氨基酸含量9.21%,高于双亲;可食部分大,经济性状优,空壳重/体重平均85.8%,高于双亲;个体增重比白鲫平均快61.5%;远缘鲫雌雄均不育。结论:远缘鲫具有一定的杂合性,是真正的杂种,获得了杂交优势。

彭泽鲫♀×兴国红鲤♂杂交四倍体子代倍性鉴定及染色体核型分析

为了解彭泽鲫(Carassius auratus var.pengsenensis)♀×兴国红鲤(Cyprinus carpio var.singuonensis)♂杂交四倍体子代的细胞遗传特性,本研究以彭泽鲫♀×兴国红鲤♂杂交四倍体子代为研究对象,以彭泽鲫雌核发育子代为内参,采用流式细胞仪测量其DNA相对含量,并对彭泽鲫雌核发育子代与杂交四倍体子代进行红细胞形态、大小的比较,另取杂交四倍体子代肌肉、鳍条组织块进行细胞培养,制作染色体标本,对其进行染色体计数及核型分析。结果显示:杂交四倍体子代仍为四倍体,其红细胞长轴、表面积、体积、核长轴、核表面积、核体积均显著大于彭泽鲫雌核发育子代。从形态上看,杂交四倍体子代红细胞相较于彭泽鲫雌核发育子代更长,辅助证明杂交四倍体子代为四倍体。杂交四倍体子代染色体组由200+条染色体组成,核型公式为4n=42m+64sm+62st+32t,NF=368,多出的染色体为超数染色体,未发现有异型性染色体,杂交四倍体子代属于中位演化类群。综上表明,彭泽鲫♀×兴国红鲤♂杂交四倍体子代仍为四倍体。