白藜芦醇对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用及其与Sirt1-p53通路的关系

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)的保护作用及其具体分子机制。方法雄性6周龄SD大鼠20只[体质量(200±20)g]随机数字法分为4组(n=5):假手术组、缺血再灌注组、RES预处理组、RES预处理+抑制剂组。建立大鼠肝脏70%热缺血再灌注模型(缺血1 h,再灌注6 h),并提前1 h给予RES及Sirt1抑制剂(EX527)。建模后检测血清标本中ALT活力及肝组织SOD活性,HE染色观察肝组织病理损伤,TUNEL法检测肝细胞凋亡,实时荧光定量PCR和Western blot检测肝组织Sirt1、乙酰化p53、Bax表达水平。结果 RES能够显著降低由HIRI引起的ALT活力升高(P<0.01)并增加SOD活性(P<0.01),显著缓解由HIRI引起的肝脏病理学改变(P<0.01)和减少肝细胞凋亡(P<0.01),显著提高Sirt1和Bax mRNA表达水平(P<0.01,P<0.01),提高Sirt1和Bax蛋白表达水平(P<0.01,P<0.01)并降低乙酰化p53蛋白表达水平(P<0.01)。结论 RES能减轻缺血再灌注诱导的肝脏损伤,该保护作用部分是通过激动Sirt1-p53通路实现。

EGCG通过调控SIRT1-P53通路诱导人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡

目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate,EGCG）调控人卵巢癌SKOV-3细胞活力和凋亡的分子机制。方法：SKOV-3细胞给予EGCG（0~50μmol/L）、SIRT1激动剂SRT1720（1μmol/L）和SIRT1抑制剂EX527（1μmol/L）处理后,用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,real-time PCR检测Bax和Bcl-2 mRNA的表达水平;采用SIRT1去乙酰化酶活性检测试剂盒检测SIRT1酶活性;使用Western blot法检测SIRT1、乙酰化P53和P53的蛋白表达变化。结果：与正常对照组相比,单独给予EGCG或EX527处理之后SKOV-3细胞活力下降,凋亡率增加;SIRT1的酶活性和蛋白表达水平均明显下降;P53的乙酰化水平显著增加。与EGCG组相比,SRT1720预处理组的细胞活力上升,凋亡率下降,Bax/Bcl-2的相对比值及激活型caspase-3的蛋白水平明显下降,并且SIRT1的酶活性和蛋白表达水平显著增加,P53的乙酰化水平下降。结论：EGCG可通过调控SIRT1-P53通路抑制卵巢癌SKOV-3细胞活力并诱导其凋亡。

人脐血间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠SIRT1-P53通路的影响

目的探讨人脐血间充质干细胞(MSC)移植对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其与SIRT1-P53通路的关系。方法选择40只健康雄性SD大鼠,随机均分为4组:假手术组、模型组、干细胞组、干细胞+EX527组,每组10只。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot法检测各组大鼠不同时间点(1、7、14 d)脑组织匀浆中SIRT1、P53、BAX mRNA含量及蛋白表达变化。于1、3、7、14d对大鼠进行神经功能缺损评分。结果干细胞组与模型组、干细胞+EX527组比较,3、7、14 d神经功能缺损评分明显降低(P <0. 01)。干细胞组SIRT1 mRNA及蛋白表达量明显高于模型组和干细胞+EX527组(P <0. 01),P53、BAX mRNA明显低于模型组和干细胞+EX527组(P <0. 01)。结论人脐血间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护机制可能与激活SIRT1-P53通路、下调P53及其下游BAX表达有关。

虾青素对大鼠对比剂急性肾损伤的保护作用以及对SIRT1-P53通路的影响

目的研究虾青素对对比剂急性肾损伤(CI-AKI)的保护作用及其与SIRT1-P53的通路关系和对NO、3-NT含量影响。方法 40只SD大鼠采用数字表法随机分为5组:对照组,虾青素对照组,造模组,iNOS抑制剂组,虾青素治疗组。每组8只,建立对比剂急性肾损伤模型72h后检测大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平;HE染色观察肾组织病理改变;Tunel法检测肾小管细胞凋亡;氧化应激试剂盒法检测肾脏组及谷织丙二醛(MDA)含量,总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)胱甘肽(GSH)活性;SIRT1试剂盒法检测SIRT1活性;Western blot法检测肾组织中SIRT1、P53及ac-P53的蛋白表达;NO试剂盒、3-硝基酪氨酸(3-NT)试剂盒测定肾组织中NO、3-NT含量。结果与对照组比较,造模组Scr、BUN水平显著升高;iNOS抑制剂组和虾青素治疗组较造模组均降低(P均<0.05);HE和Tunel染色可见造模组大鼠肾脏肾小管损伤严重,iNOS抑制剂组和虾青素治疗组上述病理改变减轻,肾损伤评分、凋亡指数(AI)降低(P均<0.05);与对照组比较,造模组肾组织中MDA含量显著增高,T-SOD、GSH、GSH-Px活性显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),iNOS抑制剂组和虾青素治疗上述指标有明显改善(P均<0.05);与对照组比较,造模组SIRT1活性降低,SITR1、P53表达均上调,且ac-P53/P53比值升高;虾青素治疗组SIRT1活性升高、SIRT1表达上调,P53下调,且ac-P53/P53比值下降(P均<0.05)。与对照组比较,造模组肾组织NO、3-NT含量明显升高,而iNOS抑制剂组和虾青素对照组较造模组降低(P均<0.05)。结论虾青素对CI-AKI具有保护作用,其机制可能与SIRT1-P53通路有关。虾青素能够降低CI-AKI肾组织中NO、3-NT含量,减轻对比剂所致的肾损伤。

Hes1调控AKT-MDM2-p53-PTEN通路的一种物理机制

基于Hill动力学与Michaelis-Menten方程,建立理论模型研究发状分裂相关增强子1(Hairy and enhancer of split 1,Hes1)调控蛋白激酶B(Protein Kinase B,AKT)-鼠双微体2(Murine Double Minute2,MDM2)-抗癌基因p53(p53)-第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)通路的一种物理机制.研究发现,Hes1通过与PTEN结合抑制PTEN表达,并调控AKT信号.表明了Hes1蛋白的合成,以及Hes1与PTEN相互作用调控AKT-MDM2-p53-PTEN通路信号,将会有效地控制细胞结果.Hes1作为AKT-MDM2-p53-PTEN信号通路中上游调节的重要因素,还可以在一定程度上通过影响p53蛋白功能,改变p53对肿瘤的抑制性.理论结果可用于预测Notch通路信号异常诱导的致癌性,并进一步揭示了Notch信号通路影响细胞AKT-MDM2-p53-PTEN通路的激活机制.

二甲双胍通过激活SIRT1/p53信号通路对骨关节炎大鼠关节软骨发挥保护作用

目的探究二甲双胍对骨关节炎大鼠软骨保护作用机制。方法取30只雄性SD大鼠,随机分为3组(10只/组)。建立大鼠膝骨关节炎模型,二甲双胍组大鼠接受灌胃治疗[200 mg/(kg·d)],空白组和模型组大鼠给予生理盐水作为对照。4周后,采用形态学染色方法观察关节软骨形态,通过免疫组化染色、免疫荧光染色及Western blot检测SIRT1/p53信号通路因子、炎症及凋亡相关因子的表达。结果二甲双胍组大鼠较模型组软骨结构损伤明显减轻,软骨层面趋于平整,软骨细胞数目增多,蛋白多糖含量增加。免疫组化染色、免疫荧光染色和Western blot检测发现,二甲双胍组大鼠软骨组织中SOX9、Aggrecan、Bcl-2、SIRT1蛋白表达较模型组显著升高,而IL-6、TNF-α、BAX、Caspase-9、p53蛋白表达明显降低。TUNEL染色结果显示,与模型组比较,二甲双胍组大鼠软骨细胞凋亡数量明显减少。结论二甲双胍可通过SIRT1/p53信号通路的激活减少骨关节炎SD模型大鼠软骨细胞凋亡,抑制软骨细胞外基质降解,进而保护关节软骨。

柴胡疏肝散对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织SIRT1/p53通路相关蛋白的影响

目的探讨柴胡疏肝散对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织沉默信息调节因子蛋白1(SIRT1)/p53通路相关蛋白表达的影响。方法将24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、柴胡疏肝散组(9.6 g·kg-1),每组8只。正常对照组给予基础饲料,模型组和柴胡疏肝散组给予高脂饲料,柴胡疏肝散组同时给予柴胡疏肝散浸膏剂灌胃。16周后处死大鼠,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)含量和肝组织TC、TG含量;取肝组织行HE和油红O染色观察组织学改变;蛋白质印迹法检测肝组织SIRT1、p53、乙酰化p53(Ac-p53)蛋白表达。结果与模型组比较,柴胡疏肝散组肝组织病理学结果表明,脂质沉积明显减轻,血清LDL-C和肝组织TC、TG显著降低(P<0.05,P<0.01),肝组织SIRT1蛋白表达水平显著上调(P<0.01),而Ac-p53蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论柴胡疏肝散能够减轻高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝组织脂质沉积,调控肝组织SIRT1/p53通路相关蛋白的表达水平可能是其作用机制之一。

抗衰老酶1-p53信号通路在右美托咪定对大鼠海马神经元细胞凋亡保护作用中的机制分析

目的分析抗衰老酶1(SIRT1)-p53信号通路在右美托咪定对大鼠海马神经元细胞凋亡保护作用中的机制。方法选取10只出生24 h内的无特定病原体级SD大鼠,取原代海马神经元。(1)分别使用1μmol/L(A组)、5μmol/L(B组)、50μmol/L(C组)的右美托咪定对原代海马神经元进行2 h处理,并设置对照组1给予2 h的50%氧气处理。对A组、B组、C组及对照组1的原代海马神经元细胞内Bax、剪切型半胱氨酸蛋白酶(c-caspase-3)及剪切型聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(c-PARP)、磷酸化组蛋白H2A家族成员X(γ-H2AX)、SIRT1及p53蛋白表达水平及细胞凋亡情况进行观察和比较。(2)右美托咪定麻醉前24 h分别给予50μmol/L的sirtinol(a组)、50μmol/L的salermide(b组)、100μmol/L的resveratrol(c组)处理原代海马神经元,然后使用50μmol/L的右美托咪定进行2 h处理,并设置对照组2给予24 h的0.9%氯化钠溶液处理。观察并比较激活或抑制SIRT1通路对麻醉引起原代海马神经元细胞凋亡Bax、c-caspase-3、c-PARP、γ-H2AX、SIRT1、p53蛋白水平的影响。结果A组、B组、C组原代海马神经元细胞的A值和细胞存活率水平均低于对照组1,C组最低,A组、B组、C组原代海马神经元细胞凋亡率均高于对照组1,C组最高,与右美托咪定的浓度呈现剂量反应,差异均有统计学意义(P<0.05)。A组、B组、C组原代海马神经元细胞中Bax、c-caspase-3及c-PARP的表达水平均高于对照组1,C组最高,与右美托咪定的浓度呈现剂量反应,差异均有统计学意义(P<0.05)。A组、B组、C组原代海马神经元细胞中γ-H2AX、SIRT1蛋白的表达水平均高于对照组1,C组最高;p53蛋白的表达水平均低于对照组1,C组最低,与右美托咪定的浓度呈现剂量反应,差异均有统计学意义(P<0.05)。SIRT1拮抗剂预处理可下调SIRT1蛋白表达,上调p53乙酰化,增加Bax、c-caspase-3、c-PARP及γ-H2AX的表达;SIRT1激动剂预处理可上调SIRT1蛋白表达,抑制p53的乙酰化水平,降低Bax、c-caspase-3、c-PARP及γ-H2AX蛋白表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论右美托咪定诱导的麻醉激活SIRT1-p53信号通路诱导海马神经元凋亡,右美托咪定诱导麻醉中可合理使用SIRT1激动剂以保护神经功能,且随右美托咪定剂量升高保护作用效果更明显。

小檗碱对NAFLD大鼠肝组织氧化损伤及SIRT1/p53通路的影响

目的:研究小檗碱对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织氧化损伤及沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)/p53通路的影响,探讨小檗碱抗NAFLD的作用机制。方法:选用SPF级雄性SD大鼠24只,按随机数字表均分为正常组、模型组与小檗碱组,正常组给予基础饲料喂养,模型组及小檗碱组给予高脂饲料喂养,造模同时小檗碱组给予小檗碱(100 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌服。16周后处死大鼠并采集肝脏,检测肝组织中总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量及总抗氧化能力(T-AOC);HE、油红O染色与透射电镜观察肝脏组织学的改变;Western blot检测大鼠肝组织SIRT1、p53及乙酰化p53(Ac-p53)蛋白水平。结果:与模型组相比,小檗碱组大鼠肝组织TC、TG和MDA含量水平显著降低(P<0.05或P<0.01),而SOD活力和T-AOC显著升高(P<0.01);组织学结果也观察到小檗碱组大鼠肝脏脂质蓄积状态明显减轻;小檗碱组肝组织SIRT1蛋白表达水平较模型组显著上调(P<0.05),Ac-p53蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论:小檗碱能减轻高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝脏脂肪变性和氧化应激损伤,其作用机制可能是通过上调SIRT1蛋白的表达,从而抑制p53的乙酰化。

少阳主骨方介导p19^(Arf)-p53-p21^(Cip1)信号通路调控食蟹猴关节软骨退变的机制

目的根据"少阳主骨"理论,研究少阳主骨方介导p19Arf-p53-p21Cip1信号通路调控关节软骨退变的机制。方法通过X线选取13只膝关节退变的老年食蟹猴,随机选取1只进行病理学观察,其余食蟹猴随机分为少阳主骨方组、氨糖美辛组、生理盐水组,每组4只,连续灌胃8周后处死所有食蟹猴,取关节软骨进行病理学观察,RT-q PCR、Western blot检测关节软骨中p19Arf、p53、p21Cip1基因与蛋白的表达。结果老年食蟹猴KOA模型关节软骨符合KOA病理变化,3组食蟹猴Mankin评分少阳主骨方组7.38±0.52分、氨糖美辛组7.88±0.83分、生理盐水组8.38±0.74分,少阳主骨方组与生理盐水组间具有统计学差异(P<0.05);p19Arf、p53、p21Cip1基因与蛋白的表达少阳主骨方组<氨糖美辛组<生理盐水组,具有统计学差异(P<0.05)。结论少阳主骨方可以延缓关节软骨退变,调控p19Arf-p53-p21Cip1表达。

紫薯花青素通过调节p53-p21^(Waf1/Cip1)信号通路对辐射致造血干/祖细胞衰老的保护作用

目的:探讨紫薯花青素(Solanum tuberosum anthocyanin,STA)对辐射致造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)/造血祖细胞(hematopoietic progenitor cell,HPC)衰老起保护作用的分子机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、STA治疗组和STA预防组,利用X射线照射构建衰老细胞模型。给药后用血细胞分析仪检测各组小鼠血液指标;免疫磁性分选法分离纯化各组小鼠Sca-1^(+)HSC/HPC,并用衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-Gal)染色试剂盒对其进行染色实验并计算各组阳性率;利用HSC/HPC混合集落(colony forming unit-mixture,CFU-Mix)数评价各组细胞形成HSC/HPC集落能力与分化潜能;流式细胞术分析细胞周期;实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q PCR)检测p53和p21^(Waf1/Cip1)mRNA的表达;Western blot检测p53和p21^(Waf1/Cip1)蛋白的表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠外周血指标红细胞、白细胞、血小板数均极显著降低(P<0.01),衰老细胞阳性率极显著增加(P<0.01),Sca-1^(+)HSC/HPC形成CFU-Mix的数量极显著减少(P<0.01),G0/G1期比例极显著升高(P<0.01),G2/M和S期比例极显著降低(P<0.01),p53和p21^(Waf1/Cip1)mRNA和蛋白的相对表达量极显著增加(P<0.01),STA治疗和STA预防均可分别显著和极显著恢复模型组小鼠以上指标,其中STA预防效果更好。结论:STA可以通过调节p53-p21^(Waf1/Cip1)信号通路保护受到辐射的HSC/HPC。

头花蓼对幽门螺杆菌相关性胃炎大鼠胃组织SIRT1、p53和p21的影响

目的:观察头花蓼对幽门螺杆菌相关性胃炎(HAG)的治疗效果及对HAG胃组织中SIRT1/p53/p21信号通路的影响。方法:30只SD大鼠均分为正常对照组、模型组和药物组,正常对照组给予无菌脑心浸液肉汤灌胃,模型组和药物组大鼠给予H.pylori灌胃(1×1011CFU/L SS2000菌液1.5 m L/只)建立HAG模型,药物组HAG模型大鼠给予1.58 mg/(kg·d)头花蓼灌胃治疗,正常对照组大鼠和模型组大鼠给予等量无菌生理盐水灌胃,连续给药14 d;治疗结束4周时检测大鼠胃组织H.pylori定植量、观察各组大鼠胃黏膜组织学改变,采用Real time PCR和Western blot技术检测大鼠胃组织SIRT1、p53及p21 mRNA及蛋白表达水平。结果:正常对照组大鼠胃组织H.pylori定植量为0,模型组和药物组大鼠胃黏膜均有H.pylori定植,与模型组比较,药物组H.pylori定植量显著降低(P<0.05);正常对照组大鼠胃组织无病理形态学改变,模型组大鼠H.pylori感染后的胃黏膜腺体排列不规则,胃黏膜固有层中有较多淋巴细胞浸润,细胞浸润多呈弥漫性;药物组大鼠胃组织病理形态学改变少于模型组;与正常对照组比较,模型组病理评分显著升高,而药物组病理评分显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);H.pylori感染后,与正常对照组相比,模型组大鼠胃组织SIRT1、p53基p21 mRNA表达量增加(P<0.05);头花蓼治疗后,与模型组相比,药物组大鼠胃组织SIRT1、p53及p21 mRNA水平都明显升高(P<0.05);与正常对照组相比,模型组大鼠胃组织SIRT1、p53及p21蛋白表达均有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05);而头花蓼治疗后,与模型组相比,SIRT1、p53和p21蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:头花蓼治疗可能是通过上调SIRT1、p53和p21基因表达来发挥作用。

硫辛酸调控沉默信息调节因子1/P53通路对帕金森病动物模型的神经保护作用

目的研究硫辛酸调控沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)/P53通路对帕金森病(Parkinson's disease,PD)动物模型的神经保护作用。方法45只雄性C517BL/6J小鼠随机分成3组:对照组、模型组、硫辛酸组。模型组、硫辛酸组均采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导建立PD小鼠模型,其中硫辛酸组给予腹腔注射硫辛酸,模型组、对照组腹腔注射等体积生理盐水。电镜下观察3组小鼠中脑神经细胞超微结构,通过悬绳实验、旷场实验、转棒实验评估硫辛酸对PD小鼠运动缺陷的影响,评估小鼠纹状体多巴胺能神经元凋亡情况以及多巴胺(dopamine,DA)、3,4-二羟基苯乙酸(3,4-dihydroxyphenylacetic acid,DOPAC)表达水平,Western blotting法检测SIRT1/P53通路相关蛋白表达情况。结果3组小鼠总移动距离、平均运动速度、悬线实验评分、下落潜伏期差异有统计学意义(P<0.05),其中硫辛酸组小鼠总移动距离、平均运动速度、悬线实验评分高于模型组,低于对照组;而下落潜伏期高于对照组,低于模型组(P<0.05)。3组小鼠脑组织神经元凋亡率差异有统计学意义(P<0.05),其中硫辛酸组神经元凋亡率明显低于模型组,高于对照组(P<0.05)。3组小鼠纹状体DA、DOPAC以及SIRT1、P53表达水平差异有统计学意义(P<0.05),其中硫辛酸组小鼠DA、DOPAC、SIRT1表达水平明显高于模型组,低于对照组(P<0.05),而P53表达水平低于模型组,高于对照组(P<0.05)。结论硫辛酸可减轻PD动物模型小鼠神经元凋亡情况,从而发挥神经保护作用,其作用机制可能与上调SIRT1/P53通路有关。

莪术醇通过Sirt1-p53信号通路诱导肝星状细胞衰老减轻肝纤维化

目的探讨莪术醇对肝纤维化的治疗作用及其可能机制。方法用不同浓度莪术醇5、10、15、20、30、45、60、80和100μmol/L培养人肝星状细胞株HSC-LX224h,采用CCK-8法检测细胞活力。选择三个浓度的莪术醇10、20、30μmol/L用于后续实验。Western blot法及免疫荧光实验检测肝纤维化相关蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、α1(Ⅰ)胶原及纤连蛋白的表达;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老细胞;实时定量PCR检测衰老标志物p16、p21、高迁移率族蛋白A1(HMGA1)及端粒酶逆转录酶(TERT)mRNA表达;Western blot法检测沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(Sirt1)和p53蛋白表达。结果与莪术醇0μmol/L比较,莪术醇20、30μmol/L处理后,α-SMA、α1(Ⅰ)胶原及纤连蛋白的表达下调,SA-β-Gal染色阳性细胞增加,p16、p21、HMGA1 mRNA表达和p53蛋白表达增加,TERT mRNA表达和Sirt1蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01)。加入Sirt1激动剂SRT 17205μmol/L后,p16和p21mRNA表达降低(P<0.01)。结论莪术醇能够通过Sirt1-p53信号通路诱导肝星状细胞衰老,从而减轻肝纤维化。

lncRNA SNHG1调控铁死亡减轻HIV-1 gp120 V3环所致小胶质细胞炎症的分子机制研究

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)SNHG1调控铁死亡改善HIV-1 gp120 V3环致CHME-5人源小胶质细胞炎症的分子机制。方法:体外培养CHME-5人源小胶质细胞,设立空白组、随机肽段组、HIV-1 gp120V3环组(HIV-1 gp120组)、HIV-1 gp120+shCon组、HIV-1 gp120+SNHG1 sh2组、HIV-1 gp120+SNHG1 sh2+ferrostatin-1(Fer-1;铁死亡抑制剂)组和HIV-1 gp120+SNHG1 sh2+EX527(Sirt1抑制剂)组。随机肽段和gp120 V3环分别处理正常CHME-5细胞24 h;抑制剂预处理SNHG1 sh2细胞2 h后,gp120 V3环处理24 h。ELISA法检测细胞上清中炎症因子水平;Western blot法检测铁死亡相关蛋白[溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)]、Sirt1和p53蛋白表达水平;酶标仪检测细胞内亚铁离子(Fe^(2+))和丙二醛(MDA)含量。结果:(1)ELISA结果显示:较空白组,HIV-1 gp120组炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β表达水平显著提高(P<0.05);较HIV-1 gp120组,HIV-1 gp120+SNHG1 sh2组炎症因子表达水平显著降低(P<0.05);较HIV-1 gp120+SNHG1 sh2组,HIV-1 gp120+SNHG1 sh2+Fer-1组炎症因子表达水平显著降低(P<0.05),HIV-1 gp120+SNHG1 sh2+EX527组炎症因子表达水平显著升高(P<0.01)。(2)Western blot结果显示:较空白组,HIV-1 gp120组铁死亡相关蛋白SLC7A11和GPX4表达水平显著下调(P<0.01);较HIV-1 gp120组,HIV-1 gp120+SNHG1 sh2组SLC7A11和GPX4表达水平显著上调(P<0.01);较HIV-1 gp120+SNHG1 sh2组,HIV-1 gp120+SNHG1 sh2+Fer-1组SLC7A11和GPX4表达水平明显上调(P<0.05),HIV-1 gp120+SNHG1 sh2+EX527组SLC7A11和GPX4表达水平显著下调(P<0.01),p53表达水平显著上调(P<0.05)。(3)较空白组,HIV-1 gp120组Fe^(2+)和MDA含量显著提高(P<0.05);较HIV-1 HIV-1 gp120组,HIV-1 gp120+SNHG1 sh2组Fe^(2+)和MDA含量显著降低(P<0.01);较HIV-1 gp120+SNHG1 sh2组,HIV-1gp120+SNHG1 sh2+Fer-1组Fe^(2+)和MDA含量显著降低(P<0.05),HIV-1 gp120+SNHG1 sh2+EX527组Fe^(2+)和MDA含量显著提高(P<0.05)。结论:敲减SNHG1可减轻HIV-1 gp120 V3环介导的小胶质细胞炎症反应,其机制可能是通过Sirt1/p53信号通路调控铁死亡相关信号分子实现的。

雷公藤甲素通过调节沉默信息调节因子1/p53途径抑制肝癌HepG2细胞的增殖和迁移

目的探究雷公藤甲素对肝癌HepG2细胞增殖、迁移的影响,并初步探讨其相关作用机制。方法应用不同浓度雷公藤甲素(终浓度为50、100、200 nmol/ml)分别作用肝癌HepG2细胞后,采用CCK-8法和Transwell实验分别检测HepG2细胞增殖、迁移能力;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)和p53 mRNA表达;Western blotting检测通路相关蛋白SIRT1、p53及乙酰化p53(Ac-p53)表达。结果与空白对照组相比,各浓度作用组HepG2细胞增殖抑制率逐渐升高,呈时间-剂量依赖性(P<0.05);HepG2细胞迁移数量的剂量依赖性逐渐降低(P<0.05)。各浓度作用组SIRT1 mRNA表达与空白对照组相比呈剂量依赖性逐渐降低趋势(P<0.05),各组p53 mRNA表达较空白对照组升高(P<0.05),但组间差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,各浓度作用组SIRT1蛋白表达剂量依赖性逐渐降低,Ac-p53蛋白表达剂量依赖性逐渐升高(P<0.05);各作用组p53蛋白表达均较空白对照组升高(P<0.05),但组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论雷公藤甲素能够抑制肝癌HepG2细胞的增殖及迁移,其可能通过抑制SIRT1,调控p53的表达及乙酰化,进而调控SIRT1/p53信号通路发挥抗肿瘤作用。

Wip1在肺癌细胞中的作用机制初探

目的:检测Wip1及相关蛋白在肺癌细胞中的表达情况,探讨Wip1在肺癌发生中的作用机制。方法:Western blotting检测各种细胞(肺腺癌细胞A549、肺鳞癌细胞NCI-1299、大细胞肺癌细胞NCI-H460和正常支气管上皮细胞HBE)中Wip1、p53、p-p53、p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白的表达。结果:A549、NCI-1299和H460细胞中Wip1蛋白的表达均高于HBE细胞(P<0.05);各种肺癌细胞间Wip1蛋白的表达无明显差异(P>0.05);p-p53和p-p38 MAPK蛋白在肺癌细胞中的表达低于HBE细胞(P<0.05);肺癌细胞中Wip1表达增加,p-p38MAPK和p-p53表达降低,存在着Wip1-p38 MAPK-p53信号通路的失衡。结论:肺癌细胞(A549、NCI-1299、H460)中存在Wip1-p38 MAPK-p53信号通路的失衡。这可能是Wip1在肺癌中的致癌机制之一。

基于SIRT1/P53通路探讨补肾解郁调冲方改善PCOS合并慢性心理应激大鼠卵巢/海马功能的作用机制

目的:观察补肾解郁调冲方对多囊卵巢综合征(PCOS)合并慢性不可预知温和刺激(CUMS)大鼠卵巢/海马功能的调节作用及对SIRT1/P53通路的调控作用。方法:将40只具有正常动情周期的大鼠随机分为空白组、模型组、中药组及西药组,除空白组外均采用来曲唑联合CUMS法造模28 d,造模完成后,中药组予补肾解郁调冲方治疗,西药组予达英-35治疗。观察指标包括卵巢组织形态学、血清性激素水平等PCOS病理状态的变化,旷场试验、海马组织形态学、血清神经递质水平等慢性应激病理状态的变化,以及卵巢及海马组织内SIRT1/P53信号通路蛋白的表达情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠卵巢呈多囊样改变,促黄体生成素(LH)、游离睾酮(FT)显著升高(P<0.01);旷场试验活动次数减少(P<0.05),海马神经元细胞形态改变,血清五羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)水平降低(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,各治疗组PCOS病理状态及慢性应激病理状态均不同程度的改善。模型组卵巢及海马组织SIRT1显著降低(P<0.05),卵巢组织乙酰化P53(Acetyl-P53)水平显著升高(P<0.05);中药组卵巢及海马组织SIRT1显著升高(P<0.05),卵巢组织Acetyl-P53水平显著降低(P<0.05)。结论:补肾解郁调冲方能够改善PCOS合并CUMS大鼠卵巢/海马功能,其作用机制可能与SIRT1/P53信号通路调节卵巢及海马细胞凋亡相关。

染料木黄酮通过SIRT1/p53信号通路对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的作用

目的探讨染料木黄酮(genistein)对蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤(EBI)的影响和作用机制。方法选取成年雄性C57BL/6J小鼠156只,采用血管内穿刺的方法建立小鼠SAH模型。预实验:选取72只小鼠,设置两个时间点24、72 h,每个时间点36只。将每个时间点的小鼠随机分为6组:假手术组(Sham)、模型组(SAH)、溶剂组(SAH+Vehicle)、低剂量组(genistein 5 mg/kg)、中剂量组(genistein 15 mg/kg)、高剂量组(genistein 30 mg/kg),每组6只,分别对SAH后24、72 h的SAH分级、神经功能、脑水含量进行评估,确定药物最佳注射剂量。先选取54只小鼠随机分为3组:假手术组(Sham)、模型组(SAH)、模型+染料木黄酮组(SAH+genistein),每组18只。采用伊文思蓝检测血脑屏障通透性,Tunel染色观察神经元凋亡的情况,Western blot检测凋亡相关蛋白、血脑屏障相关蛋白的表达。而后选取30只小鼠随机分为5组:假手术组(Sham)、溶剂组(SAH+Vehicle)、模型+染料木黄酮组(SAH+genistein)、模型+染料木黄酮+溶剂组(SAH+genistein+DMSO)、模型+染料木黄酮+抑制剂组(SAH+genistein+Sirtinol),每组6只。采用Western blot检测SIRT1、p53、AC p53的蛋白表达水平。结果(1)SAH后24、72 h,中、高剂量组的出血量评分和脑水含量较溶剂组均明显下降,Garcia评分和平衡木实验评分均明显升高,其中中剂量组的作用最为显著,因此选用染料木黄酮15 mg/kg进行后续实验。(2)SAH后24 h,与模型组比较,模型+染料木黄酮组的伊文思蓝渗出量降低,ZO-1、Occludin和Claudin-5蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。Tunel染色和Western blot检测结果显示,与模型组比较,模型+染料木黄酮组神经元凋亡率降低,凋亡蛋白Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Bax表达减少,抗凋亡蛋白Bcl-2增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)SAH后24 h,与溶剂组比较,模型+染料木黄酮组SIRT1蛋白表达显著增加,p53、AC p53蛋白表达均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型+染料木黄酮+溶剂组相比,模型+染料木黄酮+抑制剂组的SIRT1蛋白表达显著下降,p53、AC p53蛋白表达显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论染料木黄酮可以通过SIRT1/p53信号通路,减轻脑水肿和神经元凋亡的作用,改善小鼠SAH后的EBI,对SAH具有显著的治疗意义。

基于SIRT1/p53介导的细胞凋亡途径探讨补阳还五汤对糖尿病周围神经病变的治疗作用及方中黄芪用量

目的:通过观察补阳还五汤调节沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/p53通路发挥对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠的神经保护作用,探讨其治疗DPN的机制和方中黄芪用量。方法:90只SD大鼠随机分为正常组,模型组,DPN加含120 g黄芪的补阳还五汤组(BYHW120组),DPN加含60 g黄芪的补阳还五汤组(BYHW60组),DPN加含30 g黄芪的补阳还五汤组(BYHW30组),DPN加α-硫辛酸组(ALA组)。除正常组外,其余各组大鼠均用高糖高脂饲料和腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病。各用药干预组分别给与相应药物持续干预12周,剂量依次为含120 g黄芪的补阳还五汤15g·kg^(-1)·d^(-1),含60 g黄芪的补阳还五汤8.75 g·kg^(-1)·d^(-1),含30 g黄芪的补阳还五汤5.625 g·kg^(-1)·d^(-1);α-硫辛酸60 mg·kg^(-1)·d^(-1)。正常组给予标准饮食。干预结束后检测机械性痛阈和神经传导速度;取L4-5背根神经节,苏木素-伊红(HE)染色、甲苯胺蓝染色观察病理形态改变,原位末端标记法(TUNEL)染色观察神经细胞凋亡情况;免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3),SIRT1/p53通路中主要蛋白SIRT1,乙酰化的p53(acetyl-p53),线粒体相关动力蛋白1(Drp1),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达。结果:与正常组比较,模型组血糖显著升高(P<0.01),神经传导速度、机械性痛阈均显著降低(P<0.01),TUNEL染色阳性细胞百分比,cleaved Caspase-3表达显著升高(P<0.01),SIRT1表达显著降低(P<0.01),acetyl-p53,Drp1,Bax/Bcl-2均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各用药干预组cleaved Caspase-3,acetyl-p53,Drp1,Bax/Bcl-2均显著降低(P<0.01);除BYHW30组外,其余用药干预组神经传导速度、机械性痛阈明显升高(P<0.05,P<0.01),TUNEL染色阳性细胞百分比明显升高(P<0.05,P<0.01);BYHW120组,ALA组SIRT1表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与BYHW120组比较,BYHW60组,BYHW30组的感觉神经传导速度、机械性痛阈及SIRT1表达明显降低(P<0.05,P<0.01),cleaved Caspase-3表达显著升高(P<0.01);BYHW30组TUNEL染色阳性细胞百分比,acetyl-p53表达显著升高(P<0.01)。结论:补阳还五汤通过调节SIRT1/p53抑制细胞凋亡,治疗DPN。其治疗作用与方中黄芪的用量有一定关系,120 g黄芪剂量的补阳还五汤抑制p53依赖的细胞凋亡的作用较60 g和30 g黄芪剂量补阳还五汤更明显。