猪源SIRT5促进O型口蹄疫病毒在PK-15细胞复制

目的探究猪源SIRT5对O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制的影响及其调控FMDV-O复制的初步机制。方法利用Western Blotting和RT-qPCR检测FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5表达情况;设计合成3对SIRT5特异性siRNA,通过Western Blotting和RT-qPCR检测SIRT5、FMDV-O蛋白水平、转录水平及病毒拷贝数的变化情况;构建SIRT5真核表达质粒转染至PK-15细胞,运用Western Blotting、RT-qPCR实验方法探究过表达SIRT5对FMDV-O复制的影响,同时利用RT-qPCR检测过表达SIRT5对SeV、FMDV-O诱导的I型干扰素刺激基因mRNA表达水平的影响。结果FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5的表达上调;siRNA干扰SIRT5抑制FMDV-O的复制;过表达SIRT5促进FMDV-O复制;过表达SIRT5降低了SeV、FMDV-O诱导的干扰素刺激基因mRNA的表达水平。结论FMDV-O感染刺激宿主SIRT5表达,而猪源SIRT5通过抑制I型干扰素刺激基因的产生进而促进FMDV-O复制。本研究为进一步探究猪源SIRT5促进FMDV-O复制的机制提供参考依据。

益气固表丸对慢性阻塞性肺疾病细胞模型线粒体中SIRT5表达的影响

目的探讨益气固表丸对慢性阻塞性肺疾病(COPD)支气管上皮样细胞线粒体中SIRT5表达的影响及对线粒体功能的调节作用。方法使用烟草提取物(CSE)刺激人支气管上皮样细胞16HBE建立COPD模型。实验设6组:正常组取人支气管上皮样细胞16HBE常规培养;COPD组取建模细胞常规培养;COPD+siRNA空转组取建模细胞,siRNA空转后培养;COPD+siRNA SIRT5组取建模细胞,siRNA转染后培养;COPD+益气固表丸组取建模细胞,加入益气固表丸含药血清培养;COPD+siRNA SIRT5+益气固表丸组取建模细胞,siRNA转染后加入益气固表丸含药血清培养。通过siRNA转染、RT-qPCR法筛选SIRT5最佳敲降靶序,显微镜下观察各组细胞形态和线粒体膜电位变化,流式细胞仪检测各组细胞线粒体膜电位及活性氧(ROS)含量,ELISA法测定各组细胞中ATP含量,RT-qPCR法检测各组细胞中SIRT5 mRNA相对表达量。结果与正常组相比,COPD各组细胞皱缩变圆,细胞密度低,细胞状态差;线粒体膜电位、ATP含量及SIRT5 mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),ROS含量明显升高(P<0.05)。与COPD组比较,COPD+siRNA SIRT5组细胞状态更差,线粒体膜电位、ATP含量及SIRT5 mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),ROS含量明显升高(P<0.05);与COPD组和COPD+siRNA SIRT5组比较,COPD+益气固表丸组和COPD+siRNA SIRT5+益气固表丸组细胞状态明显改善,线粒体膜电位、ATP含量及SIRT5 mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),ROS含量均明显降低(P均<0.05)。结论益气固表丸能够通过调控CES诱导16HBE细胞线粒体中SIRT5的表达,从而改善线粒体功能障碍,起到治疗COPD的作用。

SIRT5缺失对小鼠造血干细胞损伤恢复的影响

目的:探讨在5-FU诱导下脱酰基酶Sirtuin 5对小鼠造血干细胞损伤恢复的影响。方法:采用流式细胞术分析SIRT5缺失对小鼠造血干/祖细胞比例,胸腺T细胞的发育情况,外周血和脾脏中T细胞、B细胞和髓系细胞比例的影响。使用5-FU进行化疗损伤诱导,采用流式细胞术分析SIRT5缺失对骨髓造血干/祖细胞比例的影响,同时检测SIRT5缺失小鼠造血干/祖细胞的细胞周期和凋亡。通过流式分选进行造血干细胞体外培养,分析SIRT5缺失对造血干细胞增殖能力的影响。结果:与野生型相比,SIRT5的缺失不影响小鼠胸腺中T细胞的发育以及外周血和脾脏中T细胞、B细胞和髓系细胞比例。在骨髓中,SIRT5缺失小鼠的造血干/祖细胞比例升高。在5-FU处理的造血损伤情况下,SIRT5缺失会导致小鼠造血干细胞比例下降(P<0.05),并且SIRT5缺失小鼠的造血干/祖细胞由G_(0)期向G_(1)期激活(P<0.05),同时伴随早期凋亡率显著升高(P<0.05)。通过体外单克隆培养,与野生型相比,SIRT5缺失小鼠的造血干细胞克隆形成能力显著下降(P<0.05)。结论:SIRT5缺失导致造血干细胞体外克隆能力下降。在造血应激情况下,SIRT5缺失不利于小鼠造血干/祖细胞损伤后的恢复。

乳腺癌中SIRT5、PKM2及HK2的表达及其意义

目的探讨乳腺癌中SIRT5的表达及其与PKM2及HK2相关性及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测130例乳腺癌组织及癌旁正常组织中SIRT5、PKM2及HK2的表达,应用RT-PCR法检测60例乳腺癌组织及癌旁正常组织SIRT5、PKM2及HK2的基因表达,分析SIRT5表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果乳腺癌组织中SIRT5、PKM2及HK2的平均光密度值均显著高于癌旁正常组织(5824.4±163.1 vs 2629.9±132.3、5980.3±232.2 vs 2164.9±121.3、6005.1±197.5 vs 2196.7±155.4,P<0.01),乳腺癌组织SIRT5、PKM2及HK2 mRNA的表达均高于癌旁正常组织(P<0.01)。乳腺癌组织中SIRT5与PKM2、HK2蛋白间呈正相关(r=0.647、r=0.600,P<0.01)。SIRT5阳性率与患者年龄、淋巴结转移、TNM分期、ER及PR表达差异无统计学意义(P=0.859,P=0.248,P=0.986,P=0.489,P=0.882);与肿瘤大小、组织学分级及HER-2表达差异有统计学意义(P=0.003,P=0.001,P=0.037)。结论SIRT5的过表达对判断乳腺癌的发生、发展及预后具有一定价值,并为SIRT5可能通过有氧糖酵解影响乳腺癌的发生、发展奠定基础。

SIRT5对高糖环境下结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响及机制探讨

目的探讨Sirtuin5(SIRT5)对高糖环境下Lovo细胞增殖、凋亡及迁移的影响及可能机制。方法高糖培养基(葡萄糖含量4500 mg/L)及普通培养基(葡萄糖含量2000 mg/L)培养SIRT5高表达的人结肠癌Lovo细胞,进行慢病毒转染实验,高糖培养基及普通培养基各分为空白对照组(MOCK组,无干预)、阴性对照组(NC组,对照RNAi慢病毒转染)和SIRT5-RNAi组(KD组,SIRT5-RNAi慢病毒转染),用MTT法检测各组细胞1~5 d增殖能力变化,AnnexinⅤ检测各组细胞凋亡率,划痕实验法检测各组细胞迁移率;应用实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞SIRT5、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)及己糖激酶-2(HK2)mRNA的表达变化,Western blot检测各组上述指标的蛋白表达水平。结果高糖培养基中,KD组与NC组、MOCK组比较,3~5 d时增殖水平降低,凋亡率增加,而24 h迁移率降低(P<0.05),且SIRT5、mTOR、HIF-1α、PKM2及HK2 mRNA及蛋白的相对表达水平均明显降低(P<0.05)。普通培养基中,KD组与NC及MOCK组比较,1~4 d时增殖水平差异无统计学意义,5 d时增殖水平降低(P<0.05),24 h凋亡率差异无统计学意义。结论高糖环境下,SIRT5可能通过影响糖代谢关键酶HK2及mTOR/HIF-1α/PKM2信号通路调控糖酵解,从而促进结肠癌的发生、发展。

SIRT5基因在苏姜猪组织中的表达分布研究

为探究 SIRT5在苏姜猪组织中的表达情况,实验选取 85 kg左右的苏姜猪 6头(公、母各半),采用qRT-PCR、ELISA 和免疫组织化学方法,对公猪 11 个组织和母猪 14 个组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠、小肠、腹脂肪、背最长肌、腿肌、胃以及母猪的卵巢、子宫、输卵管)中 SIRT5 mRNA 转录、翻译表达与蛋白定位分布进行研究。结果表明:测定组织中均检测到 SIRT5表达,表明 SIRT5基因在苏姜猪组织中具有表达广泛性;公猪心脏和肝脏组织中 SIRT5 mRNA 表达量显著高于其他组织(P<0.05),母猪小肠组织中 SIRT5 mRNA表达量显著高于其他组织(P<0.05);母猪 SIRT5 mRNA转录水平与蛋白表达水平间呈极显著线性相关(P<0.01),表明SIRT5在转录和翻译水平具有表达一致性,而公猪则未呈显著线性相关(P>0.05);免疫组化结果显示,SIRT5免疫阳性颗粒主要分布于肝细胞、脾脏的红髓细胞、肺泡上皮细胞、近曲小管内皮细胞、胃和肠组织腺细胞、卵泡颗粒细胞、黏膜层细胞以及多种脏器的肌细胞质中。

线粒体蛋白SIRT5调节代谢性蛋白翻译后修饰作用研究进展

SIRT5是沉默信息调节因子Sirtuin蛋白家族的亚型之一,位于线粒体内,具有去乙酰化、去琥珀酰化、去丙二酰化以及去戊二酰化等功能,参与包括能量代谢、物质代谢以及细胞氧化应激及凋亡等多个代谢过程的调控,阐明SIRT5对细胞内主要生理代谢过程的影响。

去酰化酶SIRT5的研究进展

长寿因子5(Sirtuin 5),也叫SIRT5,是长寿因子(Sirtuins)家族成员之一。除具有去乙酰化酶活性外,还具有很强的去琥珀酰化、去丙二酰基化及去戊二酰基化活性。现已明确的SIRT5的底物仅有十余种,通过对不同底物发挥相同的酶活性,或对同一底物发挥不同的酶活性,参与调控葡萄糖氧化、脂肪酸氧化、氨解毒等物质代谢和活性氧自由基(ROS)清除、抗凋亡、炎性反应等多种生命活动。SIRT5表达异常与肿瘤的发生及发展密切相关,但其作用尚无定论。SIRT5可促进肿瘤增殖、转移、耐药及代谢重编程,发挥促癌基因作用;也可抑制肿瘤细胞生长和凋亡,发挥抑癌基因作用。此外,SIRT5异常还与肥厚性心肌病和心肌梗塞等心血管疾病,及帕金森病和阿尔兹海默症等神经代谢性疾病密切相关。本文将从SIRT5的结构与调控、酶活性与生物学功能、及SIRT5与疾病的关系等方面进行综述,以全面了解SIRT5的研究现状。

SIRT5、PKM2及HK2在结肠癌组织中的表达及意义

目的:检测结肠癌中SIRT5、M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PKM2)及己糖激酶-2(hexokinase2,HK2)的表达情况并探讨其表达相关性。方法:采用免疫组织化学染色方法检测130例结肠癌患者癌组织中SIRT5、PKM2及HK2的表达情况,分析其表达相关性及其与结肠癌发生的关系。结果:结肠癌组织中SIRT5、PKM2及HK2的平均光密度值均高于癌旁组织(P<0.05);结肠癌组织中SIRT5与PKM2、HK2蛋白间呈正相关(P<0.05)。结论:SIRT5、PKM2、HK2的过表达对判断结肠癌的发生发展及预后具有一定价值,且SIRT5可能通过调控有氧糖酵解影响结肠癌的发生发展。

去乙酰化酶SIRT5的原核表达及多克隆抗体的制备

目的克隆小鼠的Sirt5基因,及制备SIRT5多克隆抗体。方法提取小鼠肝细胞总RNA进行RT-PCR,PCR法扩增Sirt5基因,将此基因克隆至pET-28a载体,转化E.coli BL21(DE3),经异丙-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,利用Ni 2+-NTA亲和层析柱纯化;纯化的目的蛋白免疫Bal/c小鼠后,收获血清并鉴定。结果成功构建了Sirt5原核表达载体,并能在宿主菌E.coli BL21(DE3)中高效表达;利用纯化的蛋白制备了理想的多克隆抗体。结论利用分子克隆技术,获得了高纯度的SIRT5蛋白并制备了多克隆抗体,为进一步研究奠定了基础。

Sirt5调控STAT3/Nanog信号通路抑制肝癌细胞的增殖和迁移

目的研究Sirt5对人肝癌细胞系细胞增殖及迁移能力的影响及其机制。方法RT-PCR及Western Blot法检测Sirt5基因在正常肝细胞L02,HCC细胞系HepG2、Huh7、HepG3中的表达水平。HepG2及Huh7细胞过表达Sirt5,CCK-8法和细胞迁移实验检测Sirt5过表达对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。采用Western Blot法检测Sirt5过表达后HepG2细胞内STAT3蛋白活化水平和Nanog蛋白表达。用STAT3激活剂Colivelin预处理细胞1.5 h后过表达Sirt5,CCK-8法检测细胞增殖和迁移能力,并用Western Blot检测STAT3磷酸化水平。结果Sirt5在HepG2、Huh7、HepG33种细胞中均低表达,其中以HepG2细胞中表达水平最低。过表达Sirt5可抑制HepG2细胞增殖和迁移能力。Western Blot检测发现过表达Sirt5后可显著抑制STAT3的磷酸化和Nanog的水平,证明Sirt5可抑制STAT3/Nanog信号通路。且Sirt5抑制细胞增殖和迁移的能力可被STAT3激活剂Colivelin阻断。结论Sirt5可通过抑制STAT3/Nanog信号通路抑制HepG2细胞增殖。

Sirtuin 4和Sirtuin 5蛋白在代谢性疾病与肿瘤中的研究进展

沉默调节蛋白(Sirtuin,Sirt)是一类具有多种代谢调节酶活性的蛋白质家族,Sirtuin家族成员共有7个(Sirt 1～7),其成员中Sirt 4蛋白具有NAD依赖的蛋白脂酰胺酶、ADP-核糖体转移酶和赖氨酸去酰基酶的活性,而Sirt 5蛋白具有NAD-依赖的赖氨酸去丙二酰酶、去琥珀酰酶和去戊二酰酶的活性。近年来研究发现,Sirt 4和Sirt 5广泛参与到细胞生存、衰老和代谢等生物学过程中,在生物体应激反应、炎症反应、肿瘤发生和能量代谢等众多生物学过程中扮演着重要角色,并在癌症、糖尿病、肥胖、帕金森和阿尔兹海默病等疾病的临床治疗方面具有一定潜力。本文归纳了Sirt 4和Sirt 5在代谢途径中的重要作用,并归纳了其与代谢性疾病及癌症的关系,希望能够为开发相关癌症的靶向药物、临床治疗提供新思路。

结直肠癌中SIRT5的表达与^(18)F-FDG PET/CT标准化摄取值的关系及机制研究

目的:检测结肠癌中沉默调节蛋白5(Sirtuin 5,SIRT5)表达情况并探讨其与18氟-脱氧葡萄糖(;F-fluorodeoxyglucose,^(18)F-FDG)最大标准化摄取值(the maximum standardized uptake value,SUVmax)、葡萄糖转运蛋白1(glucose trans porter-1,GLUT1)表达以及患者临床参数的关系。方法:回顾性分析78例术前行;F-FDG正电子发射型计算机断层扫描(positron emission tomography/computed tomography,PET/CT)的结直肠癌患者,免疫组化分析SIRT5、GLUT1蛋白表达,与SUVmax、临床参数、预后指标做相关分析。使用CRISPR/Cas9技术敲除SIRT5,研究其对结直肠癌细胞糖酵解以及缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1-alpha,HIF1α)转录活性的影响。结果:结直肠癌肿瘤组织中SIRT5较癌旁组织高表达(P <0.01),且高表达者预后欠佳(P <0.01)。结直肠癌低分化者SUVmax和SIRT5表达明显高于中高分化者(18.18±4.06 vs. 12.72±2.60,P <0.01;2.14±0.74 vs. 1.10±0.77,P <0.01)。结直肠癌患者SIRT5表达与SUVmax呈正相关(Spearman相关系数=0.648,P <0.05)。敲除SIRT5基因,抑制肿瘤细胞^(18)F-FDG摄取、GLUT1表达和HIF1α转录活性。结论:SIRT5可通过HIF1α/GLUT1促进结直肠癌^(18)F-FDG的摄取,SIRT5可能是结肠癌治疗的潜在靶点。

猪Sirt5基因的克隆及其腺病毒载体的构建和鉴定

为了从猪脑中克隆得到Sirt5基因,并构建腺病毒载体,提取长白猪脑组织总RNA,利用RT-PCR和PCR扩增得到Sirt5基因。再将此基因克隆至穿梭载体上,构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttle-IRES-Sirt5。经酶切线性化,电击转化已含骨架载体pAdEasy-1DNA的BJ5183+感受态菌,得到重组腺病毒质粒Ad-Sirt5。重组腺病毒质粒经酶切线性化鉴定。结果本试验获得的Sirt5基因与NCBI公布序列一致。利用细菌同源重组技术构建重组腺病毒载体,经酶切鉴定正确。表明本试验成功克隆得到Sirt5基因,并成功构建Sirt5基因的腺病毒载体。

RIP140通过抑制SIRT5表达介导心肌细胞能量代谢紊乱（英文）

【目的】探讨去琥珀酰化酶Sirtuin5(SIRT5)对受体相互作用蛋白140(RIP140)诱导的心肌线粒体能量代谢紊乱的影响。【方法】利用腺病毒感染心肌细胞诱导RIP140过表达,利用质粒转染诱导SIRT5基因过表达,si RNA干扰敲低RIP140、SIRT5表达;q RT-PCR和Western blot检测SIRT5、RIP140的表达变化;q RT-PCR检测线粒体编码基因的表达情况,TMRE染色法评估线粒体膜电位,试剂盒检测细胞耗氧和ATP生成情况。所有数据均来自至少3次的独立实验。【结果】过表达RIP140明显抑制SIRT5的表达(P<0.05);敲低内源性RIP140能增加SIRT5的表达(P<0.05)。过表达RIP140亦能诱导线粒体蛋白高度琥珀酰化,抑制SIRT5的去琥珀酰化酶活性。除此,RIP140能诱导线粒体功能紊乱和能量代谢损伤作用,表现为线粒体编码基因的表达抑制(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞耗氧和ATP合成减少(P<0.05),而过表达SIRT5能抑制RIP140介导的上述能量代谢损伤(P<0.05)。此外,SIRT5受RIP140的负性调控作用依赖于过氧化物增殖体激活受体α(PPARα)。【结论】RIP140通过抑制SIRT5诱导心肌细胞线粒体功能紊乱和能量代谢损伤。

SIRT5通过去琥珀酰化SHMT2促进肿瘤细胞增殖

一碳代谢通路中多种代谢酶与肿瘤的发生、发展都有密切关系,它们都可以作为肿瘤治疗的潜在靶点.丝氨酸羟甲基转移酶2(SHMT2)作为其中的关键代谢酶之一,对于肿瘤细胞的生长增殖具有非常重要的意义.然而SHMT2参与调解肿瘤细胞代谢的具体作用机制目前尚不明确.本研究发现SIRT5能去琥珀酰化SHMT2,提升其酶活,并鉴定到第181位赖氨酸是SHMT2的主要琥珀酰化位点.同时,本文还发现高浓度的甲氨蝶呤(MTX)能通过抑制SIRT5的表达,提升SHMT2琥珀酰化水平,达到抑制肿瘤细胞增殖的目的,这也为通过抑制SIRT5阻断肿瘤生长提供了新的理论支撑.

SIRT5抑制CD4^(+)T淋巴细胞缓解类风湿性关节炎骨破坏

目的研究Sirtuin 5(SIRT5)对类风湿性关节炎骨破坏的影响和机制。方法收集类风湿性关节炎患者血液样本,用qPCR对SIRT家族各基因表达进行分析;建立佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AIA)大鼠模型,在不同时间收集外周血,且在处死大鼠后收集滑膜组织,通过检测外周血及滑膜组织中SIRT5的表达以及足肿胀,并进行炎症评分及CT评价。最后局部注射SIRT5腺病毒过表达SIRT5,通过流式检测淋巴细胞比例,以及CT检测骨破坏确定SIRT5在AIA大鼠关节炎模型中的作用。结果在本研究中,我们发现SIRT5基因在RA患者和完全佐剂诱导的关节炎大鼠中均显著下调。此外,动物实验发现,在踝关节注射腺病毒介导的SIRT5过表达显著改善AIA大鼠的足肿胀体积、关节炎评分和CD4^(+)T淋巴细胞比例。结论以上结果均说明SIRT5具有潜在的抗关节炎和免疫调控作用。

SIRT5通过调控ALDH5A1的琥珀酰化促进人乳腺癌细胞的增殖

目的利用多种数据库分析SIRT5在泛癌中的表达及与预后的关系并探究SIRT5通过醛脱氢酶5家族成员A1(ALDH5A1)调控乳腺癌增殖的机制。方法使用cBioPortal、TNMplot、GEPIA与The Kaplan-Meier Plotter等数据库分析SIRT5在多种肿瘤中的基因改变、差异表达及与预后的相关性。利用质谱分析与SIRT5相互作用的蛋白质。使用Metascape对相互作用蛋白质组进行通路富集,并与酰化组学结果进行共分析。通过内外源免疫沉淀(IP)确定SIRT5与ALDH5A1间的相互作用。过表达或敲降SIRT5检测ALDH5A1的酰化水平与酶活改变。通过细胞增殖与克隆实验确定SIRT5与ALDH5A1对乳腺癌增殖的影响。结果SIRT5在乳腺癌等多种肿瘤中高表达并与不良预后成正相关(P<0.05)。SIRT5相互作用蛋白与酰化组学结果存在多个重叠,并主要富集到氨基酸代谢等代谢通路上。SIRT5与ALDH5A1存在相互作用。SIRT5可通过促进ALDH5A1的去琥珀酰化从而提高其酶活,进而促进乳腺癌细胞增殖(P<0.05)。结论SIRT5在肿瘤中的功能可能具有异质性,在乳腺癌中可通过ALDH5A1发挥促癌作用,为后续的临床靶向治疗提供理论基础。

SIRT5通过调控G6PD促进结肠癌细胞的糖代谢及增殖

目的:探讨SIRT5对结肠癌细胞糖代谢和增殖的作用及其可能的作用机制,以及SIRT5、G6PD在结肠癌组织中的表达情况。方法:Western blot法检测SIRT5蛋白在结肠癌细胞系HCT116、HT29中的表达水平,构建SIRT5基因过表达及siRNA沉默载体分别转染到SIRT5低表达与SIRT5高表达结肠癌细胞系,葡萄糖氧化酶法、比色法分别检测培养液中葡萄糖、乳酸的含量;CCK-8实验检测细胞活力;克隆形成实验检测细胞增殖能力。RT-PCR与Western blot法分别检测SIRT5对G6PD mRNA及蛋白表达的调控;免疫组织化学法检测结肠癌组织中SIRT5、G6PD的表达情况。结果:沉默SIRT5后,细胞培养液中葡萄糖的浓度明显升高、乳酸的浓度明显降低,细胞的活性和增殖能力明显减弱;过表达SIRT5后,细胞培养液中葡萄糖的浓度明显降低、乳酸的浓度明显升高,细胞的活性和增殖能力明显增强。SIRT5正向调控G6PD的基因表达与单独转染si-SIRT5相比,共转染si-SIRT5与G6PD质粒恢复了结肠癌细胞的糖代谢及增殖能力;SIRT5、G6PD在结肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织。结论:SIRT5、G6PD在结肠癌组织中高表达,SIRT5通过调控G6PD促进结肠癌细胞糖代谢和增殖。

SIRT5通过促进IDH2去琥珀酰化增加COPD小鼠肺上皮细胞的抗氧化能力

目的探讨去乙酰化酶5(SIRT5)对慢性阻塞性肺病(COPD)中肺上皮细胞抗氧化能力的调节作用及机制。方法体外实验:肺上皮细胞MLE-12经H_(2)O_(2)、SIRT5过表达质粒(SIRT5-OE)或空载体(EV)处理后分为control组、H_(2)O_(2)组、SIRT5-OE组、EV组、H_(2)O_(2)+SIRT5-OE组、H_(2)O_(2)+EV组。在体实验:用烟草烟雾(CS)和脂多糖(LPS)诱导小鼠COPD模型,并分为正常组(小鼠不进行任何处理)、CS组(模型小鼠)、CS+saline组(生理盐水静脉注射到模型小鼠中)、CS+rhSIRT5组(将rhSIRT5静脉注射到模型小鼠中)、CS+rhSIRT5+SIRT5 inhibitor 1组(将rhSIRT5和SIRT5抑制剂共同注射到模型小鼠中)。按照说明书检测各组肺细胞/肺组织中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平。免疫沉淀法和蛋白免疫印迹法检测柠檬酸脱氢酶2(IDH2)的琥珀酰化水平和SIRT5蛋白表达。结果与EV组相比,SIRT5-OE组抑制IDH2的琥珀酰化水平降低,SIRT5蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与control组相比,H_(2)O_(2)组中IDH2的琥珀酰化、凋亡率、MDA、ROS的水平都增加/高(P<0.05)。与H_(2)O_(2)+EV组相比,H_(2)O_(2)+SIRT5-OE组的琥珀酰化和细胞凋亡率降低,且SOD和GSH-Px水平增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常组相比,CS组肺组织中IDH2的琥珀酰化、MDA、ROS的水平均增加/高(P<0.05)。与CS+saline组相比,CS+rhSIRT5组中IDH2的琥珀酰化减少,而SOD和GSH-Px水平均增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与CS+rhSIRT5组相比,CS+rhSIRT5+SIRT5 inhibitor 1组中MDA、ROS的水平均增加,SOD、GSH-Px水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SIRT5通过促进IDH2去琥珀酰化增加COPD小鼠肺上皮细胞的抗氧化能力。