genP基因在依纽小单孢菌中表达的分析

庆大霉素生物合成过程中的genP基因和西索米星生物合成过程中的sisI基因属同工异源酶基因,均能催化绛红糖胺3′,4′-双脱羟基反应。本研究借助组合生物合成,探索绛红小单孢菌中的genP基因能否在依纽小单孢菌中表达。首先构建genP基因替换sisI基因的同源重组质粒pKPI4,并经接合转移将其导入依纽小单孢菌TS388中,最后再通过影印筛选及PCR鉴定获得genP基因替换sisI基因的工程菌PTI886。将野生型菌株TS388、sisI基因缺失突变株TI1102(TS388△sisI)及工程菌PTI886在同等条件下进行发酵,提取其代谢产物并经薄层层析及质谱分析。结果表明,突变株TI1102不能合成西索米星,而工程菌PTI886仍能继续合成西索米星,且代谢产物组分与野生型菌株TS388相比无明显变化,说明genP基因能在依纽小单孢菌中表达。本研究揭示了同工异源酶基因异源表达的可行性,可为今后不同微生物异源基因组合的研究提供借鉴。

单方与复方给药后洋川芎内酯Ⅰ在大鼠体内的药动学比较研究

目的:建立LC-MS法测定大鼠血浆洋川芎内酯I(senkyunolide Ⅰ,SI)的浓度,比较活络效灵丹加减方(HLXL)和川芎单味药材提取物中SI在大鼠体内的药代动力学参数有无显著性变化,评价HLXL提取物中其他成分对SI药动学的影响。方法:将12只大鼠随机分成2组,按含SI计4.53 mg.kg-1分别灌胃给予HLXL提取物和川芎提取物,不同时间点采血后进行LC-MS分析,测定血浆SI浓度,采用DAS 2.0软件对主要药动学参数进行计算,并用SPSS 16.0软件对其进行独立样本t-检验和非参数t-检验分析。结果:SI在6.750～675.0μg.L-1线性关系良好,最低检测限为6.750μg.L-1。大鼠灌胃HLXL提取物和川芎提取物的药-时曲线均符合二房室模型,测得SI的Cmax,AUC0-24 h和CL有显著性差异,其他参数均无显著性差异。结论:该实验建立的LC-MS测定法专属、准确、灵敏,适用于HLXL提取物和川芎提取物中SI的药动学研究。实验结果表明,HLXL中其他药材对SI的吸收有较大影响。