shRNA-SIVA1慢病毒载体的构建及其对胃癌细胞耐药性的影响

目的构建shRNA⁃SIVA1慢病毒表达载体,研究其对胃癌SGC⁃7901/DDP细胞耐药性和增殖的影响以及可能的机制。方法根据GenBank数据库提供的SIVA1基因序列,设计3条SIVA1靶点干扰序列;引物退火形成双链DNA,与经过双酶切的线性化GV493载体连接并转化;在293T细胞中进行病毒包装并测定病毒滴度;将重组慢病毒转染人胃癌SGC⁃7901/DDP细胞,qRT⁃PCR和Western blot检测细胞SIVA1 mRNA和蛋白表达水平,CCK⁃8法检测细胞对顺铂(DDP)的敏感性变化以及细胞增殖的情况,Western blot检测细胞Bcl⁃2和Bcl⁃xL蛋白表达情况。结果测序结果显示,设计的干扰序列正确插入GV493载体,成功构建shRNA⁃SIVA1重组载体;慢病毒载体在293T细胞完成包装,病毒滴度为2×109 TU/mL;qRT⁃PCR和Western blot结果显示,慢病毒载体转染SGC⁃7901/DDP细胞后,能显著降低SIVA⁃1的mRNA和蛋白表达水平(P<0.005);CCK⁃8实验结果显示,沉默SIVA1后,细胞对DDP的敏感性显著下降(P<0.005),同时细胞的增殖活性显著升高(P<0.01),并且凋亡抑制分子Bcl⁃2和Bcl⁃xL的蛋白表达增加。结论成功构建了靶向人SIVA1基因的shRNA⁃SIVA1慢病毒表达载体,干扰胃癌细胞的SIVA1表达可增强细胞对DDP的抵抗并促进细胞增殖活性,这一现象可能与凋亡抑制分子Bcl⁃2和Bcl⁃xL的表达升高有关。

SIVA1基因在胃癌组织中的表达变化及与化疗药物敏感性的关系

目的观察SIVA1基因在胃癌组织中的表达变化,并分析其与化疗药物对胃癌组织抑制率的关系。方法采用免疫组化法检测60例份胃癌及60例份胃正常组织中SIVA1,采用体外组织三维培养法检测顺铂(CDDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、多柔比星(ADM)对30例份胃癌组织(以SIVA1表达强度为中位值分为相对高表达组14例份和相对低表达组16例份)的抑制率。结果胃癌和胃正常组织中SIVA1表达阳性率分别为25.0%(15/60)、88.3%(53/60),两者比较,P<0.05。CDDP、5-FU、ADM对胃癌组织的抑制率分别为28.81%、28.20%、25.45%;以SIVA1表达强度为中位值将30例份胃癌组织分为相对高表达组(14例份)和相对低表达组(16例份),CDDP、5-FU、ADM对相对低表达组的抑制率分别为23.40%±1.91%、30.94%±3.94%、29.20%±2.23%,三种药物对相对高表达组的抑制率分别为34.59%±2.11%、26.71%±5.29%、25.44%±2.39%,两组CDDP抑制率比较,P均<0.05。结论SIVA1在胃癌组织中呈低表达,HDRA法能有效检测化疗药物在体外对胃癌组织的抑制效应,胃癌组织中SIVA1表达与CDDP对胃癌组织的抑制率呈正相关,SIVA1可作为评价CDDP对胃癌治疗效果的指标。

促凋亡蛋白Siva1的作用机制及其在肿瘤中的研究进展

Siva1是凋亡诱导因子Siva编码的一种选择性剪接体,其不仅可以与多种受体如CD27、Bcl-2或Bcl-xL、c-Abl、LPA2结合而发生相互作用,并通过调控ARF-MDM2-p53通路、抑制NF-κB的活性和酪氨酸磷酸化等方式促进细胞的凋亡,而且还可以通过抑制微管解聚蛋白Stathmin的活性和稳定微管来抑制上皮-间质细胞转化和肿瘤细胞转移。此外,Siva1可作为肿瘤患者顺铂化疗的增效剂。当今,恶性肿瘤已严重危害人类健康,其发病人数正逐年增加,故对Siva1分子机制的深入研究,必将为肿瘤的靶向治疗提供新的思路和广阔的应用前景。因此,本文就目前Siva1在国内外的相关研究进展作一综述。