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高效液相色谱-质谱技术在蛋白质组学中的应用 被引量:1
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作者 刘威 翁凌霄 +1 位作者 高明霞 张祥民 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期601-612,共12页
蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究... 蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究从肽段分离,延伸到蛋白质和蛋白质复合物的分离,随着分析物的分子质量不断增大,其结构和组成复杂性也持续增加,分子特性也发生改变。面对不同的蛋白质组学研究对象,选择不同的分离模式、分离条件以及固定相参数是进行深度蛋白质组学研究的关键。本文综述了实验室常用的液相色谱分离模式,包括反相色谱(RPLC)、亲水相互作用色谱(HILIC)、疏水相互作用色谱(HIC)、离子交换色谱(IEC)和体积排阻色谱(SEC),以及其不同的组合模式与质谱联用在自下而上(bottom-up)分析、自上而下(top-down)分析、蛋白-蛋白相互作用分析中应用的研究。具体分析了色谱流动相与被分析对象之间的兼容性问题、色谱流动相与质谱兼容性问题,以及多维色谱中不同色谱模式之间流动相的兼容性问题。重点关注存在不兼容问题时研究者所提出的解决方案。此外,本文还评述了HPLC-MS结合样本前处理的方法在外泌体和单细胞蛋白质组学中的应用研究。总之,文章聚焦于近年来HPLC-MS技术在蛋白质组学中的研究进展,旨在为未来蛋白质组学领域的研究提供参考。 展开更多
关键词 高效液相色谱 反相液相色谱 亲水相互作用色谱 疏水作用色谱 离子交换色谱 体积排阻色谱 蛋白质组学
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畜禽粪污异位发酵床处理残渣组成特征研究
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作者 刘庆玉 美英 +4 位作者 王宪革 孙越 王玉欣 郑敬 何小松 《环境科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期2030-2041,共12页
异位发酵床是处理畜禽粪污的常用技术,目前针对异位发酵床的研究基本是在半年以内的短期跟踪,对于一年以上异位发酵床处理后残渣的组成特征及利用潜力仍不清楚,限制了发酵后残渣的处理和资源化利用。本研究选择浙江省3个典型养猪场,采... 异位发酵床是处理畜禽粪污的常用技术,目前针对异位发酵床的研究基本是在半年以内的短期跟踪,对于一年以上异位发酵床处理后残渣的组成特征及利用潜力仍不清楚,限制了发酵后残渣的处理和资源化利用。本研究选择浙江省3个典型养猪场,采集了畜禽粪污经异位发酵床处理半年(S1组)、1年(S2组)及2年(S3组)剩下的残渣,采用微生物高通量测序、色谱分离结合常规理化指标测试,对异位发酵床发酵剩余残渣中的微生物、无机物、重金属及有机物组成和含量进行测定,并据此评估了残渣的土地利用潜力。结果表明:长期运行下异位发酵床物料微生物趋于一致,S2组和S3组具有相似的微生物群落组成。发酵过程每日的翻抛有利于粪污中氮的转化,三组样品中溶解态NH_(4)^(+)含量均显著低于NO_(3)^(-)和NO_(2)^(-)含量;经长时间发酵,有机物降解后,无机物累积,残渣中无机盐含量增加,但其总电导率均低于3000μS/cm,处于植株安全生长范围;畜禽粪污的长期投加,有机物降解为可挥发的二氧化碳和水,重金属却只能被保留在发酵床中,不断富集和累积,但残渣中重金属含量仍低于《有机肥料》(NY/T525-2021)浓度限值,满足有机肥制作标准。三维荧光光谱及色谱分析显示,S1组和S2组残渣中腐殖质组分种类多,且含有多种小分子有机组分,而发酵2年的S3组残渣中腐殖质种类少、分子量大、结构更加单一稳定。本研究揭示了畜禽粪污长期异位发酵床处理后残渣组成特征及土地利用潜力,即经异位发酵床长期处理的畜禽粪污部分指标无法满足《畜禽粪污还田技术规范》(GB/T 25246-2010),因此无法直接还田施用,但能满足《有机肥料》(NY/T 525-2021),可制成有机肥料后还田,这为长期异位发酵床残渣的后续处理和资源化利用提供了参考。 展开更多
关键词 异位发酵床 微生物 溶解性有机质(DOM) 分子量排阻色谱 三维荧光光谱
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碳纳米管的色谱纯化法 被引量:5
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作者 蔡瑛 严志宏 +2 位作者 字敏 丁惠 袁黎明 《化学进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1391-1395,共5页
目前碳纳米管的纯化方法很多,有物理法、化学法和物理化学综合法等,然而这些方法仍不能得到高纯度的碳纳米管。色谱法分离纯化碳纳米管已成为近年来研究的热点,该法不仅能高效分离得到高纯度的碳纳米管,而且还能达到长短分离,具有重要... 目前碳纳米管的纯化方法很多,有物理法、化学法和物理化学综合法等,然而这些方法仍不能得到高纯度的碳纳米管。色谱法分离纯化碳纳米管已成为近年来研究的热点,该法不仅能高效分离得到高纯度的碳纳米管,而且还能达到长短分离,具有重要的学术和实际意义。已报道的色谱纯化碳纳米管主要有空间排阻色谱以及毛细管电泳法,本文对上述色谱法纯化碳纳米管做了详细介绍。 展开更多
关键词 碳纳米管 色谱 毛细管电泳 空间排阻色谱
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体积排阻色谱法测定低分子量肝素抗凝血因子Xa的活性 被引量:12
4
作者 张倩倩 康经武 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期684-690,共7页
发展了一种基于体积排阻色谱测定低分子量肝素(LMWH)抗凝血活性的方法。利用肝素与抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)结合后可增强ATⅢ对凝血因子Xa(FXa)抑制作用的原理,通过测定加入LMWH后FXa水解其生色底物产生对硝基苯胺(pNA)这一反应的抑制程度确定L... 发展了一种基于体积排阻色谱测定低分子量肝素(LMWH)抗凝血活性的方法。利用肝素与抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)结合后可增强ATⅢ对凝血因子Xa(FXa)抑制作用的原理,通过测定加入LMWH后FXa水解其生色底物产生对硝基苯胺(pNA)这一反应的抑制程度确定LMWH的活性。首先将含有一定浓度LMWH的缓冲溶液与ATⅢ溶液混合,然后依次加入FXa和生色底物,分别孵育一段时间。底物被FXa水解,产生游离的pNA。体积排阻色谱可将小分子产物pNA与其他大分子分离开,因而可以在pNA的最大吸收波长下得到高灵敏度的测定,并且不再受其他成分的干扰。该方法重复性好,灵敏度高,极大地减少了样品的消耗量,降低了成本,并且还可进行各种复杂样品(如血浆)中LMWH抗FXa活性的监测。 展开更多
关键词 体积排阻色谱 抗凝血因子 Xa 低分子量肝素
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体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法同时测定印度芥菜(Brassica Juncea)中镉铜锌形态 被引量:5
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作者 杨红霞 刘崴 +3 位作者 李冰 魏巍 张惠娟 陈登云 《岩矿测试》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期9-13,共5页
建立了体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法同时测定印度芥菜中镉、铜、锌形态分析方法。为了防止巯基化合物氧化反应的发生,样品采取液氮保护并在-70℃保存,样品分析全流程采取氮吹防氧化措施。在镉、铜、锌胁迫下,诱导产生... 建立了体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法同时测定印度芥菜中镉、铜、锌形态分析方法。为了防止巯基化合物氧化反应的发生,样品采取液氮保护并在-70℃保存,样品分析全流程采取氮吹防氧化措施。在镉、铜、锌胁迫下,诱导产生植物螯合肽(PCs)。在叶片和根部均检测到3种元素的4种形态,植物螯合肽(PC)3-Cd(Cu,Zn)、植物螯合肽(PC)2-Cd(Cu,Zn)、谷胱甘肽(GSH)-Cd(Cu,Zn)、半胱胺酸(Cys)-Cd(Cu,Zn)及其在植物体内的分布规律。结合植物不同部位Cd、Cu、Zn分布规律初步推断,Cd、Cu、Zn在与GSH及Cys的结合上存在竞争。 展开更多
关键词 形态分析 印度芥菜 体积排阻高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法
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Sephadex G-50纯化生姜蛋白酶的研究 被引量:3
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作者 杜新永 唐晓珍 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期303-305,共3页
采用Sephadex G-50为填料对粗提生姜蛋白酶进行了纯化,充分利用了尺寸排阻层析简便、高效、重复性好的特点,以酶得率、纯化倍数、柱效分析等参数为指标,研究了凝胶柱床高度、洗脱速度、上样量等条件对纯化效果的影响。确定了最佳纯化方... 采用Sephadex G-50为填料对粗提生姜蛋白酶进行了纯化,充分利用了尺寸排阻层析简便、高效、重复性好的特点,以酶得率、纯化倍数、柱效分析等参数为指标,研究了凝胶柱床高度、洗脱速度、上样量等条件对纯化效果的影响。确定了最佳纯化方案为:柱床高度50cm,上样量3mL粗酶,流速45cm/h,洗脱液总用量150mL。纯化后的生姜蛋白酶比活性是姜汁的4.192倍,粗酶的2.113倍,而且还去除了色素、不溶物等杂质,纯化效果极佳。 展开更多
关键词 生姜蛋白酶 SEPHADEX G^50(葡聚糖凝胶) 尺寸排阻层析(sec) 纯化
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灌喂氯化汞大鼠组织中汞结合金属硫蛋白的色谱/质谱联用表征研究 被引量:1
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作者 黄志勇 沈金灿 +2 位作者 庄峙厦 王小如 黎先春 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期641-645,共5页
通过测定大鼠脏器组织中汞的总量、金属硫蛋白(MTs)含量及利用尺寸排阻色谱(SEC)与电感耦合等离子体质谱(ICP MS)联用技术,分析了灌喂HgCl2大鼠脏器组织中汞与MTs的积累量及金属与MTs的结合形态。结果表明,灌喂HgCl2大鼠各脏器中汞的积... 通过测定大鼠脏器组织中汞的总量、金属硫蛋白(MTs)含量及利用尺寸排阻色谱(SEC)与电感耦合等离子体质谱(ICP MS)联用技术,分析了灌喂HgCl2大鼠脏器组织中汞与MTs的积累量及金属与MTs的结合形态。结果表明,灌喂HgCl2大鼠各脏器中汞的积累量显著高于其相应的对照组,特别是在肾、肝和睾丸中汞的含量较高,表明此3个脏器受汞的危害最大。MTs的含量水平说明当大鼠脏器受汞污染时,肌体中的MTs将被大量诱导产生以对重金属进行解毒。通过SEC ICP MS联用技术获得了组织中的金属与MTs的结合形态,其中被汞污染的大鼠的肾脏、肝脏中Hg MTs的诱导产生量比对照组显著增加,与此同时,染汞组织中Cu MTs的组分也相应增加,这进一步表明了MTs在染汞大鼠肾脏中起着对有毒重金属汞的解毒和对营养元素铜的调节作用。 展开更多
关键词 尺寸排阻色谱 电感耦合等离子体质谱 氯化汞 金属硫蛋白 组织 大鼠
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膳食纤维分析方法研究进展 被引量:4
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作者 高瑞萍 赵国华 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期122-127,共6页
膳食纤维作为一种来源丰富的功能性食品原料,具有重要的生理功能——能够降低便秘、结肠癌、肥胖、心血管疾病、糖尿病等慢性病的发病率。文中就膳食纤维分析方法的研究进展进行了综述,介绍了传统的分析方法,以及近红外分析法、尺寸排... 膳食纤维作为一种来源丰富的功能性食品原料,具有重要的生理功能——能够降低便秘、结肠癌、肥胖、心血管疾病、糖尿病等慢性病的发病率。文中就膳食纤维分析方法的研究进展进行了综述,介绍了传统的分析方法,以及近红外分析法、尺寸排阻液相色谱法、高效阴离子色谱法等现代仪器分析方法。 展开更多
关键词 膳食纤维 近红外分析法 尺寸排阻液相色谱法 高效阴离子色谱法
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多维色谱-质谱联用技术分析胰腺癌血清差异表达蛋白 被引量:1
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作者 刘峰 刘捷登 +2 位作者 刘彬霞 薛丹阳 杨雁灵 《现代肿瘤医学》 CAS 2012年第10期2121-2123,共3页
目的:探讨胰腺癌患者血清和健康人血清之间蛋白质的差异表达,寻找特异性的肿瘤生物标志物。方法:应用多维色谱-基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)方法,检测23例胰腺癌患者和30例健康人血清蛋白质谱图表达。结果:与健康人... 目的:探讨胰腺癌患者血清和健康人血清之间蛋白质的差异表达,寻找特异性的肿瘤生物标志物。方法:应用多维色谱-基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)方法,检测23例胰腺癌患者和30例健康人血清蛋白质谱图表达。结果:与健康人血清比较,胰腺癌患者血清谱图中显示1个特异性蛋白质峰明显增高,相对分子质量为5734D,其特异性和敏感性高。结论:人胰腺癌血清特异性蛋白质的发现,对进一步研究肿瘤发生机理及其临床特异性生物标志物的检测等具有重要意义。 展开更多
关键词 多维色谱 体积排阻色谱 反相液相色谱 胰腺癌 质谱 蛋白质组学 生物标记物
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不同碳源反硝化滤池进出水中溶解性有机物对比分析 被引量:1
10
作者 郑晓英 乔露露 +1 位作者 王慰 李魁晓 《净水技术》 CAS 2019年第1期61-67,82,共8页
以某城市污水处理厂二级出水为反硝化滤池进水,利用分子排阻色谱、三维荧光(EEM)及溶解性微生物代谢产物(SMP)测定等不同分析方法对不同碳源反硝化生物滤池进出水中的溶解性有机物(DOM)进行对比研究。结果表明,滤池进水DOM中小分子物质... 以某城市污水处理厂二级出水为反硝化滤池进水,利用分子排阻色谱、三维荧光(EEM)及溶解性微生物代谢产物(SMP)测定等不同分析方法对不同碳源反硝化生物滤池进出水中的溶解性有机物(DOM)进行对比研究。结果表明,滤池进水DOM中小分子物质含量最高,其中分子量为1 kDa的有机物约占总有机物的50%,分子量>10 kDa的大分子有机物约占7%。经过反硝化滤池,出水有机物种类不变,小分子有机物出水浓度下降为进水的50%,说明滤池对小分子物质有一定的去除作用。SMP测定结果表明,滤池进水中主要的SMP物质为腐植酸,约占SMP总含量的70%。在整个过滤周期内,SMP的总量变化不大,反冲洗气水冲和水冲阶段SMP的浓度增加显著。EEM分析表明,滤池正常运行时,进出水中的DOM主要成分为可见腐植质(λ_(ex)/λ_(em)=330/425)和UV腐植质(λ_(ex)/λ_(em)=230/430);反冲洗阶段,DOM含量增加,且出现类蛋白、类色氨酸;整个过滤周期内有机物的含量基本不变,说明反硝化生物滤池不能对腐植酸类物质进行降解。 展开更多
关键词 溶解性有机物 反硝化滤池 分子排阻色谱 三维荧光光谱 溶解性微生物代谢产物 碳源 比较分析
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低分子量硫酸化多糖的体积排阻色谱法分离及其组成定量分析 被引量:3
11
作者 吴艳芳 李晓鸽 +2 位作者 车铁军 朱智甲 康经武 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期178-183,共6页
建立了用于分离并定量测定低分子量硫酸化多糖中不同糖链数的各个组分分布比例的体积排阻色谱方法。系统考察了流动相的组成、离子强度和pH值、流速、柱温等因素对分离的影响。最佳分离条件:两支TSK-GELG2000 SWxl色谱柱(300 mm×7.... 建立了用于分离并定量测定低分子量硫酸化多糖中不同糖链数的各个组分分布比例的体积排阻色谱方法。系统考察了流动相的组成、离子强度和pH值、流速、柱温等因素对分离的影响。最佳分离条件:两支TSK-GELG2000 SWxl色谱柱(300 mm×7.8 mm)串联,流动相100 mmol/L Na2 HPO4-NaH2 PO4(pH 7.0),流速0.5 mL/min,柱温35℃,进样量5μL,样品质量浓度10 g/L。在最佳的分离条件下,可以将低分子量硫酸化多糖样品中不同糖链数的各个组分分离并对各个组分的分布进行了定量分析。用该方法对美国药典标准品(USP)、商品和实验室制备的低分子量硫酸化多糖糖链数分布进行了定量化比较,证明该方法可用于低分子量硫酸化多糖类药物的组成成分的质量控制。 展开更多
关键词 体积排阻色谱 低分子量硫酸化多糖 组成分布 质量控制
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聚酯分子量分布对可纺性的影响 被引量:5
12
作者 赵瑞琴 《合成技术及应用》 1996年第2期25-28,共4页
根据不同聚酯切片在常规指标相同的情况下可纺性往往不同,重点介绍用凝胶渗透色谱法和筛析色谱法对聚酯的低分子成分及分子量分布的检测研究,以及分子量分布对可纺性具有的重要意义。
关键词 分子量分布 可纺性 聚酯纤维 纺丝
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分离技术在新型冠状病毒研究和防疫检测中的应用 被引量:1
13
作者 李林森 朱超 +1 位作者 赵新颖 屈锋 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期679-685,共7页
新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情的爆发给世界公共卫生安全带来前所未有的挑战。随着新型冠状病毒(SARS-CoV-2)相关研究的不断深入,众多分析检测技术相继被应用,推动了病毒检测、疫苗和创新疗法的研发,从而使疫情早日得到控制。分离技... 新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情的爆发给世界公共卫生安全带来前所未有的挑战。随着新型冠状病毒(SARS-CoV-2)相关研究的不断深入,众多分析检测技术相继被应用,推动了病毒检测、疫苗和创新疗法的研发,从而使疫情早日得到控制。分离技术作为生命科学、医学、药学领域的关键技术,操作简单,分离效率高,选择性强,在新型冠状病毒的分离、检测、诊疗及防疫中起到不可替代的作用。该文以SARS-CoV-2或COVID-19为关键词在ISI Web of Science中进行主题检索,归纳了2020年度新型冠状病毒相关的研究论文,简要介绍主要的研究方向,并对国际顶级学术期刊Nature,Science,Cell的论文发表情况进行了统计。通过检索影响因子较高的期刊,综述了新型冠状病毒研究中主要应用的分离技术,并从亲和色谱和尺寸排阻色谱、液相色谱、磁珠分离、离心、微纳分离以及电泳6个方面进行说明。综述统计了亲和色谱和尺寸排阻色谱纯化的病毒相关蛋白,并介绍了其在新型冠状病毒传播、感染机制以及药物筛选中的应用;介绍了液相色谱对病毒候选药物评估以及复杂基质中单一成分的鉴定;介绍了磁珠分离在细胞分离、核酸提取和免疫学检测中的应用;介绍了离心对病毒颗粒、细胞以及血清的分离;介绍了微纳分离结合其他技术以实现病毒蛋白的高灵敏检测;简要介绍了电泳在聚合酶链式反应(PCR)产物分析中的应用。该文综述了2020年度新型冠状病毒研究和防疫检测中分离技术的应用情况,分析了分离技术在新型冠状病毒检测中发挥的作用,旨在为从事分离研究的科研工作者提供一些参考。 展开更多
关键词 分离技术 亲和色谱 尺寸排阻色谱 液相色谱 磁珠分离 离心 微纳分离 电泳 新型冠状病毒
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体积排阻色谱法定量检测9种型别人乳头瘤病毒原液中病毒样颗粒
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作者 龙珍 李晓玉 +6 位作者 李秀玲 柳军凯 聂建辉 李长坤 李月琪 黄涛宏 黄维金 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期424-429,共6页
据统计,5%以上的人类癌症由人乳头瘤病毒(HPV)导致。HPV疫苗的使用,尤其是多价HPV疫苗的使用,可有效预防HPV感染和肿瘤的发生。例如,9价HPV疫苗可有效预防90%以上HPV相关癌前病变。人乳头瘤病毒样颗粒(VLP)是HPV疫苗的唯一抗原。VLP由36... 据统计,5%以上的人类癌症由人乳头瘤病毒(HPV)导致。HPV疫苗的使用,尤其是多价HPV疫苗的使用,可有效预防HPV感染和肿瘤的发生。例如,9价HPV疫苗可有效预防90%以上HPV相关癌前病变。人乳头瘤病毒样颗粒(VLP)是HPV疫苗的唯一抗原。VLP由360份衣壳蛋白L1组成。VLP的含量测定对HPV原液和HPV疫苗的质量评价至关重要。该文发展了一种以体积排阻色谱(SEC)为基础的9种型别人乳头病毒样颗粒的定量方法。实验优化了包括色谱柱类型、色谱柱孔径、流动相离子强度和流动相pH值在内的色谱条件。经过考察,以SHIMSEN Ankylo SEC-300色谱柱(300 mm×7.8 mm,3μm)为固定相,以含有300 mmol/L NaCl和50 mmol/L磷酸盐(pH 7.0)的缓冲溶液为流动相时,VLP的色谱峰更窄,从而可获得更高的响应和更好的灵敏度,因此选择该色谱条件用于VLP与基质的分离。优化所得的方法具有较宽的线性范围,良好的重复性(峰面积的相对标准偏差不大于5.0%)和灵敏度(定量限为4.58~15.24μg/mL)。将方法用于HPV原液中VLP的含量测定,监测VLP的稳定性。结果显示,HPV原液中VLP颗粒不稳定,于4℃放置一周后,VLP含量与生产后立即测得的含量相比存在一定程度的降解。此外,方法还可用于疫苗上清液中游离蛋白质的分析,监测铝佐剂对VLP的吸附情况。被测厂家的铝佐剂可较好的吸附VLP,无明显残余蛋白质检出。与传统的蛋白质定量方法相比,如Folin-酚法(Lowry法),该法具有操作简单、自动化程度高、分析通量高等优点,可实现VLP含量的批量化分析。 展开更多
关键词 体积排阻色谱 定量 人乳头瘤病毒 病毒样颗粒 疫苗
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尺寸排阻-反相液相色谱-质谱联用技术在大鼠肾脏翻译后修饰蛋白质鉴定中的应用 被引量:2
15
作者 李健民 卓越 +2 位作者 张毅达 李娜 伍建林 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期87-95,共9页
LC-MS联用技术在蛋白质组学研究中具有重要的作用,但是在复杂的生物体系中,由于样品的高度复杂性和其中蛋白质含量的巨大差异,执行全面且无倾向的蛋白质组分析是一项挑战。因此,在液相色谱分离中采用基于不同原理的色谱分离方法来降低... LC-MS联用技术在蛋白质组学研究中具有重要的作用,但是在复杂的生物体系中,由于样品的高度复杂性和其中蛋白质含量的巨大差异,执行全面且无倾向的蛋白质组分析是一项挑战。因此,在液相色谱分离中采用基于不同原理的色谱分离方法来降低蛋白质样本的复杂度,并对微量蛋白质进行富集,对后续采用质谱方法进行信息的采集和深入分析至关重要。在这里我们开发了一种基于尺寸排阻色谱(SEC)与反相液相色谱(RPLC)结合的新方法来进行复杂体系蛋白质的分离和鉴定,特别是对于微量蛋白质的分析。首先使用SEC对蛋白质进行分离和富集,并酶解成多肽,再通过RPLC-MS联用的方法对酶解后的多肽进行分离和鉴定。结果显示使用上述方法可以有效降低蛋白质样本的复杂度,并有效提高微量蛋白质的鉴定能力,可从大鼠肾脏鉴定出23621个肽段及1345个蛋白质,比常规的二维强阳离子交换-反相液相色谱法(2D SCX-RPLC)鉴定到的肽段及蛋白质分别多出69%及27%。此外,该方法对肾脏翻译后修饰(PTM)蛋白质的鉴定显示出更多的优势,翻译后修饰的多肽鉴定率显著增加,特别是磷酸化肽段的鉴定效率可达到靶向富集策略的水平。在此展示的SEC-RPLC-MS可以更好地了解蛋白质翻译后修饰对肾脏的影响,最终将有助于增加我们对正常的生理性肾功能以及病理过程机制的理解。 展开更多
关键词 蛋白质组学 尺寸排阻色谱 翻译后修饰
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一种新颖的体积排阻色谱加宽效应的去除方法Ⅰ理论测试
16
作者 张鹏 《安徽师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2018年第1期39-44,共6页
分子量及其分布是表征聚合物特征的重要参数,体积排阻色谱(Size-exclusion chromatography)广泛用于测量聚合物分子量和分子量分布。然而,由于带加宽效应的存在,导致实际得到的分子量分布曲线形状受到了一定程度的扭曲,从而影响了分析... 分子量及其分布是表征聚合物特征的重要参数,体积排阻色谱(Size-exclusion chromatography)广泛用于测量聚合物分子量和分子量分布。然而,由于带加宽效应的存在,导致实际得到的分子量分布曲线形状受到了一定程度的扭曲,从而影响了分析的准确性。目前国际上基于实验或理论提出的解决方案的缺点不是实验代价昂贵就是理论方法的近似度太高而不能够被普遍采用。本文结合了退卷积方法和蒙特卡洛Metropolis拟合技术,开发了一种有效且简便的带加宽效应去除方法,本文对这种方法进行了严密的理论验证,证明了该方法可以准确获得聚合物分子量分布信息。 展开更多
关键词 体积排阻色谱(size-exclusion chromatography) GEL PERMEATION chromatography 带加宽效应
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吉妥单抗复兴史
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作者 吴仪 刘睿 吕弋 《大学化学》 CAS 2022年第9期170-178,共9页
采用访谈的形式,以首个上市的抗体偶联药物“吉妥单抗”的传奇历程为明线,靶向药物在化学分子设计和分析检测上的进步为暗线,讲述了抗体偶联药物的发展史。较为全面地介绍了抗体偶联药物的化学结构、设计思路、分析方法与发展前景。
关键词 抗体偶联药物(ADC) 吉妥单抗(Mylotarg) 靶向治疗 抗体药物比(DAR) 尺寸排阻色谱(sec) 疏水作用色谱(HIC)
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冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)体积分子排阻-高效液相色谱主峰右侧峰2蛋白鉴定
18
作者 张秋菊 杨雪 +7 位作者 冯子祎 赵博 林洪娟 田丽媛 杨光 刘畅 李子莉 孙宏亮 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第7期801-805,共5页
目的对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)体积分子排阻-高效液相色谱(size exclusion chromatograghy-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)主峰右侧峰2蛋白进行鉴定,以明确该峰的蛋白成分,保证疫苗质量。方法将... 目的对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)体积分子排阻-高效液相色谱(size exclusion chromatograghy-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)主峰右侧峰2蛋白进行鉴定,以明确该峰的蛋白成分,保证疫苗质量。方法将冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)进行SEC-HPLC分析,收集主峰右侧峰2,经超滤浓缩后,进行二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)还原、碘代乙酰胺(iodoacetamide,IAM)烷基化和胰蛋白酶(Trypsin)酶解,产物进行nanoLC-MS/MS串联质谱分析。结果冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)SEC-HPLC主峰右侧峰2成功鉴定4个蛋白,单个蛋白匹配肽段数在59~79个之间;单个蛋白匹配特征肽段种数在6~12种之间;单个蛋白匹配特征肽段检出次数在20~36次之间;鉴定蛋白的序列覆盖率在37.40%~64.31%之间。参与统计的肽段共280个,质谱偏差均小于0.15 Da。结论冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白)SEC-HPLC主峰右侧峰2均来源于狂犬病病毒株4aGV,为疫苗颗粒解离物。 展开更多
关键词 狂犬病疫苗(Vero细胞)原液(无人白) 狂犬病病毒株4aGV 体积分子排阻-高效液相色谱 蛋白鉴定 nanoLC-MS/MS分析 疫苗病毒颗粒
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SEC-RI-MALLS联用技术测定甲基纤维素的分子量及分子量分布 被引量:8
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作者 刘菁 吴燕 +1 位作者 李华龙 王恒 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1058-1062,共5页
目的:建立利用分子排阻色谱(SEC)与示差检测器(RI)和多角度激光光散射仪(MALLS)联用技术对甲基纤维素分子量及分子量分布进行测定的方法。方法:采用串接有TSKgelguard PWXL(6 mm×40mm)保护柱的TSKgel GMPWXL凝胶色谱柱(7.8 mm×... 目的:建立利用分子排阻色谱(SEC)与示差检测器(RI)和多角度激光光散射仪(MALLS)联用技术对甲基纤维素分子量及分子量分布进行测定的方法。方法:采用串接有TSKgelguard PWXL(6 mm×40mm)保护柱的TSKgel GMPWXL凝胶色谱柱(7.8 mm×300 mm,13μm),以0.1 mol·L-1硝酸钠溶液为流动相,流速为0.5 mL·min-1,柱温及示差检测温度为34℃,对来自国内外3个厂家的10批甲基纤维素样品进行了分子量及其分布的测定。结果:该方法测定各批次样品的重均分子量、数均分子量及分散度结果的误差均未超过5%,对同批次样品多次测定结果的RSD均未超过1.0%。结论:该方法操作简便,准确度及重复性良好,适用于甲基纤维素的分子量及分子量分布的测定,为甲基纤维素的质量控制提供了依据。 展开更多
关键词 甲基纤维素 分子量 分子量分布 分子排阻色谱与示差检测器和多角度激光光散射仪联用
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INVESTIGATION ON THE RESPONSE FACTORS OF CONCENTRATION DETECTORS WITHIN SEC PROCESS
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作者 程镕时 《Chinese Journal of Polymer Science》 SCIE CAS CSCD 2011年第2期203-213,共11页
The response factors of refractive index(RI) and ultraviolet(UV) detectors of size exclusion chromatography (SEC) defined as the ratio of area of output signal to the mass of injected sample are studied and anal... The response factors of refractive index(RI) and ultraviolet(UV) detectors of size exclusion chromatography (SEC) defined as the ratio of area of output signal to the mass of injected sample are studied and analyzed by using five narrowly distributed polystyrene(PS) standard samples with known molar masses.It is found that the individual response factor for a given sample varies with the concentration of the injected solution within a limited range bounded by an upper and a lower limiting response factor values.This variation reveals the conformational change of the polymer chains with the concentration of the injected solution.The dynamic contact concentrations c_s of the PS samples derived from the response factor data are in good accordance with those reported earlier by other methods.The physical meanings of the signals of the two detectors are further analyzed and theoretically formulated.The solvation of the polymer chain and the conformation changes play an important role in these detecting systems.Both of the solvation number of the structural repeating unit and the extra embedded solvent due to cluster forming in higher concentrations could be deduced from the variation of response factor with the concentration of the injected solution. 展开更多
关键词 Dynamic contact concentration ENTANGLEMENT Response factors size exclusion chromatographysec SOLVATION
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