黄芪甲苷对糖尿病肾病大鼠足细胞裂孔隔膜的保护作用

目的:探讨黄芪甲苷对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠足细胞裂孔膈膜的保护作用及其可能机制。方法:利用腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立糖尿病大鼠模型。将40只雄性SD大鼠随机分为4组各10只:正常对照组(NC组)、黄芪甲苷组(astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ组)、糖尿病肾病组(DN组)和糖尿病肾病+黄芪甲苷干预组(DN+AS-Ⅳ组)。造模成功后每6、12周检测大鼠体质量及24小时尿蛋白量。造模后12周末留取大鼠血样本和肾组织标本并处死大鼠。检测大鼠肌酐(serum creatinine,SCr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和尿蛋白;PAS及Masson染色观察肾脏病理改变;电镜观察足细胞超微结构变化;免疫组化法及Western Blot法检测肾组织Nephrin、Podocin、Desmin表达。结果:与DN组相比黄芪甲苷可明显降低大鼠蛋白尿,改善大鼠肾脏病理损伤。DN组Nephrin、Podocin蛋白表达量均低于NC组(P<0.05),Desmin蛋白表达量高于NC组(均P<0.05),AS-Ⅳ组肾脏病理改变及各指标明显改善,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪甲苷可能通过稳定足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin和Podocin来抑制STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏损伤。

化瘀通络中药不同配伍对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用及对肾小球P-cadherin表达的影响

为观察化瘀通络中药不同配伍对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及对肾小球足细胞裂孔膜蛋白P-cadherin表达的影响,将70只雄性SD大鼠随机分为正常组和模型组、化瘀通络组、厄贝沙坦组、化瘀组和通络组,灌胃干预16周。检测大鼠的体重、肾重、肾脏指数、24 h尿蛋白定量,分别采用实时定量PCR和蛋白印迹法检测P-cadherin的表达。结果显示,与模型组比较,化瘀通络组大鼠的肾脏指数、24 h尿蛋白定量明显下降(P<0.01),体重增加、P-cadherin mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.01)。提示化瘀通络中药可能通过上调P-cadherin mRNA和蛋白的表达,减少尿蛋白,延缓糖尿病肾病病程进展。

miR-155表达变化对TGF-β1损伤足细胞蛋白podocin、CD2AP、synaptopodin的影响

目的:研究miR-155 mimics/inihibitor转染足细胞后微小RNA-155(miR-155)的表达变化及其对TGF-β1损伤足细胞的影响。方法:体外培养小鼠足细胞,细胞免疫荧光染色鉴定足细胞分化成熟;用TGF-β1处理足细胞构建足细胞损伤模型,RT-PCR和Western blot分别检测miR-155和CD2AP的表达;免疫荧光显微镜观察转染成功指示剂Cy3,RT-PCR检测miR-155 mimics/miR-155 inihibitor转染(0 h、24 h、48 h、72 h)后miR-155的表达;选取转染时间48~72 h,RT-PCR检测Normal、TGF-β1、TGF-β1+mimics、TGF-β1+mimics NC、TGF-β1+inhibitor、TGF-β1+inhibitor NC组细胞miR-155及podocin、CD2AP、synaptopodin的mRNA表达,Western blot检测3种蛋白的表达,免疫荧光观察各组CD2AP的荧光分布和表达。结果:CD2AP呈足细胞分化成熟的特征分布;TGF-β1干预后miR-155表达上升,CD2AP蛋白表达下降(P<0.05);miR-155 mimics或miR-155 inihibitor转染48 h、72 h后,miR-155表达明显增加或减少(P<0.05);miR-155 mimics可上调TGF-β1诱导的miR-155表达(P<0.05),且可促进TGF-β1诱导的足细胞podocin、CD2AP、synaptopodin的mRNA和蛋白表达下降(P<0.05),而转染miR-155 inihibitor对足细胞蛋白的作用与miR-155 mimics相反。免疫荧光结果显示CD2AP蛋白的表达与Western blot、RT-PCR结果一致。结论:miR-155可靶向足细胞蛋白podocin、CD2AP和synaptopodin的表达,miR-155过表达可促进足细胞损伤,miR-155表达下调则可改善足细胞的损伤,因此,miR-155可作为足细胞损伤新的药物靶标。

中药有效成分对糖尿病肾病足细胞裂空隔膜蛋白干预作用的研究进展

肾小球足细胞裂孔隔膜(SD)蛋白是SD的重要组成成分,其在维持SD结构和功能的完整性方面发挥着关键性作用,并且与蛋白尿的发生密切相关。从中药中提取有效成分对SD蛋白的结构、功能及其作用机制进行干预,已成为防治糖尿病肾病研究的一个热点。本文就近年来足细胞SD蛋白的研究现状、中药有效成分对SD蛋白的干预作用及其作用机制作一综述,主要阐述了雷公藤、黄芪、积雪草、川芎、绞股蓝、三七、冬虫夏草、红参、五味子等多种中药的有效成分对SD蛋白,尤其是nephrin、podocin蛋白等的干预作用及其防治蛋白尿的作用机制,为更好地设计早期蛋白尿防治方案以及为预防肾病综合征提供新的研究策略。

Rho GTPases对肾小球足细胞特异性裂孔膜骨架蛋白的调控作用

肾小球足细胞是一种呈高度分化、具有独特结构和功能的上皮细胞,且是构成肾小球滤过膜的重要结构之一。足突的形态变化对于维持足细胞的正常生理功能尤其重要,而前者与肌动蛋白的排列密切相关。Rho GTPases参与多种细胞生命活动,在细胞骨架的调控中发挥核心作用。因此,本文就Rho GTPases对足细胞特异性裂孔膜(slit diaphragms,SD)骨架蛋白的调控作用进行综述。

化瘀通络中药对高糖刺激下足细胞裂孔膜蛋白的干预作用

通过化瘀通络中药对H-2Kb-ts A58条件性永生化小鼠足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP表达的干预作用,探讨化瘀通络中药降低糖尿病肾病蛋白尿、保护肾功能的可能作用机制。实验以体外培养小鼠足细胞为研究对象,将其分为正常糖组(CG)、高糖组(HG)、高糖加药组(HG+Z),通过免疫细胞化学(ICC)、蛋白质印迹法(Western-Blot)、实时荧光定量(Real-time PCR)方法检测不同时间点不同干预后各组podocin、CD2AP蛋白及基因的表达情况。结果显示干预足细胞48 h后,与CG组比较,其余两组podocin、CD2AP两种蛋白表达量均明显降低(P<0.05,P<0.01);与HG组比较,(HG+Z)组两种蛋白表达量均明显升高(P<0.05)。与同时间点CG组比较,其余两组podocin、CD2AP mRNA表达均显著降低(P<0.01);与同时间点HG组比较,(HG+Z)组48 h两种蛋白的基因表达量均明显升高(P<0.01),24、72 h与同时间点HG组无明显差异(P>0.05)。以上结果说明化瘀通络中药可以上调高糖刺激下足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP的表达,其可能为化瘀通络中药减少糖尿病肾病蛋白尿、保护肾功能的作用机制之一。

Nephrin、podocin在V型狼疮性肾炎肾组织中的表达

目的探讨肾小球足细胞相关蛋白nephrin和podocin在V型狼疮性肾炎(V-LN)发病中的作用。方法检测V-LN组11例和特发性膜性肾病(I MN)组8例患者的尿常规、24-h尿蛋白定量、尿补体C3及纤维蛋白原降解产物(FDP)、血脂、血清补体及肝肾功能,并行肾组织活检间接免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察nephrin、podocin表达的变化。结果24-h尿蛋白定量、血清白蛋白、肌酐、尿补体C3两组间无统计学差异;V-LN组血脂、血清补体C3、C4及尿FDP均低于I MN组;nephrin、podocin表达两组均减弱,但I MN组更明显。结论Nephrin、podocin表达减弱可能参与V-LN蛋白尿的发生,但V-LN表达减弱不及I MN明显,推测V-LN蛋白尿的发生可能还有其他机制参与。

熊果酸对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用

目的：通过复制糖尿病肾病大鼠模型，探讨熊果酸（ursolic acid，UA）对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用及其机制。方法：SPF级大鼠采用链脲霉素（streptozocin，STZ）及高糖高脂饲料联合复制糖尿病肾病大鼠模型，实验分为正常组，模型组，阳性药组（厄贝沙坦，15mg·kg^-1），UA高剂量组（UA—H，60mg·kg^-1）和UA低剂量组（UA-L，30mg-kg^-1）；观察大鼠血糖、尿蛋白量、肾指数的变化，苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色法和过碘酸-希夫（periodicacid-sehiff，PAS）染色法观察肾脏病理变化，酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清和肾脏中的肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-a），白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6），白细胞介索-1／3（interleukin-1α，IL-1β）含量，试剂盒检测肾脏组织超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）活性和丙二醛（malonaldehyde，MDA）含量，蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测大鼠肾组织足细胞裂孔膜CD2相关蛋白（CD2-associatedprotein，CD2AP）和podocin蛋白的表达。结果：与正常组比较，模型组大鼠的血糖，24h尿蛋白量，血清和肾脏IL-1／3，IL-6及TNF-α含量，肾脏组织中MDA含量，肾指数均显著增加，体质量，肾脏组织SOD活性，肾脏中podocin，CD2AP蛋白表达量均显著降低（P〈0．01）；与模型组比较，UA明显降低血糖值和尿蛋白量，肾指数，肾脏MDA含量，血清和肾脏IL-1β，IL-6及TNF-α水平，能够升高模型组大鼠体质量，肾脏SOD活性，肾脏中podocin，CD2AP蛋白的表达（P〈0．05，P〈0．01），逆转糖尿病所致大鼠肾小球病变。结论：UA可通过保护肾脏足细胞作用及调节裂孔膜蛋白CD2AP和podocin表达而抑制高血糖对肾脏的病理损害、降低尿蛋白和保护肾功能。

固肾方对糖尿病大鼠足细胞及其裂隙膜蛋白的作用

目的:探讨固肾方对糖尿病大鼠足细胞及其裂隙膜蛋白的影响。方法:选取雄性SD大鼠50只,用链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型,造模成功后,将大鼠随机分成5组,每组10只进行实验。大鼠于造模后第24h,8、28d分别收集尿液,做24h尿蛋白定量。于给药12周后处死,取血液做肾功能检测,取肾脏组织做光镜、免疫组化检测,用电镜观察肾小球足细胞形态改变。免疫组化观察肾组织裂隙膜蛋白nephrin、podocin、CD2AP的蛋白表达。结果:造模后28d,模型组与其它各组比较尿量和蛋白量显著增高(P<0.01)。血糖、肌酐和尿素氮显著升高,白蛋白显著降低(P<0.05,P<0.01)。光镜、电镜各组与模型组比较有明显不同。免疫组化显示模型组nephrin、podocin、CD2AP的蛋白表达降低,其他各组均有升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:中药固肾方能减少蛋白尿,降低血糖,改善肾功能,其功效可能通过保护足细胞,升高裂隙膜蛋白nephrin、podocin、CD2AP表达而改善肾小球滤过膜的通透性,从而减少蛋白尿,延缓肾功能的进展。

芪地固肾方对膜性肾病大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin和Podocin表达的影响

目的:探讨芪地固肾方治疗膜性肾病(MN)大鼠的效果及其可能的机制。方法:将40只SD雄性大鼠随机分为模型组(等剂量生理盐水尾静脉注射)、雷公藤多甙片组(10 mg/kg雷公藤多甙片)、芪地固肾方低剂量组(15.425 g/kg芪地固肾方)、芪地固肾方高剂量组(61.7 g/kg芪地固肾方)四组,另取10只未造模大鼠作为空白组(等剂量生理盐水尾静脉注射),连续干预28天后,检测24小时尿蛋白定量(U-TP)、血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的变化;HE染色、透射电镜观察大鼠肾组织病理学改变;RT-PCR检测肾组织中nephrin蛋白、podocin m RNA的表达。结果:与空白组比较,模型组24 hU-TP、足细胞nephrin和podocin m RNA显著升高,血清TP和ALB显著降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组24 hU-TP降低,血清TP和ALB显著升高(P<0.05);肾组织免疫复合物沉积减少,肾小球基底膜增厚减轻;足细胞nephrin和podocin m RNA表达升高(P<0.05)。结论:芪地固肾方能够降低MN模型大鼠的尿蛋白水平,减轻肾脏病理损伤,上调肾组织中足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和podocin m RNA的表达,延缓膜性肾病的进展。