13种石斛属植物遗传多样性的AFLP分析

采用AFLP技术对13种石斛属植物的遗传多样性进行了分析。选择性扩增引物组合E+ACT/M+CAC、E+AAC/M+CAC和E+ACA/M+CAC分别对这13种材料进行扩增,得到丰富的条带。在100-300bp共得到346条带,多态性带342条,多态性百分率为98.8%。聚类分析结果表明,在相似系数0.54处,可将13种材料分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类。Ⅰ类包括:串珠石斛、铁皮石斛、广东石斛、重唇石斛、晶帽石斛、细叶石斛、滇桂石斛、报春石斛、玫瑰石斛、球花石斛;Ⅱ类包括:鼓槌石斛;Ⅲ类包括:美花石斛(花,浅红)、美花石斛(花,淡白)。AFLP分析结果与传统分类学的结果基本一致,表明该标记技术对石斛属植物的遗传多样性和分类研究是可行的。

银染-TRAP法检测端粒酶活性的建立

目的建立检测端粒酶活性的改良银染ＴＲＡＰ法（端粒重复序列扩增法）。方法用银染ＴＲＡＰ法测定人肿瘤细胞株和经加热处理的阴性对照细胞的端粒酶活性。结果肿瘤细胞株的端粒酶活性阳性率为１００％，１０、１００、５００个Ｈｅｌａ细胞均为阳性，加热处理后的细胞端粒酶活性均为阴性。结论提示与核素ＴＲＡＰ法相比较，银染ＴＲＡＰ法是同样特异、敏感，且更快速的端粒酶活性的检测方法，该方法可成为恶性肿瘤的诊断指标之一。

端粒酶在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义

目的探讨年龄相关性白内障及正常晶状体上皮细胞的端粒酶活性的表达及其在年龄相关性白内障发生发展中的作用。方法采用TRAP-银染法及TRAP-ELISA两种方法检测9例年龄相关性白内障、3例正常晶状体上皮细胞的端粒酶活性。结果9例年龄相关性白内障及3例正常晶状体上皮细胞中端粒酶均呈阳性,年龄相关性白内障组晶状体上皮细胞中端粒酶活性明显低于正常组,经统计学分析差别具有显著意义(P<0.05)。结论端粒酶活性的降低可能是年龄相关性白内障晶状体上皮细胞发生凋亡的一个重要机制,端粒酶在年龄相关性白内障的发生发展中起着重要的作用。

一种水稻幼苗单株DNA的快速提取及PAGE银染改良法

目的:为了提高SSR分子标记技术在水稻遗传育种中的研究效率,介绍一种快速的适于SSR-PCR扩增的水稻幼苗单株DNA提取法及PAGE银染法。方法:在常温下加入少量SDS提取液将单株叶片迅速捣碎,再加入300μLSDS提取液,65℃水浴10min后离心,取上清用乙醇沉淀后离心,超净工作台吹干后用100μLTE回溶即可。改进的PAGE银染法只需染色、冲洗、显影等3步,用乙醇和硝酸银作为染色液,去离子水快速冲洗1次后置显影液中即可显影。结果:本法可快速提取DNA,不须液氮研磨、氯仿抽提,提取的DNA经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测表明质量较好,且扩增结果稳定可靠,满足了SSR-PCR的需要。改良的银染法与常规银染法的检出结果相同,但快速方便,整个过程只需10min,且背景较浅,灵敏度高。结论:快速提取法及PAGE银染改良法结合SSR分子标记技术,可有效地用于杂种后代的遗传连锁分析和分子标记辅助育种时的单株检测。

p53基因PCR-SSCP银染检查痰标本诊断肺癌

目的 了解痰标本检测肺癌患者p53基因突变的可行性及其对临床诊断的意义。方法 采用改良Saccomanno法浓缩及保存痰标本,部分涂片找癌细胞,其余标本进行痰细胞DNA提取及多聚酶链反应(PCR)单链构象多态性分析(SSCP)。共检测22例患者,其中确诊肺癌患者15例(涂片或活检找到癌细胞),临床高度怀疑肺癌患者5例(涂片或活检均阴性),2例非肿瘤患者(1例为结节病,另1为右中叶肺炎),同时采用正常肺组织标本作对照。结果 p53外显子6、7、8的PCRSSCP银染阳性率在肺癌组及癌疑组分别为6/15(40%)和2/5(40%)。非肿瘤患者痰标本及正常肺组织均未发现p53基因异常。结论 改良Saccomanno法不仅能贮存、浓缩痰细胞,而且方便痰标本DNA提取;PCRSSCP银染方法可用来检测肺癌患者痰细胞的p53基因突变。

茶树cDNA-AFLP银染技术体系的建立

为了挖掘安白茶白化期相关的差异基因,建立并优化了茶树叶片cDNA-AFLP扩增反应体系,进行cDNA-AFLP分析。在安吉白茶叶片cDNA-AFLP的试验中,分别对20μL预扩增和选择性扩增反应体系中的4种反应条件影响因子进行不同梯度优化的研究,包括引物、Mg2+、dNTP及TaqDNA聚合酶的用量。PCR预扩增20μL反应体系中,引物75ng/20μL,Mg2+2.0mM,dNTP0.2mM,TaqDNA聚合酶1U时预扩增效果较好;PCR选择性扩增20μL反应体系中,引物75ng/20μL,Mg2+2.5mM,dNTP0.2mM,TaqDNA聚合酶1.5U时选择性扩增效果较好。通过试验,获得较为理想的预扩增和选择性扩增体系。

采用AFLP分析齐口裂腹鱼DNA指纹的技术探讨

AFLP(选择性扩增片断长度多态性)指纹技术被认为是当今最有效的DNA指纹分析技术之一,但是由于该技术操作流程较长,对模板DNA质量要求较高以及PCR反应成分等变数条件的影响,要获得高清晰的DNA指纹图谱比较困难。文中以齐口裂腹鱼为研究对象,对AFLP的分析条件作了一定的探索。结果表明:基因组DNA必须是高纯度、高分子量;酶切充分;PCR反应最佳条件为:引物E-XYZ,M-XYZ在体系中的浓度分别为1ng/mL,5ng/mL;dNTPs浓度为0.2mmol/L;MgCl2浓度为1.9mmol/L。银染时在NaOH条件下显色比在传统银染法中的Na2CO3条件下显色,图谱背景更干净,条带更清晰。

色纺梳理工艺探讨

探讨色纺纱梳理工艺特点。介绍了色纺双梳工艺的含义,针对色纺纱的质量要求,阐述了采用双梳工艺的优势。以两个工艺流程为例,分析了双梳工艺的低耗性。同时分析了双梳工艺两次梳理的技术要点。针对色纺纱强力低的问题,提出了对应措施。认为:双梳工艺可以解决色纺纱色点问题,保证混色精准。指出:色纺双梳工艺应根据最终产品质量要求和成本灵活运用。

癌性胸水脱落细胞端粒酶活性表达初步研究

目的：建立银染－ＴＲＡＰ法检测胸水脱落细胞端粒酶活性，探讨银染－ＴＲＡＰ法用于胸水，脱落细胞中端粒酶活性研究的可行性。方法：应用银染－ＴＲＡＰ法检测３０例癌性胸水脱落细胞和３０例结核性胸膜炎胸水脱落细胞端粒酶活性的表达。结果：癌性胸水脱落细胞端粒酶活性为１００％（３０／３０）表达，对照组胸水脱落细胞端粒酶活性为阴性（Ｐ＜０．０１）。结论：癌性胸水脱落细胞中存在端粒酶活性；端粒酶活性与癌性胸水的形成原因有关；银染－ＴＲＡＰ法是一种敏感、可靠且简便、快速和经济的方法，适用于临床实验室进行大规模的样本筛选。

汉族12个STR位点群体遗传学调查

目的240个汉族无关个体12个STR位点基因频率调查及其法医学应用;方法采用12位点复合扩增及变性聚丙烯酰胺凝胶电泳基因分型;结果该系统12个STR基因位点在汉族人群中均为高识别率位点,特别适合于陈旧血痕检验;结论12位点STR-PCR复合扩增系统检测方法简便,经济实用,在法医个体识别和亲子鉴定中具有应用价值。

豚鼠心脏5—HT能神经的观察

本文用免疫金银法对豚鼠心脏5-HT能神经进行了研究。除心内膜外,整个心壁都有5-HT能神经元和神经纤维。神经细胞的形态和大小各不相同。这些表明,心脏的功能受5-HT能神经所调节。

甘蓝型油菜银染mRNA差别显示条件的建立及优化

mRNA差异显示技术是分析差异表达基因的强有力的工具。本实验针对油菜差别显示体系筛选优化,最终获得了差别显示体系。研究结果为:RNA模板在2μg,反转录产物用量为1.5μl时,可以扩增出较多且清晰的条带;PCR退火温度在40℃扩增条带清晰。该体系用于甘蓝型油菜低磷胁迫前后基因差异表达研究稳定可靠。

羊耳蒜遗传多样性研究中AFLP反应体系的建立与初步应用

为研究羊耳蒜种质资源遗传多样性,建立并初步应用羊耳蒜AFLP反应体系。以羊耳蒜幼嫩叶片为材料,采用常规SDS法提取基因组DNA,通过优化AFLP反应体系中的几个关键因素,建立适合羊耳蒜的AFLP银染反应体系,并利用筛选出的引物组合对羊耳蒜的遗传多样性进行初步研究。经EcoRⅠ和MseⅠ酶组合37℃酶切3h后可将500ng基因组DNA完全切开;酶切产物和接头经16℃连接过夜后,用带有1个选择性碱基的预扩引物和带有3个选择性碱基的选扩引物分别进行扩增,扩增产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染,能够得到清晰的扩增图谱。3对引物组合对8个羊耳蒜种群共185个体的扩增共得到221条条带,其中多态性条带195条,多态性条带百分率为88.24%。本研究结果表明建立的AFLP反应体系可用于羊耳蒜种质资源遗传多样性研究。

棉花银染mRNA差异显示分析体系的建立及优化

mRNA差异显示(mRNA differential display)技术是筛选差异表达基因的有效方法。本研究优化了棉花mRNA的银染差异显示体系,以陆地棉苏棉12为材料,分别提取叶片和开花期后10 d左右的纤维中的总RNA,利用差显技术筛选出了在棉花纤维中差异表达的cDNA片段。

Warthin-Starry银染色与Grams染色在诊断组织中幽门螺杆菌感染的作用比较

目的比较WarthinStarry(WS)银染色与Grams染色在组织学诊断幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,HP)感染中的作用。方法HE染色法判断所选组织的病理分型并进行分组;用WS银染色法结合Grams染色法判断所选组织HP的感染状况,比较两种不同染色方法的染色结果。结果WS银染色结果阳性率为85.5%,Grams染色结果阳性率为87.74%,两者比较差别无统计学意义(P>0.05)。结论WS银染色与Grams染色在组织学诊断HP感染中的作用无显著性差别,Grams染色可用于胃组织石蜡切片中HP感染的检查。

肾盂输尿管连接处的临床解剖学观察

目的为肾盂输尿管连接处(UPJ)的形态学定位提供临床应用解剖学研究资料。方法取材于32例10%福尔马林固定的成人尸体双侧泌尿系标本,进行大体测量、组织学染色、神经纤维银染和图像分析。结果 UPJ外径(3.12±0.81)mm和内径(2.26±0.15)mm分别小于肾盂中部和输尿管中部的各自相应值(P<0.05)。UPJ神经纤维分布比肾盂中部和输尿管中部稀疏,胶原纤维较丰富。UPJ肌层厚度(0.34±0.03)mm和管壁厚度(0.63±0.04)mm也分别小于肾盂中部和输尿管中部各自相应值(P<0.05)。肾倾斜角平均为61°,与肾倾斜角有关的UPJ位置平均在肾下极平面以上1.2～1.3cm处,且肾倾斜角越大,UPJ位置相对越高。结论 UPJ约位于距肾下极平面以上1.25cm处。UPJ存在生理性内、外径狭窄,神经纤维分布较稀疏,平滑肌较薄弱,且排列不规则。

免疫金银染色法在病理诊断中的应用

本文报告１３４例使用免疫金银染色法的检查结果，并对免疫金银染色法在病理诊断中的应用从方法到结果进行了讨论。本研究采用间接免疫金银染色法和直接免疫金银染色法。结果表明，几种单克隆抗体阳性反应总是与其来源的病变组织相联系，抗细胞角蛋白抗体阳性见于角化性疾病和鳞状细胞癌；抗五羟色胺抗体阳性见于一例胃炎癌伴未分化癌。基于本法方法简单，特异性强，敏感性高，作者提出可用于基层医院以提高病理诊断水平。

应用PCR-SSCP银染技术检测结直肠癌P_53基因突变

应用PCR-SSCP银染技术检测30例结直肠癌P_53基因第5、6、7和8外显子的突变情况,结果发现16例(53.33%)发生P_53基因突变。提示:①结直肠癌普遍存在P_53基因突变。②比较传统的同位素标记PCR-SSCP技术,PCR-SSCP银染技术不仅灵敏度相当,而且简便、快速、低耗、重复性好,尤其适于大样本筛选,可在临床实验室中推广。

银染法观察铜绿假单胞菌生物被膜

目的评估银染法鉴定铜绿假单胞菌生物被膜的效果。方法体外平板法制备铜绿假单胞菌生物被膜模型,用银染法观察鉴定。结果银染后普通光学显微镜和扫描电镜观察铜绿假单胞菌生物被膜。结论银染法鉴定铜绿假单胞菌生物被膜简单可靠。