从我国进口奶牛及其后代中发现牛免疫缺陷病毒（BIV）的自发感染

牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）在牛群中的自发感染，已先后在一些国家发现。本文首次报道了ＢＩＶ在我国进口奶牛及其后代中的存在。当以ＴｒｐＥ－ｐ２６融合蛋白做抗原，应用蛋白质印迹法对我国近年进口牛及其后代进行检测时，在所检测的６８９份样品中，检出阳性样品１６份，阳性率为２．３２％。这一结果已经ＴｒｐＥ－ｇｐ４５做抗原的蛋白质印迹法、反转录酶序列（ＲＴ）的ＰＣＲ反应及其产物的狭缝杂交所确证。检测为阳性的牛已被隔离，有关病毒的分离鉴定和基因组功能片段的克隆等工作正在进行中。

大鼠浅Ⅱ度烫伤创面EGF及受体基因的表达

取大鼠浅Ⅱ度烫伤后1、3、5、7、10d和14d及正常对照（脱毛未烫伤）的皮肤样本，采用核酸分子斑点杂交技术，观察表皮生长因子（EGF）及其受体（EGF－R）的基因表达。结果发现：EGF基因表达水平于伤后第3d明显增强，第5d达高峰；EGF受体基因表达水平于伤后第1d即明显增强，伤后第5d恢复正常。提示内源性EGF及其受体参与了调控创面修复，因子和受体之间相互制约，避免细胞过度增生。

人乳头瘤病毒与呼吸道肿瘤关系的研究Ⅰ．HPV与喉癌的关系

应用α－３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记ＨＰＶ－１１及ＨＰＶ－１６ＤＮＡ为探针，以Ｓｌｏｔｂｌｏｔ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ两种核酸杂交技术，检测了取自青岛及北京两个地区的３７例喉鳞癌组织ＤＮＡ中ＨＰＶ－１１及ＨＰＶ－１６ＤＮＡ相关序列。结果表明，Ｓｌｏｔｂｌｏｔ杂交中，与ＨＰＶ－１１探针杂交阳性者占８６％（３２／３７），与ＨＰＶ－１６探针杂交阳性者占８１％（３０／３７）。在同一癌组织中，与两型探针同时呈现阳性者占８１％（３０／３７）。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交中，与所用探针ＤＮＡ的内切酶ＰｓｔⅠ酶切图谱比较，有４６％（１３／２８）与ＨＰＶ－１６ＤＮＡ的酶切图谱相同，可定为ＨＰＶ－１６型。当用ＨＰＶ－１１探针时无一例出现与ＨＰＶ－１１相同的图谱。提示喉癌的发生与ＨＰＶ－１６有关。

白细胞介素-2对大鼠海马谷氨酸能神经元和γ-氨基丁酸能神经元的影响———免疫组织化学和狭线杂交研究

本研究应用免疫组织化学（ＰＡＰ法）的方法，观察到侧脑室内注射白细胞介素２（ＩＬ２）后，大鼠海马回和齿状回内谷氨酸（Ｇｌｕ）免疫反应阳性神经元的数量明显减少、胞体皱缩、突起及其分支减少；γ氨基丁酸（ＧＡＢＡ）免疫反应阳性神经元的数量、突起及其分支皆减少。用３２Ｐ标记的ＧＡＢＡＴｃＤＮＡ探针对大鼠海马组织的ＧＡＢＡＴｍＲＮＡ进行狭线杂交结果显示：实验组大鼠海马组织的ＧＡＢＡＴｍＲＮＡ的含量明显增多。由于ＧＡＢＡ在ＧＡＢＡＴ的作用下，可转变为Ｇｌｕ，因此，以上结果表明ＩＬ２不仅可影响海马神经元合成和释放Ｇｌｕ和ＧＡＢＡ，而且还使Ｇｌｕ的释放量大于其合成量。

尖锐湿疣中人乳头瘤病毒DNA检测及存在情况初探

尖锐湿疣的发病与人乳头瘤病毒密切相关。本文用打点杂交法检测了28例尖锐湿疣病理标本,其中14例与HPV-11探针杂交阳性,阳性率50%(14/28)。对其中杂交信号较强的9例进一步分别用BamI Ⅱ、PstI酶解,Southem转印后与HPV-11探针杂交,对病毒DNA存在形式进行分析,结果证实HPV-11在尖锐湿疣细胞中主要以游离形式存在。

牛免疫缺陷病毒(BIV)在中美两国流行情况的比较(英文)

牛免疫缺陷病毒是反转录病毒科慢病毒属的重要成员，已在一些国家相继发现ＢＩＶ的感染和蔓延。本文以重组ＢＩＶ衣壳蛋白和包膜蛋白为抗原，通过免疫印迹技术发现，不仅我国进口奶牛及其后代存在一定比例的ＢＩＶ感染（血清阳性率为２．３２％），而且ＢＩＶ已开始在我国北方牛群中传播（阳性率约３．８％）。上述结果已被聚合酶链式反应及其产物的狭缝杂交所证实，并与美国中部及南部地区ＢＩＶ流行情况进行了比较。

老年期痴呆患者血清Tau蛋白免疫印迹分析

目的 探讨血清Tau蛋白水平对老年期痴呆患者临床诊断的意义.方法 应用单克隆抗Tau蛋白抗体(Anti-Tau l)和免疫狭缝印迹(ISB)技术对112例老年期痴呆患者[Alzheimer病(AD)75例、多发性梗塞性痴呆(MID)37例]和24名年龄配对的老年健康人的血清测定Tau蛋白水平,用分子分析仪并联计算机(IBM)扫描进行分析,血清Tau蛋白的相对浓度以校准强度(CI)表示.结果 本研究显示老年期痴呆患者组的血清Tau蛋白含量(CI值:总计=0.114±0.03,AD=0.110 ±0.03,MID=0.123 ±0.04)与对照组(CI值为0.116±0.04)的差异无显著性(P值均>0.05),也不受有或无apo E_4等位基因(∈_4)的影响.结论 在临床上诊断老年期痴呆时,有必要采用相同技术对脑脊液(CSF)中的和血清中的Tau蛋白进行同步分析比较.

应用RPSB杂交法进行微量标本中基因扩增检测

采用重复序列ＰＣＲ将引物间多种基因序列目标“放大”，继而通过狭缝杂交，用特异基因探针在微量标本中可检测基因的扩增。采用本法对２０份食管癌家族标本进行ｃ－ｍｙｃ基因扩增检测，其结果与双ＰＣＲ法所得一致。

转基因马铃薯植株中外源基因PCR扩增和拷贝数测定

本文报道一种简便、快速、可靠，同时又适合大量转基因植株中外源基因测定的ＰＣＲ检测技术，同时改进了转基因植物中总ＤＮＡ提取方法，并且用窄缝转移杂交（ｓｌｏｔｂｌｏｔ）测定了转基因植株中外源基因拷贝数。

地高辛标记核酸探针检测重组人白细胞介素1受体颉颃剂中DNA残余量的研究

试验旨在建立重组人白细胞介素1受体颉颃剂(interleukin-1receptor antagonist,IL-1ra)原液中宿主菌DNA残余量的检测方法。以重组白细胞介素1受体颉颃剂工程菌基因组DNA为模板,优化试验条件,借助超声波手段,制备地高辛标记的核酸探针,并以此探针进行狭缝杂交及显色反应。结果显示,在24批次重组人IL-1ra原液中,每人份使用剂量的宿主DNA残余量均小于10ng。结果表明,该方法灵敏度较高、特异性较强、重复性较好、操作步骤安全且较为方便,可用于重组人IL-1ra原液及半成品的DNA残余检测。

生物素掺入PCR产物的反向杂交技术分析HLA基因型

本文介绍了与常规生物素或荧光标记引物不同，以及与同位素掺入ＰＣＲ产物不同的反向杂交技术，研究了生物素最佳掺入条件，测出加尾探针联结到尼龙膜上所需紫外光的强度，比较了生物素５＇端标记引物与生物素掺入ＰＣＲ产物的显色灵敏度，并根据实验测得的最佳条件分析了３个标准细胞株ＨＬＡ－ＤＰＢ_１基因型。

人白细胞介素6cDNA克隆的分离与鉴定

我们从重组的人α干扰素处理的单层HeLa细胞常规提取Poly(A)^+RNA作为逆转录合成cDNA第一链之模板,用引物-适配接头法在噬菌质粒pTz19R中构建cDNA文库。以^(32)p-标记的480bpIL-6cDNA片段作探针进行菌落原位及狭缝印迹杂交,筛选出6个阳性克隆。其中两个克隆并用限制酶切分析及DNA序列测定做进一步鉴定。结果证明,一个克隆的cDNA片段长1.3kb,含有人白介素6全长编码区;另一个的cDNA插入片段为0.9kb,缺乏信号肽及成熟IL-6N端30个残基的编码序列。

Ki-ras CODON 12 MUTATION IN HUMAN COLORECTAL CARCINOMAS

We examined the incidence of point mutation in codon 12 of Ki-ras oncogene in human colorectal carcinomas by polymerase chain reaction in combination with alot-blot hybridization using mutation-specific ollgodeoxynucleotide as probes. Among 72 colorectal carcinomas, point mutations were found in 36 samples, GGT to TGT in 16 cases and to AGT In 21 cases, one sample contain two different mutations. One of five normal mucosa contains the same mutation as in the adjacent carcinoma, suggesting that genetic alterations may also exist in the regions from which such carcinomas arise.

免疫学因素对重症肌无力患者外周血单个核细胞糖皮质激素受体的影响

目的 探讨重症肌无力 (MG)患者外周血单个核细胞 (PBMC)糖皮质激素受体 (GR)数改变的可能机制。方法 13例MG患者及 11例正常对照PBMC在体外与乙酰胆碱受体 (AChR)、IFN γ或AChR +IFN γAb孵育前后同时测定PBMCGR数及GRmRNA含量。3H 地塞米松 (3H Dex)放射配体法测定GR数 ,狭缝印迹杂交法测定GRmRNA量 ,以 β actincDNA为内对照。同时 ,ELISA法测定患者血浆中的IFN γ含量及AChRAb水平。结果 正常对照PBMC分别在AChR、IFN γ、AChR +IFN γAb中培养后其GR数虽有降低 ,但未达到统计学意义 (P >0 .0 5 )。MG患者PBMC的GR数在AChR及IFN γ中培养后明显降低 (与培养前相比 ,前者P <0 .0 5 ,后者P <0 .0 1) ,而在AChR +IFN γAb中培养后则无明显改变 (P >0 .0 5 )。正常对照PBMC分别在AChR、IFN γ、AChR +IFN γAb中培养后其GRmRNA无显著降低 (P >0 .0 5 )。MG患者PBMC的GRmRNA在AChR及IFN γ中培养后与培养前相比明显降低 (前者P <0 .0 5 ,后者P <0 .0 1) ,而在AChR +IFN γAb中培养后则无明显改变 (P >0 .0 5 )。MG患者的血浆中IFN γ及AChRAb水平均显著高于正常对照 (前者P <0 .0 1;后者P <0 .0 5 )。MG患者的IFN γ含量与AChRAb水平间具有良好的正相关关系 (r=0 .92 ,P <0 .0 1)。MG患者的PBMC在体?

梅毒包膜脂蛋白基因的克隆、表达及临床抗体的检测

目的:克隆tp15、tp17、tp47、tp0453基因,构建原核表达质粒,进行蛋白的表达、纯化并用于检测梅毒病人血清抗体。方法:PCR扩增4个基因,构建原核表达质粒pET28a(+)/tp15、pET28a(+)/tp17、pGEX-6P-1/tp47和pGEX-6P-1/tp0453,经双酶切及测序鉴定,将获得的阳性克隆转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳及Western blot分析鉴定,利用亲和层析方法对4个蛋白进行纯化。将四个纯化的蛋白固定到NC膜上,利用immuno-slot blot方法对梅毒病人血清进行检测。结果:经鉴定表明成功构建四个原核表达质粒。SDS-PAGE电泳及Western blot分析结果显示四个重组蛋白大小正确。immuno-slot blot实验显示四个蛋白能与梅毒病人血清特异性结合。结论:成功克隆、表达和纯化了tp15、tp17、tp47、tp0453蛋白,四个蛋白可以与梅毒病人血清特异性结合,为进一步建立梅毒病人血清检测试剂盒奠定基础。

用竞争性RT-PCR方法定量检测p53基因的表达

目的：建立定量检测ｐ５３基因表达的方法。方法：采用竞争性逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法定量检测了组织和细胞内抑癌基因ｐ５３ｍＲＮＡ含量的变化，同时用狭线杂交的方法进行了对照。结果：竞争性ＲＴ－ＰＣＲ和狭线杂交均反映了ｐ５３基因表达变化的趋势，两者的结果相吻合。与狭线杂交相比，竞争性ＲＴ－ＰＣＲ具有灵敏度高、专一性好、简便、快速等特点，尤适合于定量检测微量样品和表达水平较低的基因。结论：竞争性ＲＴ－ＰＣＲ是一种较好的定量检测基因表达水平的方法。