Linc-smad7通过靶向miR-125b/SIRT1轴促进胰腺癌细胞迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA smad7(long non-coding RNA smad7,Linc-smad7)对胰腺癌(pancreatic cancer,PC)细胞侵袭、迁移的作用及其作用机制。方法qRT-PCR检测PC组织及细胞系中Linc-smad7的表达;Transwell小室观察过表达Linc-smad7对PaCa-2细胞迁移、侵袭能力的影响;荧光素酶报告基因检测Linc-smad7对miR-125b,以及miR-125b对沉默调节蛋白1(Sirtuin1,SIRT1)的结合作用;qRT-PCR检测Linc-smad7在PaCa-2细胞中对miR-125b表达的调控作用,qRT-PCR、Western blotting检测miR-125b对SIRT1表达的调控作用。结果Linc-smad7在PC组织及细胞系中明显升高;Linc-smad7表达上调的PaCa-2细胞迁移、侵袭能力增强,miR-125b表达下降;miR-125b表达上调后,SIRT1表达显著下降;荧光素酶报告基因结果提示Linc-smad7直接靶向结合miR-125b,miR-125b直接结合SIRT1;过表达Linc-smad7或是下调miR-125b表达可逆转SIRT1沉默对PaCa-2细胞侵袭、迁移能力的影响。结论Linc-smad7通过miR-125b/SIRT1轴促进PaCa-2细胞侵袭和迁移。

健脾化瘀方调控TGF-β1/Smad7通路逆转肝细胞癌上皮间质转化及血管生成

目的探讨健脾化瘀方(人参、茯苓、白术、丹参等)通过TGF-β1/Smad7通路对肝细胞癌上皮间质转化(EMT)及血管生成的调控作用。方法(1)采用BALB/C-nu裸鼠建立Hep3B荷瘤小鼠模型,随机分为对照组及健脾化瘀方低、中、高剂量组(3.844、7.689、15.378 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组5只。灌胃给药,每日1次,连续给药21 d。(2)将Hep3B细胞分为空白组、造模组(10 ng·mL^(-1)TGF-β1)、低浓度组(10 ng·mL^(-1)TGF-β1+4 mg·mL^(-1)健脾化瘀方)、高浓度组(10 ng·mL^(-1)TGF-β1+6 mg·mL^(-1)健脾化瘀方),TGF-β1诱导48 h后更换为相应浓度的健脾化瘀方完全培养液(0、4、6 mg·mL^(-1))继续培养24 h。(3)将HUVEC细胞分为正常组、模型组、中药组、模型加中药组。正常组细胞用不含TGF-β1的条件培养基培养;模型组细胞用含TGF-β1的条件培养基培养;中药组细胞用含有4 mg·mL^(-1)健脾化瘀方但不含TGF-β1的条件培养基培养;模型加中药组细胞用含4 mg·mL^(-1)健脾化瘀方且含TGF-β1的条件培养基培养。继续培养24 h后收集细胞进行后续实验。(4)计算Hep3B荷瘤裸鼠皮下移植瘤的瘤质量指数和抑瘤率;采用免疫荧光法检测荷瘤裸鼠皮下移植瘤中CD31的表达;免疫组化法检测荷瘤裸鼠皮下移植瘤的微血管密度;细胞划痕实验检测Hep3B细胞的迁移能力;Transwell实验检测Hep3B/HUVEC细胞的侵袭能力;检测HUVEC细胞小管形成能力;Western Blot法检测荷瘤裸鼠皮下移植瘤、Hep3B及HUVEC细胞中相关蛋白的表达水平。结果(1)与对照组比较,健脾化瘀方中、高剂量组荷瘤裸鼠皮下移植瘤质量及瘤质量指数显著降低(P<0.01);低、中、高剂量组荷瘤裸鼠皮下移植瘤中CD31的表达量及微血管密度显著降低(P<0.05,P<0.01),VE-cadherin、EphA2、N-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01),E-cadherin、Smad7蛋白表达显著上调(P<0.01)。(2)与空白组比较,造模组的Hep3B细胞的相对迁移率明显升高(P<0.05),侵袭细胞数显著增加(P<0.01);Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.01),E-cadherin、Smad7蛋白表达显著下调(P<0.01)。与造模组比较,健脾化瘀方低、高浓度组Hep3B细胞的相对迁移率显著降低(P<0.01),侵袭细胞数显著减少(P<0.01);Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.01),E-cadherin、Smad7蛋白表达显著上调(P<0.01)。(3)与正常组比较,模型组HUVEC细胞形成的小管分支点数显著增多(P<0.01),小管分支长度及侵袭细胞数显著增加(P<0.01);VE-cadherin、EphA2蛋白表达显著上调(P<0.01),Smad7蛋白表达显著下调(P<0.01)。与模型组比较,模型加中药组HUVEC细胞形成的小管分支点数显著减少(P<0.01),小管分支长度显著缩短(P<0.01),侵袭细胞数显著减少(P<0.01);VE-cadherin、EphA2蛋白表达显著下调(P<0.01),Smad7蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论健脾化瘀方可明显抑制肝细胞癌的生长、侵袭与迁移,可能与通过调控TGF-β1/Smad7通路介导的EMT及血管生成有关。

血清miR-33a-5p、SMAD7水平与视网膜静脉阻塞患者视力预后的关系

目的观察视网膜静脉阻塞患者血清微小核糖核酸-33a-5p(miR-33a-5p)、SMAD同源物7(SMAD7)水平变化,并探讨二者与视力预后的关系。方法选择视网膜静脉阻塞患者108例(观察组),同期体检健康的志愿者108例(对照组),采集所有研究对象清晨空腹外周静脉血,离心留取血清,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-33a-5p,采用ELISA法检测血清SMAD7。比较两组血清miR-33a-5p、SMAD7水平,分析视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p、SMAD7水平的关系。所有视网膜静脉阻塞患者予雷珠单抗玻璃体腔内注射治疗。治疗3个月,评估视力,其中预后不良57例、预后良好51例。采用多因素Logistic回归模型分析视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-33a-5p、SMAD7水平对视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的预测价值。结果观察组血清miR-33a-5p水平低于对照组,血清SMAD7水平高于对照组(t分别为13.362、38.657,P均<0.01)。Pearson相关分析显示,视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p水平与血清SMAD7水平呈负相关(r=-0.649,P<0.05)。单因素分析显示,视网膜静脉阻塞患者视力预后不良者合并高血压、高血脂比例和有并发症比例以及血清SMAD7水平均高于其预后良好者(χ^(2)/t分别为13.412、7.342、10.095、6.394,P均<0.05),血清miR-33a-5p水平低于其预后良好者(t=7.373,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高和合并高血压、高血脂以及有并发症是视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的独立危险因素(OR分别为0.683、3.843、2.146、1.463、2.773,P均<0.05)。血清miR-33a-5p、SMAD7水平预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.870、0.869,二者联合预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的AUC为0.938。血清miR-33a-5p、SMAD7水平联合预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的AUC高于二者单独(Z分别为2.419、2.422,P均<0.05)。结论视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高;血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高是视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的独立危险因素;血清miR-33a-5p、SMAD7水平对视网膜静脉阻塞患者视力预后不良均有一定预测价值,二者联合预测价值更高。

心房颤动患者TGF-β1/Smad2、smad7信号通路在心房肌重构表达的研究

目的探讨TGF-β1信号通路中的Smad2、smad7表达分布变化与房颤纤维化的发生、发展的关系。方法选取2018年1月至2020年12月于我院行心脏外科手术患者52例,按病变性质分为房颤组24例(RAF)和窦律组28例(RSR),通过检测心外科手术患者房颤及窦性心律组右心房组织中的Smad2、smad7、纤维化因子Fibronectin的表达,比较Smad2、smad7表达量、空间分布及Fibronectin表达量变化。结果房颤患者右心房Smad2表达量明显高于窦性心律组,而smad7表达量明显低于窦性心律患者,纤维化因子Fibronectin表达量明显高于窦性心律组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TGF-β1/Smad2、smad7信号通路参与房颤心房纤维化所致结构重构。

血清Smad7及TSLP在新生儿坏死性小肠结肠炎诊断及病情判断中的价值

目的探讨血清Smad同源物7(Smad7)、胸腺基质淋巴生成素(TSLP)在新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)诊断及病情判断中的价值。方法选取2021年4月至2023年4月该院收治的98例确诊为NEC的患儿为观察组,根据病情严重程度分为重症组(38例)和轻症组(60例)。另选取同期在该院出生的98例健康新生儿为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清Smad7相对表达量,采用酶联免疫吸附试验检测血清TSLP水平;采用Spearman相关分析NEC患儿血清Smad7、TSLP水平与病情严重程度的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Smad7、TSLP水平对重症NEC的诊断价值。结果与对照组比较,观察组血清Smad7、TSLP水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与轻症组比较,重症组血清Smad7、TSLP水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清Smad7、TSLP水平与病情严重程度均呈正相关(r=0.486,P<0.001;r=0.421,P<0.001)。血清Smad7、TSLP诊断重症NEC的曲线下面积(AUC)分别为0.800、0.750,二者联合检测诊断重症NEC的AUC为0.850,二者联合检测的AUC明显大于血清Smad7、TSLP单独检测的AUC(Z=2.074,P=0.038;Z=1.974,P=0.048)。结论NEC患儿的血清Smad7、TSLP水平均上调,且与病情严重程度关系密切,二者联合检测对重症NEC具有较高的诊断价值。

miR-590-5p靶向SMAD7促进结肠癌细胞进展的机制研究

目的研究miR-590-5p在结直肠癌组织和结肠癌细胞中的表达和功能及可能相关的分子机制。方法对2022年6月—2023年12月本院收治的进行手术的结直肠癌患者进行样本采集,共收集结直肠癌组织及癌旁组织临床样本40对,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-590-5p在两者的表达情况并与临床特征进行相关性分析。通过瞬时转染进行体外细胞实验,使用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测miR-590-5p对结肠癌细胞增殖的作用,运用Transwell实验检测miR-590-5p对结肠癌细胞迁移与侵袭的影响。通过生物信息分析筛选数据库筛选miR-590-5p的靶基因SMAD7,分别采用双荧光素酶实验、qPCR和蛋白质免疫印迹实验(western blot)验证二者的作用及相关性。结果结直肠癌组织中miR-590-5p的表达水平与结直肠癌的临床分期、神经脉管侵犯情况和淋巴结转移数目情况存在正相关关系;过表达miR-590-5p会提高结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),而抑制miR-590-5p表达后结果则相反(P<0.05);双荧光素酶实验结果表明SMAD7是miR-590-5p的一个靶基因,qPCR实验和western blot实验结果则表明二者存在负相关关系。结论miR-590-5p在进展期结直肠癌中可能扮演着积极的角色,其可能通过靶向SMAD7促进结肠癌细胞的增殖、迁移与侵袭。

丹荔输通汤对慢性输卵管炎性阻塞模型大鼠CTGF、Smad7的影响

目的探讨丹荔输通汤对慢性输卵管炎性阻塞的治疗与作用机制。方法以SD大鼠为观察对象,随机选取11只为空白组,其余以苯酚明胶化学法制作慢性输卵管炎性阻塞模型,造模成功后,将造模后大鼠随机分为模型组、丹荔输通汤高剂量灌胃+灌肠组、丹荔输通汤中剂量灌胃+灌肠组、丹荔输通汤低剂量灌胃+灌肠组、丹荔输通汤中剂量灌胃组及阿奇霉素混悬液灌胃对照组,每组11只。实验处理30 d后,处死各组大鼠,取输卵管组织,经病理检测观察输卵管组织的组织形态变化,以逆转录-实时定量聚合酶链反应、Western blot检测输卵管组织Smad7、结缔组织生长因子(CTGF)在大鼠输卵管组织的表达。结果病理检测发现造模成功,经药物治疗后,输卵管局部组织形态趋于正常,输卵管积水、积脓消失。丹荔输通汤各剂量组均能明显降低模型组大鼠输卵管组织CTGF表达,上调Smad7表达,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05),且丹荔输通汤高剂量灌胃+灌肠组、丹荔输通汤中剂量灌胃+灌肠组对大鼠输卵管组织Smad7、CTGF的影响优于丹荔输通汤低剂量灌胃+灌肠组。对于丹荔输通汤中剂量的不同用药方式上:与丹荔输通汤中剂量灌胃组相比,丹荔输通汤中剂量灌胃+灌肠组大鼠输卵管组织Smad7、CTGF相对表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论丹荔输通汤可能通过调节输卵管组织的CTGF及Smad7表达发挥治疗作用,从而减轻局部组织炎性反应,改善局部组织纤维化,从而恢复输卵管正常组织形态与生理功能;不同剂量丹荔输通汤对模型大鼠输卵管组织CTGF及Smad7表达影响有差异。

肾衰营养胶囊对肾性骨病模型大鼠肾功能和骨代谢的改善作用及其对BMP-7/Smads信号通路的影响

目的:探讨肾衰营养胶囊对肾性骨病模型大鼠的改善作用及其对骨形态发生蛋白(BMP)-7/Smads信号通路的影响,阐明肾性骨病模型大鼠肾功能和骨代谢与肾性骨病的关系。方法:选取50只SPF级SD大鼠,随机选取10只大鼠作为对照组,另外40只大鼠建立肾性骨病模型。将30只造模成功大鼠分为模型组、阳性对照组和肾衰营养胶囊组,每组各10只。对照组和模型组大鼠采用生理盐水灌胃,阳性对照组大鼠给予0.01 mg·kg^(-1)骨化三醇灌服,肾衰营养胶囊组大鼠给予1.2 g·kg^(-1)肾衰营养胶囊灌服,均灌胃12周。采用HE染色观察各组大鼠股骨组织病理形态表现,全自动生化分析仪和化学发光法检测各组大鼠血清中肾功能和钙磷代谢指标,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠股骨组织中BMP-7和Smad1/5/8 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组大鼠股骨组织中BMP-7、磷酸化BMP-7(p-BMP-7)、Smad1/5/8和磷酸化Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)蛋白表达水平。结果:HE染色,对照组大鼠骨小梁排列正常,成骨细胞和类骨质面积未发生改变;模型组大鼠骨小梁宽度和平均类骨质面积增加,成骨细胞数量减少;阳性对照组和肾衰营养胶囊组大鼠骨小梁宽度及平均类骨质面积减小,成骨细胞数量增加。与对照组比较,模型组大鼠血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平均升高(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组和肾衰营养胶囊组大鼠BUN及Scr水平均降低(P<0.05);与阳性对照组比较,肾衰营养胶囊组大鼠BUN和Scr水平均降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠血清中钙离子(Ca2+)水平降低(P<0.05),磷离子(P3-)、甲状旁腺激素(PTH)和碱性磷酸酶(ALP)水平均升高(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组和肾衰营养胶囊组大鼠血清中Ca2+水平升高(P<0.05),P3-、PTH和ALP水平均降低(P<0.05);与阳性对照组比较,肾衰营养胶囊组大鼠血清中Ca2+水平升高(P<0.05),P3-、PTH和ALP水平均降低(P<0.05)。RT-qPCR法,与对照组比较,模型组大鼠股骨组织中BMP-7和Smad1/5/8mRNA表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,阳性对照药组和肾衰营养胶囊组大鼠股骨组织中BMP-7及Smad1/5/8 mRNA表达水平升高(P<0.05);与阳性对照组比较,肾衰营养胶囊组大鼠股骨组织中BMP-7和Smad1/5/8 mRNA表达水平升高(P<0.05)。Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠股骨组织中BMP-7、p-BMP-7、Smad1/5/8和p-Smad1/5/8蛋白表达水平均降低(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组和肾衰营养胶囊组大鼠股骨组织中BMP-7、 p-BMP-7、 Smad1/5/8和p-Smad1/5/8蛋白表达水平均升高(P<0.05);与阳性对照组比较,肾衰营养胶囊组大鼠股骨组织中BMP-7、p-BMP-7、Smad1/5/8和p-Smad1/5/8蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论:肾衰营养胶囊可改善肾性骨病模型大鼠的肾功能和钙磷代谢紊乱,促进骨髓基质细胞增殖,改善骨代谢情况,其机制可能与激活BMP-7/Smads信号通路有关。

沉默SMAD 家族成员3( SMAD3) 促进类风湿性关节炎巨噬细胞M2 极化和SMAD7 表达

目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默SMAD家族成员3(SMAD3)对类风湿性关节炎(RA)巨噬细胞极化及转化生长因子β1(TGF-β1)/SMAD家族信号通路的影响。方法以巨噬细胞与类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)共培养为细胞模型,TGF-β1刺激巨噬细胞后,将SMAD3特异性siRNA(si-SMAD3)和阴性对照siRNA(si-NC)转染TranswellTM小室共培养的人RA巨噬细胞,实时荧光定量PCR检测SMAD3 mRNA表达,Western blot法分别检测TGF-β1、SMAD3和SMAD7蛋白的表达;ELISA测定细胞培养上清液中TGF-β1、白细胞介素23(IL-23)的含量;CCK-8法检测细胞增殖情况;TranswellTM小室测定细胞的迁移。结果与模型组和si-NC组相比,沉默SMAD3后,RA巨噬细胞中TGF-β1、SMAD3 mRNA和蛋白表达显著下降,IL-23的分泌明显减少,细胞增殖活性及细胞迁移受到抑制,SMAD7高表达。结论敲低SMAD3促进RA巨噬细胞M2极化及SMAD7表达。

SMAD7、SMAD9与肺腺癌患者预后及免疫浸润的相关性分析

目的 本研究旨在探讨SMAD7、SMAD9在肺腺癌中的预后价值及其与免疫浸润的相关性。方法 借助GEPIA数据库预测SMAD家族成员在肺腺癌组织与癌旁组织中的表达水平,筛选差异表达的成员作为关键基因纳入研究。分析关键基因对肺腺癌患者预后的影响,GEPIA与TIMER数据库分析关键基因与免疫浸润的相关性。收集108例手术切除的肺腺癌患者组织,使用qRT-PCR验证关键基因在组织内的表达水平。分析关键基因对患者5年生存率的影响及影响生存率的独立预测因素。结果 GEPIA数据库预测结果显示,相对于正常组织样本,SMAD7、SMAD9在癌组织样本中的表达降低(P均<0.05)。GEPIA数据库预测结果显示SMAD7、SMAD9低表达水平患者总生存率低于SMAD7、SMAD9高表达水平患者(P均<0.05)。TIMER网站预测结果显示SMAD7与B细胞、CD4^(+)T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞水平均呈正相关(P均<0.05),SMAD9与B细胞、CD4^(+)T细胞、巨噬细胞水平呈正相关(P均<0.05)。GEPIA网站显示SMAD7与CD115、CD86、CD68、CCL2、IRF5呈正相关(P均<0.05),SMAD9与CCL2、IRF5呈正相关(P均<0.05)。相对于癌旁组织中SMAD7(1.00±0.27)、SMAD9(1.00±0.31)的表达,癌组织中SMAD7(0.76±0.24)、SMAD9(0.81±0.22)的表达降低(P均<0.05)。SMAD7、SMAD9低表达患者的5年总生存率低于高表达患者(P均<0.05)。Cox分析结果显示,淋巴结转移、T3+T4分期、组织学Ⅲ级与SMAD7、SMAD9水平是影响患者总生存时间的独立风险因素(P均<0.05)。结论 SMAD7、SMAD9是预测肺腺癌不良预后的潜在生物分子,与免疫浸润水平相关,可能参与免疫细胞调节。

帕立骨化醇对肾性骨病大鼠骨代谢及TGF-β/BMP-7/Smad通路的影响

目的:探讨帕立骨化醇对肾性骨病(ROD)大鼠骨代谢及转化生长因子-β(TGF-β)/骨形态发生蛋白-7(BMP-7)/Smad通路的影响。方法:将90只大鼠随机分为6组:对照组、模型组、帕立骨化醇低剂量(0.2μg/kg)组、帕立骨化醇中剂量(0.4μg/kg)组、帕立骨化醇高剂量(0.8μg/kg)组、骨化三醇(10μg/kg)组,每组15只,对照组大鼠以普通饲料喂养,其余各组大鼠用含有腺嘌呤的饲料喂养,诱导建立ROD模型。分组进行药物治疗后,测定各组大鼠肾功能指标血尿素氮(BUN)与血肌酐(Scr)水平、血钙与血磷水平、股骨骨密度(BMD)、股骨生物力学指标最大载荷、弹性模量与屈服载荷、血清炎症因子IL-6、IL-17水平;采用蛋白免疫印迹法检测骨组织TGF-β/BMP-7/Smad通路蛋白表达情况。再次取45只大鼠随机分为3组:帕立骨化醇(0.8μg/kg)组、TGF-β抑制(LY2157299,150 mg/kg)组、帕立骨化醇(0.8μg/kg)+TGF-β抑制(LY2157299,150 mg/kg)组,每组15只,同样方法建立ROD模型。分组以药物治疗后,测定各组大鼠肾功能指标与股骨生物力学指标水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠血钙水平、BMD、弹性模量、最大载荷、屈服载荷、骨组织TGF-β/BMP-7/Smad通路蛋白TGF-β及BMP-7表达、p-Smad3/Smad3显著降低(P<0.05),BUN与Scr水平、血磷水平、血清IL-6与IL-17水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,帕立骨化醇低、中、高剂量组和骨化三醇组大鼠血钙水平、BMD、弹性模量、最大载荷、屈服载荷、骨组织TGF-β/BMP-7/Smad通路蛋白TGF-β及BMP-7表达、p-Smad3/Smad3均升高,BUN与Scr水平、血磷水平、血清IL-6与IL-17水平均降低,且帕立骨化醇各组之间呈剂量依赖性(P<0.05),帕立骨化醇高剂量组和骨化三醇组比较,大鼠各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与帕立骨化醇+TGF-β抑制组比较,帕立骨化醇组大鼠肾功能指标BUN、Scr与血磷水平降低(P<0.05),血钙水平、BMD、弹性模量、最大载荷、屈服载荷升高(P<0.05);TGF-β抑制组大鼠肾功能指标BUN、Scr与血磷水平升高(P<0.05),血钙水平、BMD、弹性模量、最大载荷、屈服载荷降低(P<0.05)。结论:帕立骨化醇可通过激活TGF-β/BMP-7/Smad信号通路抑制炎症反应,改善ROD大鼠肾功能及骨代谢异常,降低血磷水平,提高血钙水平及骨密度,修复骨生物力学,改善骨病症状。

糖通饮靶向microRNA-21调控Smad7、PTEN抑制糖尿病肾病肾纤维化

目的:探讨糖通饮抑制糖尿病肾病肾纤维化的作用机制。方法:60只SD大鼠中随机选取10只作为正常对照组,其余采用高糖高脂饲料喂养联合STZ多次小剂量腹腔注射制备糖尿病肾病(DKD)大鼠模型,将造模成功的DKD大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦(13.5 mg/kg)阳性对照组及糖通饮低(6.21 g/kg)、中(12.42 g/kg)、高(24.84 g/kg)剂量组,每组10只,灌胃给药,1次/d,共8 w。检测各组大鼠FBG、24 h尿mAlb;HE及Masson染色观察大鼠肾组织病理学变化;Western Blot检测大鼠肾组织Smad7、PTEN、E-cadherin、FN、Vimentin、α-SMA蛋白表达;RT-PCR检测大鼠肾组织Smad7、PTEN、FN、Vimentin α-SMA、E-cadherin mRNA及miRNA-21表达。体外实验对高糖状态下HBZY-1细胞进行miRNA-21过表达慢病毒转染并予糖通饮含药血清进行干预,Western Blot法检测细胞Smad7、PTEN、α-SMA蛋白表达,RT-PCR法检测细胞miR-21、Smad7、PTEN、α-SMA mRNA表达。结果:体内实验结果显示,与模型组比较,糖通饮能显著降低DKD大鼠肾组织FN、Vimentin、α-SMA mRNA及蛋白表达,显著升高Smad7、PTEN、E-cadherin mRNA及蛋白表达,显著降低miRNA-21表达及FBG、24h尿mAlb水平(P<0.05),改善DKD大鼠肾组织病理学变化。体外实验结果显示,经miRNA-21过表达慢病毒转染后,高糖状态下HBZY-1细胞中Smad7、PTEN mRNA及蛋白表达显著降低,α-SMA mRNA及蛋白表达显著升高,糖通饮可使HBZY-1细胞中miRNA-21表达显著降低,Smad7、PTEN mRNA及蛋白表达显著升高,α-SMA mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:miRNA-21是糖通饮防治DKD的靶点之一,糖通饮可通过作用于miRNA-21进而良性调节其靶标Smad7、PTEN的表达,抑制糖尿病肾病肾纤维化。

Smad7介导TGF-β信号通路对绵羊卵泡颗粒细胞增殖的影响

【目的】卵泡发育是一个复杂的调控过程,其中绵羊卵泡颗粒细胞(granulosa cells,GCs)的增殖,分化会直接影响卵泡的发育状况。TGF-β信号通路在绵羊卵巢发育和卵泡生长过程中起着重要作用,Smad7作为TGF-β信号通路关键性的抑制基因也发挥重要作用,通过探究Smad7介导TGF-β信号通路对绵羊卵泡GCs增殖凋亡的影响,为进一步研究Smad7在卵泡GCs增殖凋亡过程中的调控作用提供依据。【方法】选取4—6月龄未怀孕的晋中健康杜湖杂交母羊20只,屠宰后采集双侧卵巢组织,分离培养卵泡颗粒细胞,FSHR细胞免疫荧光鉴定,Smad7细胞免疫荧光的表达定位,CCK8法测定细胞增殖情况,绘制生长曲线;细胞传代后外源添加不同浓度Smad7激动剂积雪草苷(asiaticoside,AS)(0、100、200、400、600 ng·mL^(-1))培养绵羊卵泡GCs,选择AS最佳作用浓度处理二代颗粒细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测TGF-β信号通路中关键基因及细胞凋亡和周期相关基因表达水平;合成3个siSmad7,转染至卵泡GCs中,选择干扰效果最佳的,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测TGF-β信号通路中关键基因及细胞凋亡和周期相关基因表达水平。【结果】Smad7在绵羊卵泡GCs中有表达;200 ng·mL^(-1) AS能极显著上调Smad7在GCs的表达(P<0.01),siSmad7-1对绵羊卵泡GCs的转染效果最佳(P<0.01);Smad7上调能显著增加TGF-β信号通路Smad4,TFDP-1和EP300的表达量(P<0.05),极显著增加TGF-β信号通路SP1的表达(P<0.01),显著增加凋亡相关基因Caspase8的表达量(P<0.05),极显著增加凋亡相关基因Caspase3和Bim的表达量(P<0.01),显著升高细胞周期相关基因P21和P27的表达量(P<0.05),极显著升高细胞周期相关基因CCND2的表达量(P<0.01),而CCND1的表达量显著降低(P<0.05);Smad7 siRNA显著降低TGF-β信号通路Smad4,TFDP-1和EP300的表达量(P<0.05),极显著降低TGF-β信号通路SP1的表达量(P<0.01),显著降低凋亡相关基因Caspase8的表达量(P<0.05),极显著降低凋亡相关基因Caspase3和Bim的表达量(P<0.01),极显著降低细胞周期相关基因P21,P27和CCND2的表达量(P<0.01),极显著升高CCND1的表达量(P<0.01);CCK8分析显示,Smad7上调,GCs的增殖率在24和48 h显著下调(P<0.01),Smad7 siRNA在24和72 h显著升高GCs的增殖率(P<0.05),在48 h极显著升高GCs的增殖率(P<0.01)。【结论】Smad7介导TGF-β信号通路抑制绵羊卵泡GCs增殖和促进细胞凋亡。

MiR-103a通过靶向SMAD7调控炎症因子对小鼠类风湿关节炎的影响

目的 分析miR-103a在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)中发挥的作用及相关机制,并探讨其成为RA治疗靶点的可能性。方法 首先,利用RT-qPCR观察miR-103a在30例RA患者和30例健康人群中的表达水平。然后,将40只小鼠随机分为对照组、骨胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis, CIA)模型组、CIA+miR-103a敲低组及空载体组,每组各10只。建模成功后,RT-qPCR检测各组小鼠血清中miR-103a的表达水平,并在miR-103a敲低组小鼠双后肢骨关节处注射含10μl miRNA-103a抑制载体的慢病毒悬液。评价各组小鼠关节组织评分,并检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、IL-6和IL-1β表达水平。最后,使用生物信息学软件预测miR-103a的下游靶mRNA,并通过双荧光素酶报告系统进行验证。结果 MiR-103a在RA患者血清中呈异常高表达状态。MiR-103a在小鼠CIA模型中的表达水平显著高于对照组,且沉默miR-103a能够显著降低CIA模型小鼠的足趾肿胀程度、关节组织评分以及血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的表达水平;双荧光素酶报告结果证实SMAD7是miR-103a下游靶基因。此外,与CIA模型组相比,miR-103a沉默组CIA小鼠中SMAD7的表达水平显著上调。结论 MiR-103a通过靶向抑制SMAD7的表达促进小鼠类风湿关节炎的发生发展,有望成为RA的临床治疗靶点。

慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者血清miR-181a和Smad7 mRNA表达变化及其临床意义

目的探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者血清微小RNA-181a(miR-181a)、Smad同源物7(Smad7)mRNA表达变化及其与病情严重程度和气道重塑的关系。方法选择AECOPD患者121例(AECOPD组),病情严重程度:轻度52例、中度46例、重度23例,同期另选慢性阻塞性肺疾病稳定期(SCOPD)患者45例(SCOPD组)、体检健康的志愿者42例(对照组)。采集所有研究对象空腹外周静脉血,离心留取血清,采用RT-qPCR法检测血清miR-181a、Smad7 mRNA表达;采用16排螺旋CT行胸部高分辨率扫描,测量气道腔内径、气道腔外径(D)、气道壁面积(WA)、气道总横截面积,计算气道壁厚度(T)与D比值(T/D)、WA占气道总横截面积百分比(WA%)。比较三组血清miR-181a、Smad7 mRNA表达和T/D、WA%,以及不同病情严重程度AECOPD患者血清miR-181a、Smad7 mRNA表达和T/D、WA%。分析AECOPD患者血清miR-181a表达与Smad7 mRNA表达的关系以及血清miR-181a、Smad7 mRNA表达与病情严重程度和气道重塑的关系。结果AECOPD组血清miR-181a、Smad7 mRNA表达均低于SCOPD组和对照组,T/D、WA%均高于SCOPD组和对照组(P均<0.05);SCOPD组血清miR-181a、Smad7 mRNA表达均低于对照组,T/D、WA%均高于对照组(P均<0.05)。随着病情严重程度增加,AECOPD患者血清miR-181a、Smad7 mRNA表达逐渐降低,T/D、WA%逐渐升高(P均<0.05)。Pearson相关分析显示,AECOPD患者血清miR-181a表达与Smad7 mRNA表达呈正相关关系(P<0.01)。Spearman相关分析显示,AECOPD患者血清miR-181a、Smad7 mRNA表达与病情严重程度和T/D、WA%均呈负相关关系(P均<0.01)。结论AECOPD患者血清miR-181a、Smad7 mRNA表达降低,二者表达变化与病情严重程度和气道重塑密切相关。

粉防己碱上调Smad7表达抑制大鼠肝星状细胞活化

目的观察低浓度粉防己碱(Tetrandrine,Tet)对培养的大鼠肝星状细胞(HSC)活化和转化生长因子β1(TGFβ1)促活化作用的影响,并探讨该作用与TGFβ1受体后信号通路的关系。方法HSC原代培养,给予Tet(0.4、0.8、1.6和3.2μmol·L-1)处理,免疫细胞化学法检测α平滑肌肌动蛋白(αSMA)表达,或给予TGFβ1(质量浓度5μg·L-1)和(或)Tet(1.6μmol·L-1)干预,分别以RTPCR和Westernblot法检测TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体、Smad3、Smad7以及αSMAmRNA和(或)蛋白表达。结果Tet(0.4～3.2μmol·L-1)能抑制培养HSC表达αSMA。Tet(1.6μmol·L-1)抑制TGFβ1诱导的HSCαSMA表达,伴有Smad7表达上调及TGFβ1表达下降,但不影响TGFβⅠ、Ⅱ型受体和Smad3表达。结论低浓度Tet抑制培养HSC的活化和TGFβ1促活化作用,该作用与上调Smad7表达并抑制TGFβ1有关而不影响TGFβ受体表达。

人肝癌及癌旁组织中Smad4、Smad7mRNA和蛋白表达研究

目的 :分析Smad 4、Smad 7mRNA和蛋白在人肝癌组织中的表达并与癌旁组织比较 ,了解Smad 4mRNA和蛋白与肝癌临床病理特征之间的关系。方法 :用原位杂交和免疫组化方法检测 36例肝癌存档病理标本和其中的 2 8例癌旁组织病理标本Smad 4、Smad 7mRNA和相应的蛋白。结果 :Smad 4mRNA和其蛋白在肝癌组织中的表达低于肝癌癌旁组织 ,癌组织表达率分别为 2 8%和 19% ,癌旁组织表达率分别为 86 %和 75 % ,两者之间差别有统计学意义(P <0 .0 1)。Smad 7mRNA和其蛋白表达则相反 ,癌组织表达强 ,表达率分别为 6 6 %和 6 4 % ,癌旁组织表达率分别为14 %和 36 % ,两者之间差别有统计学意义 (P <0 .0 1和P <0 .0 5 )。Smad 4mRNA和蛋白与肝癌患者年龄、性别和肿瘤大小无关 ,但与肿瘤细胞类型、是否转移存在相关性。结论 :Smad 4和Smad 7蛋白作为转化生长因子 - β(TGF β)信号转导途径的下游分子 ,在肝癌组织中表达发生了改变 ,参与肝癌的发生、发展。

Smad6和Smad7基因腺相关病毒载体的构建及其表达

目的 :构建Smad 6和Smad 7基因腺相关病毒 (AAV)载体 ,并转染到人肾小管上皮细胞中表达。方法 :利用基因重组技术 ,采用BamHI和XhoI双酶分别将pcDNA3中的目的基因Smad6 /flag和Smad 7/flag融合基因片断切出 ,再克隆到质粒pAAV MCS中 ,构建重组质粒pAA Smad 6 /flag和pAA Smad 7/flag。采用磷酸钙沉淀法 ,以重组质粒或pAAV LacZ以及pAAV RC、pHelper共转染HEK2 93细胞 ,产生均有传染性的病毒颗粒。再将此病毒颗粒转染到培养的人肾小管细胞中 ,用免疫组化法检测其Smad 6和Smad 7转移基因的表达。结果 :成功地构建Smad 6和Smad 7基因的腺相关病毒载体 ,并可在肾小管上皮细胞中表达Smad 6和Smad 7。结论 :肾小管细胞能稳定、高效表达外源Smad 6和Smad 7,为今后建立Smad 6和Smad

胃癌组织TGF-βRII、Smad4、Smad7的表达及其与临床病理特征和生存的关系

背景与目的:目前研究认为,TGF-β/Smads信号通路在恶性肿瘤的发生发展过程中起到重要的作用,并可能与胃癌等恶性肿瘤的生物学行为密切相关。本研究通过探讨TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7在胃癌组织的表达及其意义,分析它们与临床病理特征及患者生存之间的关系。方法:应用组织芯片技术和免疫组化SABC法检测200例胃癌组织及56例癌旁组织TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7蛋白的表达。结果:胃癌组织中TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7的阳性率分别为25.5%、67.0%和47.0%。TGF-βRⅡ表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移、分化程度和Lauren分型密切相关(分别χ2=6.214,χ2=11.308,χ2=14.633和χ2=8.216,均P<0.05);Smad4表达与胃癌分化程度及Lauren分型密切相关(分别χ2=16.162和χ2=13.100,均P<0.05);Smad7表达与胃癌分化程度及Lauren分型密切相关(分别χ2=4.710和χ2=5.297,均P<0.05);Smad4与TGF-βRⅡ表达呈正相关(r=0.191,P=0.007);Smad4表达与患者生存密切相关(χ2=4.090,P=0.043)。结论:胃癌组织中广泛存在TGFβ-Smad信号通路相关分子TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7表达异常。胃癌中Smad4蛋白阳性患者其预后优于阴性者。

姜黄素对糖尿病大鼠肾脏病变的作用及对肾脏Smad7表达的影响

目的 探讨姜黄素对糖尿病大鼠肾脏病变的作用及对肾脏Smad7蛋白表达的影响。方法 诱导大鼠糖尿病后 ,随机分为对照组及治疗组 ,比较各组的血生化、尿微量白蛋白排泄量、肾脏病理改变及Smad7的免疫组化。结果 糖尿病大鼠内生肌酐清除率 (Ccr)、尿微量白蛋白 (mAlb)排泄量较正常鼠增多 ,系膜基质增生 ,Smad7表达明显下降 ;姜黄素治疗能明显降低Ccr (P <0 0 5 ) ,减少Alb排泄量 (P <0 0 5 ) ,抑制系膜基质增生 ,上调Smad7的表达 (P <0 0 5 )。结论 姜黄素对糖尿病肾病具有明显疗效 ,其机制至少部分是通过上调Smad7的表达 ,拮抗转化生长因子 β的作用 ,从而抑制肾脏纤维化。