雷山小香羊母羊部分血液生化指标测定分析

为给雷山小香羊的饲养管理及选育提供科学依据,测定了5月、2岁、3岁小香羊(母羊)20项生化指标。结果表明,香羊血液中甘油三酯、α-羟丁酸脱氢酶、γ-谷氨酰转肽酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、乳酸脱氢酶等随小香羊年龄的增长呈下降趋势;而球蛋白、低密度脂蛋白等随小香羊年龄的增长呈增加趋势(P<0.05);总胆固醇、高密度脂蛋白、总蛋白、白蛋白、白/球比例、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、钾、钠、氯、钙等11项指标间无显著差异(P>0.05)。各项血液生化指标的平均值与各年龄间相比无显著性差异(P>0.05),因此,可以用血液平均生化指标来评价雷山小香羊的健康和营养状况以及为香羊的选育提供理论参考。

黔东南小香羊与贵州原有其它山羊品种的线粒体DNA多态性比较

用Bam HⅠ、BglⅠ、BglⅡ、DraⅠ、EcoRⅠ、EcoRⅤ、HindⅢ、KpnⅠ、PstⅠ、PvuⅡ、SacⅠ、SalⅠ、Sm aⅠ、StuⅠ、XhoⅠ15 种识别6 碱基的限制性内切酶对黔东南小香羊和贵州原有3 个地方山羊品种的93 只个体的m tDNA 进行分析表明, Bam HⅠ、HindⅢ和SalⅠ3 种酶表现多态性; 共检出18 种限制性多态型,归纳得到3 种单倍型, 以单倍型Ⅰ和Ⅱ为基本单倍型。根据此2 种基本单倍型在所比较各品种中的不同分布比例, 以及遗传距离分析和品种间的聚类关系, 表明黔东南小香羊的群体遗传构成与贵州省原有其它3 个山羊品种不同, 从而为进一步确认其为一独立的品种提供了必要的分子生物学依据。

贵州小香羊MSTN基因内含子2和外显子3的多态性

为贵州小香羊选育及进一步研究MSTN基因与贵州小香羊生长性状的相关性提供理论依据,采用PCR-RFLP方法对67只贵州小香羊MSTN基因内含子2和外显子3进行了多态性分析。结果表明,所扩增内含子2中存在Bsp1286I酶切多态位点,杂合型(AB)为优势基因型,无纯合野生型(AA)和纯合突变型(BB);所扩增内含子2和外显子3中存在BstBI酶切多态位点,杂合型(CD)为优势基因型,纯合野生型(CC)和纯合突变型(DD)为非优势基因型,D等位基因为优势基因,且含有2个TatI正常酶切位点,但不存在多态性,不存在BsmFI酶切位点。

小香羊群体遗传结构的RAPD分析

用扩增猪基因组筛选得到的 4 0条多态引物对 12份小香羊DNA样品进行RAPD分析 ,结果有 2 1条引物扩增出多态性谱带。用Nei公式计算群体内的遗传相似性指数 ,平均为 0 .95 92± 0 .0 0 82。结果表明 ,小香羊品种的遗传基础较单一 ,遗传多样性贫乏。

雷山县小香羊主要疫病的血清学调查

为雷山县小香羊的疫病防控提供科学依据,采用酶联免疫吸附试验、间接凝集试验等方法对雷山县小香羊血清样本1 152份进行检测。结果表明:在免疫羊群中,O型口蹄疫、亚洲Ⅰ型口蹄疫、山羊痘和羊传染性胸膜肺炎免疫抗体的阳性率分别为90.2%、79.3%、82.2%和64.4%;在非免疫羊群中,口蹄疫、山羊痘、布氏杆菌病和羊传染性胸膜肺炎感染抗体的阳性率分别为0、0、0和8.8%。表明,在雷山县小香羊群中,口蹄疫和山羊痘的免疫效果较好,未检出口蹄疫和布氏杆菌隐性感染抗体,羊群中存在羊传染性胸膜肺炎隐性感染。

贵州小香羊ESR基因外显子1和4的多态性

为贵州小香羊的产羔数标记辅助选择提供科学依据,利用PCR-SSCP分析了贵州小香羊雌激素受体(estrogen receptor,ESR)基因外显子1和4的多态性。结果表明:贵州小香羊ESR基因外显子1和4的SSCP均呈现一种带型,命名为AA基因型(野生型),不存在多态性。贵州小香羊ESR基因外显子1和4序列的保守性高,该基因序列与贵州小香羊繁殖力的相关性有待进一步研究。

贵州小香羊FSHβ基因第2外显子SSCP多态性分析

为寻找与贵州小香羊繁殖力相关的分子标记提供基础数据,采用单链构象多态(SSCP)方法对在生殖中起重要作用的FSHβ基因外显子2的序列进行多态性检测,并对具有SSCP多态性的DNA片段进行测序分析。结果表明,在该特异性扩增产物中存在基因多态性,在94bp处检测到1个多态位点,该位点发生了G→A突变,出现3种基因型(AA、AB和BB)并导致编码的氨基酸由丙氨酸变为苏氨酸,A等位基因频率为62.3%,B等位基因频率为37.7%。

雷山小香羊促黄体素β亚基基因SphⅠ酶切多态性分析

为了给雷山小香羊品种遗传资源的合理利用及进一步选育提供科学依据,同时为更全面地了解其种质特性提供基础性资料,利用PCR-RFLP技术对67只雷山小香羊促黄体素β亚基基因进行了SphⅠ内切酶酶切位点多态性分析。结果表明,所扩增的促黄体素β亚基基因序列中仅有1个SphI酶切位点,且不具有多态性。

贵州小香羊FSH-β基因部分序列的RFLP多态性

为寻找与小香羊繁殖力相关的分子标记提供基础数据和科学依据,以贵州小香羊为试验材料,颈静脉采血后,提取血液全基因组DNA,根据NCBI Gene Bank山羊FSH-β基因序列(S64745.1)设计引物,采用限制性内切酶片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)方法对FSH-β基因内含子1与内含子2的序列进行多态性检测。结果表明:在两段特异性扩增产物中存在限制性酶切位点,不存在RFLP多态性。

贵州小香羊GH基因5'端侧翼区多态性与生长性能的关系

为贵州小香羊品种遗传资源的保护和进一步开发利用提供科学依据,利用单链构型多态性(SSCP)技术对贵州小香羊GH基因5’端侧翼区多态性进行筛选,并分析其与生长性能指标的关系。结果表明:贵州小香羊GH基因5’端侧翼区第60位、372位发现C→T的突变,均产生3种基因型,其中,第60位突变产生AA型、AB型和BB型,AA型为优势基因型,A等位基因为优势等位基因,且各生长性能指标(体重、体长、体高、胸围、管围)呈现AA基因型>AB基因型>BB基因型,但差异不显著(P>0.05);而第372位突变产生CD型、CC型和DD型,其中CD型为优势基因型,各基因型群体间的各项生长性能指标均没有显著差异(P>0.05)。GH基因5’端侧翼区存在多样性,但该多态性对贵州小香羊生长性能的影响甚微。

利用mtDNA Cytb基因探讨黔东南小香羊系统地位

黔东南小香羊和贵州白山羊之间的遗传关系一直存在争议,为此,对黔东南小香羊16个个体和贵州白山羊13个个体细胞色素b基因全序列进行了测定,通过遗传多样性和系统发育分析,探讨黔东南小香羊系统地位。结果表明:在2个贵州山羊群体中共观察到8种单倍型,2种单倍型共享,其中,贵州白山羊有7种单倍型,黔东南小香羊有3种单倍型;黔东南小香羊单倍型多样性(Hd)为0.625,核苷酸多样性(Pi)为0.00189,贵州白山羊的Hd和Pi分别为0.923和0.00324,贵州白山羊遗传多样性比黔东南小香羊丰富。结合从GenBank中检索获得的野生山羊、岩羊、绵羊细胞色素b基因序列构建分子系统发生树,结果显示,黔东南小香羊和贵州白山羊与胃石山羊亲缘关系最近,与我国野生岩羊亲缘关系较远。

山羊腺苷单磷酸脱氨酶1基因启动子区单核苷酸多态性研究

为筛选腺苷单磷酸脱氨酶1(adenosine monophosphate deaminase 1,AMPD1)基因启动子区单核苷酸多态性(SNP)及研究其对启动子功能元件的影响,试验选择小香羊、黔北麻羊、努比山羊构建不同DNA池,直接测序结合BLAST筛选SNP位点。结果表明,AMPD1基因启动子区存在5个SNPs位点,分别为:T-614A、G-326A、G-309A、T-287C和T-165C。生物信息学软件预测得到AMPD1基因核心启动子区和转录因子结合位点,SNPs位点导致9个转录因子结合位点消失,而产生7个新的转录因子结合位点。AMPD1基因RNA二级结构在突变后显著改变,但未检测到CpG岛区域。

黔东南小香羊GDF9基因遗传变异分析

采用直接测序法检测GDF9基因在黔东南小香羊群体中的单核苷酸多态性。结果表明:在GDF9基因外显子2的550位碱基处发生了突变(A→C)并导致组氨酸突变为脯氨酸;试验检测到AA型、Aa型和aa型3种基因型;A等位基因频率为0.666 7,a等位基因频率为0.333 4。

贵州小香羊生长激素基因的PCR-RFLP多态性分析

为给贵州小香羊品种遗传资源的合理开发利用及进一步选育提供科学依据,同时为更全面地了解其种质特性提供基础资料,利用PCR-RFLP技术对67只贵州小香羊生长激素基因外显子1到内含子2序列、外显子3到外显子5序列分别进行HaeⅢ和FokⅠ内切酶酶切位点多态性检测。结果表明,所扩增的生长激素基因外显子1到内含子2序列存在HaeⅢ酶切位点多态性,并表现为2种基因型AA和AB,基因频率分别为0.73和0.27,等位基因A的频率(0.87)高于等位基因B(0.13);外显子3到外显子5序列中未检测到FokⅠ酶切位点多态性。

雷山小香羊母羊部分血液生理指标的测定

为给雷山小香羊的选育、饲养管理、疾病诊断及开发利用等提供参考依据,进行了5月龄、1岁、2岁、3岁雷山小香羊母羊的15项血液生理指标测定。结果表明,白细胞总数(WBC)、单核细胞数量(MON)、中性粒细胞数量(GRA)、红细胞压积(HCT)、白细胞中单核细胞比率(MON/%)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)和血小板体积分布宽度(PDW)等7项指标无年龄间差异(P>0.05),其他指标存在年龄间差异(P<0.05)或极显著差异(P<0.01)。

利用微卫星对小香羊群体遗传结构的研究

为了阐明小香羊的遗传特点,试验利用7对微卫星引物对小香羊的等位基因频率、基因杂合度和多态信息含量进行了遗传检测。结果表明:7对微卫星引物共扩增出47个等位基因,基因频率分布在0.034～0.379之间;7个微卫星位点的平均杂合度为0.802,平均多态信息含量为0.790。说明小香羊群体遗传多样性较为丰富。

乌羊和小香羊的RAPD分析

用 40条多态引物对乌羊、小香羊、南江黄羊、黑山羊、川东白山羊、波尔山羊和马头山羊 7个品种 (或群体 )进行RAPD分析 ,其中 2 8条引物扩增出多态性谱带 ,并用于进一步对 12只乌羊个体和 12只小香羊个体基因组进行扩增。扩增产物以 1.5 %琼脂糖凝胶 (含 0 .5 μg/ml溴化乙锭 )电泳分离。Nei氏公式计算品种间的遗传距离指数和品种内的遗传相似指数 ,NJ法构建系统聚类图。结果表明 :乌羊和川东白山羊间的遗传距离最小 ,亲缘关系较近 ,而小香羊与各品种间的遗传距离都较大 ,亲缘关系较远。乌羊群体及小香羊品种都具有一定的遗传稳定性。

榕江小香羊GnRH基因多态性及其与繁殖性状关联性分析

为了探讨Gn RH基因SNP与榕江小香羊繁殖性状关联性,试验以榕江小香羊为研究对象,采用DNA池法及PCR-SSCP技术检测Gn RH基因单核苷酸多态性。结果表明,榕江小香羊Gn RH基因内含子3检测到1个SNP位点T-68G,该位点表现为3种基因型,分别命名为TT、TG和GG。基因型与繁殖性状关联分析显示,榕江小香羊GG基因型个体的产羔数显著高于TT和TG基因型个体(P<0.05)。研究结果提示Gn RH基因可能是影响山羊产羔数的主效基因或与主效基因连锁,T-68G位点可望作为提高山羊个体繁殖性能的分子遗传标记。