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小核RNA激活复合体多肽3基因rs4741506多态性与中国汉族人群缺血性脑卒中及其中医证候的相关性分析
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作者 古联 梁宝云 +5 位作者 苏莉 刘晶 杨怡冰 曾文璐 梁一帆 严雁 《中国医药》 2024年第1期45-49,共5页
目的探讨中国汉族人群中小核RNA激活复合体多肽3(SNAPC3)基因rs4741506多态性与缺血性脑卒中(IS)及其中医证候的关系。方法选取2016年1月至2019年12月在广西中医药大学第一附属医院脑病科住院治疗的774例IS患者作为观察组,同期本院体检... 目的探讨中国汉族人群中小核RNA激活复合体多肽3(SNAPC3)基因rs4741506多态性与缺血性脑卒中(IS)及其中医证候的关系。方法选取2016年1月至2019年12月在广西中医药大学第一附属医院脑病科住院治疗的774例IS患者作为观察组,同期本院体检中心的健康体检者以及医院骨科轻症外伤患者793例作为对照组。对IS患者进行中医证候辨证,对SNAPC3基因多态性位点rs4741506进行基因分型检测。建立4种遗传模型,应用PLINK软件和SPSS 21.0软件进行遗传关联及基因位点多态性与IS及其中医证候和患者临床指标的相关性分析。结果观察组与对照组rs4741506位点的基因型频率分布差异有统计学意义(χ^(2)=6.366,P=0.041)。在加性模型、显性模型、隐性模型中,SNAPC3基因rs4741506多态性与IS的发生风险均无显著相关性(均P>0.05)。多因素Logistic回归模型分析结果显示,校正年龄和性别后SNAPC3基因rs4741506多态性与IS风证(隐性模型:比值比=0.45,95%置信区间:0.22~0.92,P=0.029)、痰证(隐性模型:比值比=0.39,95%置信区间:0.19~0.81,P=0.011)发生风险相关,而与血瘀证的发生风险无明显相关性(显性模型:比值比=1.42,95%置信区间:1.00~2.01,P=0.051)。在隐性模型下,校正年龄和性别后SNAPC3基因rs4741506多态性与IS痰证患者舒张压水平相关(β=-10.93,95%置信区间:-20.64~-1.22,P=0.028)。一般线性回归分析结果显示,校正年龄和性别后SNAPC3基因rs4741506多态性与IS痰证患者血清载脂蛋白A1(加性模型、显性模型)、载脂蛋白B(隐性模型)、血小板计数(加性模型、显性模型)水平、凝血酶时间(显性模型)显著相关(均P<0.05)。结论SNAPC3基因rs4741506多态性可能影响IS风证及痰证的发生发展。 展开更多
关键词 缺血性脑卒中 小核rna激活复合体多肽3 单核苷酸多态性 风证 痰证
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Myod1通过调节lncRNA SNHG15和miR-24-3p对氧糖剥夺SH-SY5Y细胞增殖及凋亡的影响
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作者 冀方超 张晨昕 +3 位作者 任占军 潘云志 逯琦 孙兴元 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期989-999,共11页
目的:探讨肌源性分化蛋白1(Myod1)对氧糖剥夺(OGD)诱导的SH-SY5Y细胞增殖抑制和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测正常对照组研究对象和缺血性脑梗死组患者外周血及正常培养的SH-SY5Y细胞(对照组)... 目的:探讨肌源性分化蛋白1(Myod1)对氧糖剥夺(OGD)诱导的SH-SY5Y细胞增殖抑制和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测正常对照组研究对象和缺血性脑梗死组患者外周血及正常培养的SH-SY5Y细胞(对照组)和OGD细胞模型(OGD组)细胞中Myod1和长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)mRNA表达水平。分别采用si-Myod1、pcDNA3.0-Myod1、si-SNHG15、pcDNA3.0-SNHG15、si-NC、空载质粒(Vector)、miR-NC和miR-24-3p模拟物(miR-mimics)质粒转染SH-SY5Y细胞后,进行OGD处理,将SH-SY5Y细胞分为对照组、OGD组、OGD+Vector组、OGD+Myod1组、OGD+si-NC组、OGD+si-Myod1组、OGD+si-SNHG15组、OGD+si-SNHG15+Vector组、OGD+si-SNHG15+Myod1组、OGD+miR-NC组、OGD+miR-mimics组、OGD+miR-mimics+Vector组和OGD+miR-mimics+SNHG15组。采用CCK-8法检测各组细胞活性,采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)染色法检测各组EdU阳性细胞率,采用原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测各组TUNEL阳性细胞率,采用Western blotting法检测各组细胞中裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved caspase-9)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。染色质免疫共沉淀(CHIP)法评估Myod1和SNHG15之间的关联。双荧光素酶报告基因实验评估Myod1与SNHG15及SNHG15与miR-24-3p的靶向关系。结果:与正常对照组比较,缺血性脑梗死组患者外周血中Myod1和SNHG15 mRNA表达水平均升高(P<0.05)。与对照组比较,OGD组细胞中Myod1和SNHG15 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05)。与OGD组比较,48和72 h时OGD+Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率均降低(P<0.01),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.01);OGD+si-Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率均升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01)。Myod1可与SNHG15的启动子序列结合。SNHG15可吸附miR-24-3p,Myod1与SNHG15及SNHG15与miR-24-3p存在靶关系。敲低SNHG15后,与OGD组比较,48和72 h时OGD+si-SNHG15组细胞活性和EdU阳性细胞率均升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.01);与OGD+si-SNHG15组比较,48和72 h时OGD+si-SNHG15+Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.05),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-24-3p和SNHG15后,与OGD组比较,48和72 h时OGD+miR-mimics组细胞活性和EdU阳性细胞率升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.01);与OGD+miR-mimics组比较,48和72 h时OGD+miR-mimics+SNHG15组细胞活性和EdU阳性细胞率降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.05),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:Myod1可通过与SNHG15启动子区结合进而吸附miRNA-24,促进OGD诱导的SH-SY5Y细胞的增殖抑制和细胞凋亡。 展开更多
关键词 肌源性分化蛋白1 小核仁rna宿主基因15 微小rna-24-3p SH-SY5Y细胞 脑梗死
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抗转化生长因子β1的U1 snRNA嵌合型核酶体外剪切作用
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作者 刘芳 邹萍 +1 位作者 吴耀辉 张敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1609-1612,共4页
目的:研究抗转化生长因子β1U1snRNA嵌合型锤头状核酶的细胞外切割活性。方法:通过计算机设计针对TGFβ1的锤头状核酶,然后把合成的核酶片段克隆入含有U1 snRNA启动子/增强子和终止子的U1snRNA核酶载体中。通过RT-PCR扩增获得TGFβ1的... 目的:研究抗转化生长因子β1U1snRNA嵌合型锤头状核酶的细胞外切割活性。方法:通过计算机设计针对TGFβ1的锤头状核酶,然后把合成的核酶片段克隆入含有U1 snRNA启动子/增强子和终止子的U1snRNA核酶载体中。通过RT-PCR扩增获得TGFβ1的部分基因片段,将其克隆入T载体中T7启动子的下游,体外转录获得核酶和靶RNA,转录过程中掺入同位素,通过变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化回收。[32P]标记的核酶与靶RNA在不同条件下进行切割反应,变性PAGE电泳,放射自显影,分析反应结果。结果:活性的U1 snRNA嵌合型核酶(U1Rz803)在生理温度下具有良好特异的切割活性;而点突变型核酶U1Rz803m没有切割活性,因此这些结果显示U1Rz803设计是正确的。结论:本研究中制备的U1Rz803具有良好的特异催化切割活性。U1 snRNA嵌合型核酶U1Rz803有望在胞内抑制TGFβ1的表达,为研究转化生长因子(TGF)β1在造血调控中的作用机制提供有效工具。 展开更多
关键词 转化生长因子Β rna 催化 U1小核rna嵌合酶
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非编码RNA和肿瘤放疗抵抗相关性的研究进展 被引量:1
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作者 董娜 乔万佳 刘小军 《兰州大学学报(医学版)》 2023年第5期88-94,共7页
放疗抵抗是肿瘤疾病进展和死亡的重要原因之一。非编码RNA可在转录组学中广泛参与基因的表达,并可通过影响DNA损伤修复、诱导细胞周期、调控细胞凋亡、糖代谢、干细胞样特性等途径调节肿瘤的放疗敏感性。本文就非编码RNA影响肿瘤细胞放... 放疗抵抗是肿瘤疾病进展和死亡的重要原因之一。非编码RNA可在转录组学中广泛参与基因的表达,并可通过影响DNA损伤修复、诱导细胞周期、调控细胞凋亡、糖代谢、干细胞样特性等途径调节肿瘤的放疗敏感性。本文就非编码RNA影响肿瘤细胞放疗敏感性的分子机制作一综述。 展开更多
关键词 肿瘤 放射治疗 非编码rna rna 长链非编码rna 环状rna 核小rna 核仁小rna Piwi相互作用rna
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转录通读环状RNA rt-circ-HS促进低氧诱导因子1α表达和肾癌细胞增殖与侵袭
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作者 许云屹 苏征征 +8 位作者 郑林茂 张孟尼 谭珺娅 杨亚蓝 张梦鑫 徐苗 陈铌 陈雪芹 周桥 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期217-227,共11页
目的:鉴定肾癌细胞中由染色体14q23上相邻基因低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF1α)和小核RNA激活复合多肽(small nuclear RNA activating complex polypeptide 1,SNAPC1)形成的转录通读RNA及转录通读环状RNA(read-thr... 目的:鉴定肾癌细胞中由染色体14q23上相邻基因低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF1α)和小核RNA激活复合多肽(small nuclear RNA activating complex polypeptide 1,SNAPC1)形成的转录通读RNA及转录通读环状RNA(read-through circular RNA HIF1α-SNAPC1,rt-circ-HS),研究rt-circ-HS在肾癌细胞及组织样本中的表达、对肾癌细胞生物学行为的影响以及对其亲本分子HIF1α的调控机制。方法:逆转录PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Sanger测序检测不同肿瘤细胞中由HIF1α-SNAPC1形成的转录通读RNA和rt-circ-HS的表达。构建不同类型的肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)组织芯片共437例,用原位杂交检测rt-circ-HS表达。采用小干扰RNA(small interference RNA,si-RNA)和人工过表达质粒干预rt-circ-HS,用细胞计数实验(cell counting kit 8,CCK8)、EdU掺入实验、Transwell细胞迁移和细胞侵袭实验分别检测rt-circ-HS对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。用RT-PCR和Western blot验证干预rt-circ-HS对亲本分子HIF1α和SNAPC1表达的影响。构建包含rt-circ-HS、HIF1α3′端非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)与微小RNA 539(microRNA 539,miR-539)结合序列的野生型和突变型质粒,用双荧光素酶报告基因系统检测rt-circ-HS、HIF1α3′UTR与miR-539的结合。结果:发现一个新的rt-circ-HS,由HIF1α外显子(exon)6-SNAPC1 exon 2转录通读本产生,在肾癌细胞786-O中高表达。Sanger测序证实rt-circ-HS全长1144 nt,包括HIF1αexon 2-exon 6和SNAPC1 exon 2-exon 4,是一个新的转录通读环状RNA。原位杂交结果显示,rt-circ-HS在RCC中阳性表达率为67.5%(295/437),在不同类型RCC中表达率不同。发现miR-539是HIF1α的转录后负调控分子;rt-circ-HS作为分子海绵与miR-539结合,竞争性抑制miR-539与HIF1α3′UTR的结合,解除其对HIF1α的转录后负调控作用,促进亲本分子HIF1α表达及肾癌细胞增殖、迁移和侵袭。结论:rt-circ-HS作为分子海绵结合miR-539,抑制其对HIF1α的负调控作用,促进亲本分子HIF1α表达及肾癌细胞增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 转录通读环状rna HIF1α-SNAPC1 肾细胞癌 低氧诱导因子1Α 小核rna激活复合多肽1 微小rna 539
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Yeast nuclear RNA processing
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作者 Jade Bernstein Eric A Toth 《World Journal of Biological Chemistry》 CAS 2012年第1期7-26,共20页
Nuclear RNA processing requires dynamic and intricately regulated machinery composed of multiple enzymes and their cofactors.In this review,we summarize recent experiments using Saccharomyces cerevisiae as a model sys... Nuclear RNA processing requires dynamic and intricately regulated machinery composed of multiple enzymes and their cofactors.In this review,we summarize recent experiments using Saccharomyces cerevisiae as a model system that have yielded important insights regarding the conversion of pre-RNAs to functional RNAs,and the elimination of aberrant RNAs and unneeded intermediates from the nuclear RNA pool.Much progress has been made recently in describing the 3D structure of many elements of the nuclear degradation machinery and its cofactors.Similarly,the regulatory mechanisms that govern RNA processing are gradually coming into focus.Such advances invariably generate many new questions,which we highlight in this review. 展开更多
关键词 Cryptic unstable transcript Exosome mrna Mtr4p POLYADENYLATION rrna small nuclear rna small NUCLEOLAR rna TRAMP trna
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结直肠癌患者血清lncRNA SNHG11及miRNA-27b水平分析及与预后的关系 被引量:4
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作者 陈毅聪 尚尔波 +1 位作者 侯园婷 敖俞 《国际检验医学杂志》 CAS 2023年第4期455-460,共6页
目的探讨结直肠癌患者血清长链非编码RNA(lncRNA)小核RNA宿主基因11(SNHG11)及微小RNA(miRNA)miR-27b的表达及与预后的关系。方法将2016年1月至2018年1月广州市增城区中医医院收治的94例结直肠癌患者纳入研究作为结直肠癌组,将同期于该... 目的探讨结直肠癌患者血清长链非编码RNA(lncRNA)小核RNA宿主基因11(SNHG11)及微小RNA(miRNA)miR-27b的表达及与预后的关系。方法将2016年1月至2018年1月广州市增城区中医医院收治的94例结直肠癌患者纳入研究作为结直肠癌组,将同期于该院就诊的94例结直肠良性疾病患者纳入研究作为结直肠癌良性疾病组,另选取94例体检健康者作为对照组。比较3组血清lncRNA SNHG11、miR-27b水平。结直肠癌组患者根据临床特征分为不同的亚组,比较亚组间lncRNA SNHG11、miR-27b水平。随访3年,根据患者存活情况分为存活组和死亡组,比较两组lncRNA SNHG11、miR-27b水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析lncRNA SNHG11、miR-27b水平用于评估患者预后的价值。以结直肠癌患者lncRNA SNHG11、miR-27b水平平均值为界将患者分为高、低表达组,采用K-M生存曲线分析两组患者累积存活率。结果相较于对照组及结直肠良性疾病组,结直肠癌组患者血清lncRNA SNHG11水平更低,而miR-27b水平更高(P<0.05);亚组分析结果显示:患者lncRNA SNHG11、miR-27b水平与淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05)。相较于存活组,死亡组lncRNA SNHG11水平更低,而miR-27b水平更高(P<0.05)。ROC曲线分析显示:lncRNA SNHG11用于评估患者生存预后的最佳截断值为3.883,曲线下面积为0.868;miR-27b用于评估患者生存预后的最佳截断值为3.971,AUC为0.851。随访3年,lncRNA SNHG11高表达组(54例)中36例存活,累积存活率为66.67%,lncRNA SNHG11低表达组(40例)中16例存活,累积存活率为40.00%,两组累积存活率比较差异有统计学意义(P<0.05);miR-27b高表达组(43例)中18例存活,累积存活率41.86%,miR-27b低表达组(51例)中34例存活,累积存活率为66.67%,两组累积存活率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论结直肠癌患者血清lncRNA SNHG11水平下降,而miR-27b水平升高,二者水平与患者淋巴结转移、TNM分期有关,可作为患者生存预后评估的辅助指标。 展开更多
关键词 结直肠癌 长链非编码rna 小核rna宿主基因11 mirna-27b 预后
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LncRNA SNHG15/miR-123/PAK5轴通过自噬对胃癌细胞活性及血管生成的影响
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作者 刘杰 刘树青 +2 位作者 梁凤 王蕾 刘永健 《解剖学研究》 CAS 2023年第3期242-250,共9页
目的探讨lncRNA SNHG15/miR-123/PAK5轴通过调节自噬对胃癌细胞活性及血管生成的机制研究。方法将胃癌SCG-823细胞分为Control组、si-NC组、si-SNHG15组、miR-NC组、miR-123组、pcDNAPAK5组。RT-PCR检测细胞中SNHG15和miR-123表达;MTT... 目的探讨lncRNA SNHG15/miR-123/PAK5轴通过调节自噬对胃癌细胞活性及血管生成的机制研究。方法将胃癌SCG-823细胞分为Control组、si-NC组、si-SNHG15组、miR-NC组、miR-123组、pcDNAPAK5组。RT-PCR检测细胞中SNHG15和miR-123表达;MTT法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡能力;Matrigel体外成管实验检测细胞血管生成能力;蛋白质印迹检测细胞中PAK5、VEGF、LC3、Beclin1、p62蛋白表达;双荧光素酶报告基因检验SNHG15和miR-123、miR-123和PAK5的靶向关系。结果与人胃黏膜细胞系GES-1相比,人胃癌细胞系中ASG、MKN-45、SCG-823细胞中SNHG15表达明显升高,miR-123表达明显降低(P<0.05);且SCG-823细胞中SNHG15表达明显高于ASG、MKN-45细胞,miR-123表达明显低于ASG、MKN-45细胞(P<0.05)。si-SNHG15组细胞增殖、侵袭及形成小管数量均明显低于Control组,细胞凋亡率高于Control组(P<0.05);si-SNHG15组细胞中VEGF、PAK5、p62蛋白表达明显低于Control组,LC3Ⅱ/LC3Ι比值及Beclin1蛋白表达明显高于Control组(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-123组细胞增殖、侵袭及形成小管数量均明显降低,细胞凋亡率明显增加(P<0.05);miR-123组细胞中VEGF、PAK5、p62蛋白表达明显低于miR-NC组组,LC3Ⅱ/LC3Ι比值及Beclin1蛋白表达明显高于miRNC组(P<0.05)。通过向细胞中分别转染野生型SNHG15(SNHG15-WT)、PAK5(SNHG15-WT)时,miR-123组荧光素酶活性均明显低于miR-NC组(P<0.05)。与si-SNHG15组相比,pcDNA-PAK5组细胞细胞增殖、侵袭及形成小管数量均明显升高,细胞凋亡率明显降低(P<0.05);pcDNA-PAK5组细胞中VEGF、PAK5、p62蛋白表达明显高于si-SNHG15组,LC3Ⅱ/LC3Ι比值及Beclin1蛋白表达明显低于si-SNHG15组(P<0.05)。结论lncRNA SNHG15可靶向miR-123/PAK5轴抑制胃癌细胞增殖、侵袭和血管生成,促进胃癌细胞凋亡和自噬,进而为调控自噬途径治疗胃癌提供新的思路。 展开更多
关键词 人胃癌细胞株 血管生成 自噬 lncrna SNHG15/miR-123/PAK5轴 小核仁rna宿主基因15 增殖
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长链非编码RNA SNHG16与消化系统恶性肿瘤关系的研究进展
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作者 井苗雨 夏敏 《医学综述》 CAS 2023年第8期1539-1544,共6页
消化系统恶性肿瘤的发病率和病死率在我国恶性肿瘤中位居前列,造成了巨大医疗及社会负担。长链非编码RNA(lncRNA)可通过转录干扰、转录后调控和表观遗传修饰等调控基因表达,有作为肿瘤标志物的巨大潜力。lncRNA小核仁RNA宿主基因16(SNHG... 消化系统恶性肿瘤的发病率和病死率在我国恶性肿瘤中位居前列,造成了巨大医疗及社会负担。长链非编码RNA(lncRNA)可通过转录干扰、转录后调控和表观遗传修饰等调控基因表达,有作为肿瘤标志物的巨大潜力。lncRNA小核仁RNA宿主基因16(SNHG16)在胃癌、结直肠癌、肝癌、胰腺癌、食管癌等常见消化系统恶性肿瘤中高表达,且具有致癌特性,可影响肿瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学过程,在肿瘤发生发展中发挥重要作用。lncRNA SNHG16可能在消化系统恶性肿瘤临床诊断和预后预测方面具有重要价值。 展开更多
关键词 消化系统恶性肿瘤 长链非编码rna 小核仁rna宿主基因16
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siRNA介导的NF-κB P65沉默诱导肝癌细胞SMMC7721凋亡 被引量:2
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作者 黄辰 姚嘉宜 +3 位作者 李宗芳 刘利英 倪磊 宋土生 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1841-1844,共4页
目的研究siRNA介导的NF-κBP65沉默诱导肝癌细胞凋亡相关机制。方法实验以肝癌SMMC7721细胞株为材料,分为空白对照(Con)、脂质体对照(LP)以及siRNA干扰实验(siRNA)3组。以体外转录法合成dsRNA,并用脂质体转染SMMC7721细胞株;Western blo... 目的研究siRNA介导的NF-κBP65沉默诱导肝癌细胞凋亡相关机制。方法实验以肝癌SMMC7721细胞株为材料,分为空白对照(Con)、脂质体对照(LP)以及siRNA干扰实验(siRNA)3组。以体外转录法合成dsRNA,并用脂质体转染SMMC7721细胞株;Western blotting检测NF-#BP65表达水平,MTT检测细胞增殖情况,Annexin V-PI法检测细胞凋亡,免疫组化检测Bcl-2和Bax表达。结果与Con和LP组相比,siRNA具有抑制SMMC7721细胞NF-$BP65表达的作用,NF-%BP65表达抑制率分别达到64.74%和34.52%。siRNA明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,晚期凋亡细胞分别是Con组和LP组的8倍和7倍。siRNA引起Bcl-2表达下调,而Bax表达上调。结论siRNA可以有效抑制NF-&BP65蛋白表达,并通过调节Bcl-2和Bax诱导SMMC7721细胞的凋亡。 展开更多
关键词 肝癌 NF-ΚB P65 SIrna 细胞凋亡 Bcl-2 BAX
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利用Ⅱ型启动子转录的U6 RNA提高植物病毒表达载体在植物中表达外源基因的水平 被引量:1
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作者 高丁梅 马婷 +2 位作者 丁向真 李志英 王盛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期883-890,共8页
Ⅱ型启动子转录的外源短链RNA可以竞争性抑制细胞内源mRNA的核质转运,因而可能会提高植物RNA病毒载体表达的外源基因在植物中的积累.为了验证这一假说,利用OE-PCR技术合成拟南芥U6-1核内小RNA序列,并构建其Ⅱ型启动子转录的植物表达载体... Ⅱ型启动子转录的外源短链RNA可以竞争性抑制细胞内源mRNA的核质转运,因而可能会提高植物RNA病毒载体表达的外源基因在植物中的积累.为了验证这一假说,利用OE-PCR技术合成拟南芥U6-1核内小RNA序列,并构建其Ⅱ型启动子转录的植物表达载体.以农杆菌渗滤技术,与烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)表达载体共接种寄主植物本氏烟,通过对报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的荧光观察,并以Western印迹和ELISA测定GFP在烟草中的表达情况,分析共表达Ⅱ型启动子转录的U6 RNA对外源基因在植物中表达的作用效果.结果表明,共接种Ⅱ型启动子转录的U6 RNA对TMV病毒表达载体表达外源基因的水平有明显的增效作用,推测RNA核质转运干扰是提高外源基因表达的可能机制. 展开更多
关键词 烟草花叶病毒 表达载体 U6核内小rna rna核质转运 rna聚合酶Ⅱ
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小干扰RNA沉默Toll样受体4表达对慢性温和应激ApoE^(-/-)小鼠腹腔巨噬细胞TLR 4/NF-κB途径基因表达的影响 被引量:3
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作者 顾洪丰 唐朝克 +2 位作者 唐雅玲 覃丽 杨永宗 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期6-12,共7页
目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默Toll样受体4(TLR4)基因对慢性温和应激ApoE-/-小鼠腹腔巨噬细胞促炎症细胞因子表达的影响。方法针对小鼠TLR4基因设计2条siRNA和一条无关序列,再据每一序列合成两条互补并含siRNA正反义链的DNA,退火后与含... 目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默Toll样受体4(TLR4)基因对慢性温和应激ApoE-/-小鼠腹腔巨噬细胞促炎症细胞因子表达的影响。方法针对小鼠TLR4基因设计2条siRNA和一条无关序列,再据每一序列合成两条互补并含siRNA正反义链的DNA,退火后与含GFP的载体pRNAT-H1.1/Adeno相连,转染293A细胞,实时荧光PCR筛选有效的一条siRNA,经腺病毒颗粒包装与病毒扩增并感染293A细胞,G418筛选后,挑取单个阳性克隆放大培养,检测病毒滴度。120只雄性ApoE-/-小鼠随机分为三组:(1)慢性温和应激组;(2)慢性温和应激+siRNA组(10μL/只,尾静脉注射,每5日一次);(3)慢性温和应激+腺病毒空载体组。每组ApoE-/-小鼠40只,实验动物都以高脂、高胆固醇饲料喂养,分别在接受慢性温和应激0、4、12周后3个时间点处死动物,收集小鼠腹腔单核巨噬细胞,以W estern B lotting方法检测其TLR4和核因子κB(NF-κB)蛋白表达,ELISA法检测腹腔单核巨噬细胞培养上清液白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α表达。结果转染siRNA1和siRNA2后的292A细胞中TLR4 mRNA表达水平较空白对照组分别下降56%和67%,逐孔稀释滴度测定法测定的病毒滴度为3.4×1014TU/L;遭受4、12周慢性温和应激后,ApoE-/-小鼠血浆中皮质醇激素显著升高,但在同一时间点内,各组ApoE-/-小鼠血浆皮质酮激素浓度相比,差异没有统计学意义(P>0.05);与同一时期慢性温和应激组相比,siRNA组腹腔巨噬细胞TLR4和核因子κB蛋白表达水平明显降低(均P<0.05),其培养细胞上清液中的白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α含量显著减少(P<0.01)。结论 siRNA沉默TLR4基因能有效抑制TLR4/NF-κB-IL-1β和肿瘤坏死因子α的表达,提示TLR4/NF-κB途径在慢性温和应激诱导的慢性炎症应答中可能有着重要作用。 展开更多
关键词 小干扰rna TOLL样受体4 慢性温和应激 核因子κB 肿瘤坏死因子α
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靶向核转录因子-κB P65小干扰RNA对脓毒症所致小鼠急性肝损伤的影响 被引量:2
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作者 王君 朱光发 +2 位作者 李丛锋 靳丽妍 吴春婷 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期108-111,I0002,共5页
目的 探讨靶向核转录因子(NF)-κB P65 小干扰RNA(siRNA)对脓毒症所致小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 将70只雄性昆明小鼠随机分为四组:即健康对照组、脓毒症组、特异干扰组和乱序对照组,后三组每组均设置术后6、12 h两个时间点,... 目的 探讨靶向核转录因子(NF)-κB P65 小干扰RNA(siRNA)对脓毒症所致小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 将70只雄性昆明小鼠随机分为四组:即健康对照组、脓毒症组、特异干扰组和乱序对照组,后三组每组均设置术后6、12 h两个时间点,每组每个时间点10只小鼠;术前1 h特异干扰组尾静脉注射NF-κB P65 siRNA逆转录病毒,乱序对照组注射Scrambled siRNA逆转录病毒,健康对照组及脓毒症组分别注射等体积生理盐水;除健康对照组小鼠均行盲肠结扎穿孔(CLP)法构建脓毒症急性肝损伤模型;于术后6、12 h留取肝组织标本,检测组织病理学改变,NF-κB P65蛋白表达水平,TNF-α mRNA及蛋白的表达水平.结果.与脓毒症组和乱序对照组比较,特异干扰组术后6、12 h肝内NF-κB P65蛋白的表达均降低,肝脏病理损害均减轻;特异干扰组术后6 h肝内TNF-α mRNA及蛋白水平显著降低(P〈0.05).结论.靶向NF-κB P65 siRNA抑制NF-κB的表达后,能够抑制脓毒症所致过度炎症反应,减轻急性肝损伤. 展开更多
关键词 核转录因子-ΚB 小干扰rna 逆转录病毒载体 急性肝损伤
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靶向siRNA对人子宫颈癌细胞的抑制作用 被引量:1
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作者 黄浩 余南才 +4 位作者 江俊 刘倩 马威 郝建军 易艳东 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期16-18,共3页
目的构建增殖细胞核抗原(PCNA)的小发夹结构RNA(shRNA)的真核表达载体并在人HeLa细胞表达,同时观察PCNA shRNA对HeLa细胞体外增殖及生物学特性的影响。方法将PCNA cDNA的shRNA引物插入真核表达载体pGenesil-1,构建真核表达质粒pGenesil-... 目的构建增殖细胞核抗原(PCNA)的小发夹结构RNA(shRNA)的真核表达载体并在人HeLa细胞表达,同时观察PCNA shRNA对HeLa细胞体外增殖及生物学特性的影响。方法将PCNA cDNA的shRNA引物插入真核表达载体pGenesil-1,构建真核表达质粒pGenesil-1-PCNA(1-4),并通过酶切和测序等方法进行鉴定,将真核表达质粒pGenesil-1-PCNA(1-4)转染HeLa细胞,运用Western blot方法检测PCNA蛋白的表达,流式细胞仪分析细胞周期变化。结果PCNA shRNA能显著抑制人HeLa细胞的生长,阻滞细胞于G0/G1期,PCNA的蛋白表达同时受到抑制。结论PCNA shRNA能显著抑制人HeLa细胞的生长,其抑制作用可能通过阻断PCNA蛋白表达实现,实验结果为进一步研究PCNA shRNA对子宫颈癌的基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 子宫颈癌 增殖细胞核抗原 小发夹结构rna
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p65 siRNA联合顺铂对宫颈癌HeLa229细胞增殖及侵袭力的影响 被引量:1
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作者 田卫红 田芳 +2 位作者 许培荣 刘红涛 薛乐勋 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第36期26-27,共2页
目的通过RNA干扰(RNAi)阻断宫颈癌细胞HeLa229中核因子(NF)-κB信号通路,观察其单独或与顺铂(DDP)联合对HeLa229增殖、耐药性和侵袭力的影响。方法利用RNAi技术,将HeLa229分为未转染组(A组)和转染p65小干扰RNA(siRNA)组(B组),用MTT法检... 目的通过RNA干扰(RNAi)阻断宫颈癌细胞HeLa229中核因子(NF)-κB信号通路,观察其单独或与顺铂(DDP)联合对HeLa229增殖、耐药性和侵袭力的影响。方法利用RNAi技术,将HeLa229分为未转染组(A组)和转染p65小干扰RNA(siRNA)组(B组),用MTT法检测转染p65 siRNA 24、48、72 h时HeLa229的增殖情况;加入不同浓度DDP,观察其对HeLa229细胞增殖的影响。用Boyden chamber体外侵袭实验检测A、B组及p65siRNA与DDP(8.6 mg/L)联合组(C组)细胞侵袭力的变化。结果B组细胞存活率较A组明显下降;加入DDP后,A、B组细胞的存活率均随DDP浓度的增加而下降。siRNA与DDP联合应用可明显提高HeLa229对DDP的敏感性。与A组相比,B、C组穿越Matrigel胶的细胞数明显减少(P<0.05)。结论应用RNAi技术可有效阻断HeLa229内NF-κB信号通路,抑制其增殖和体外侵袭力,增强其对DDP的敏感性。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 宫颈癌 HELA229细胞 核因子 小干扰rna 顺铂
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PCNA的shRNA的真核表达载体的构建及对子宫颈癌细胞的干预性研究 被引量:1
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作者 黄浩 凃欣 +5 位作者 余南才 吴文莉 刘倩 马威 郝建军 易艳东 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期662-664,共3页
目的构建PCNA的小发夹结构RNA(shRNA)的真核表达载体并在Hela细胞表达,同时观察PCNA的shRNA对人Hela细胞株体外增殖的影响及生物学特性的改变。方法将PCNA的cD-NA的shRNA引物插入真核表达载体pGenesil-1,构建真核表达质粒pGenesil-1-PCN... 目的构建PCNA的小发夹结构RNA(shRNA)的真核表达载体并在Hela细胞表达,同时观察PCNA的shRNA对人Hela细胞株体外增殖的影响及生物学特性的改变。方法将PCNA的cD-NA的shRNA引物插入真核表达载体pGenesil-1,构建真核表达质粒pGenesil-1-PCNA1-4,并通过酶切和测序等方法进行鉴定,将真核表达质粒pGenesil-1-PCNA1-4转染子宫颈癌细胞,运用Westernblot检测PCNA的蛋白表达,流式细胞仪分析细胞周期变化。结果PCNA的shRNA能显著抑制人Hela细胞的生长,阻滞细胞G0/G1—S期,PCNA的蛋白表达同时受到抑制。结论PCNA的shRNA能显著抑制人Hela细胞的生长,其抑制作用可能通过阻断PCNA蛋白表达实现,实验结果为进一步研究PC-NA的shRNA对子宫颈癌的基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 子宫颈癌 增殖细胞核抗原 小发夹结构rna 子宫颈癌细胞
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核因子-κB/p65 siRNA介导的舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡及相关分子机制 被引量:2
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作者 路学文 李新明 +2 位作者 蔡留意 王文明 解邦杰 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期744-748,共5页
目的:研究下调核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)/p65基因的表达对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的影响,并探讨Tca8113细胞凋亡可能的分子机制。方法:利用脂质体2000将终浓度为100nmol/L的p65 siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞... 目的:研究下调核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)/p65基因的表达对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的影响,并探讨Tca8113细胞凋亡可能的分子机制。方法:利用脂质体2000将终浓度为100nmol/L的p65 siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,通过RT-PCR检测0、24、48和72hp65 mRNA的表达,并通过流式细胞术检测转染前后细胞凋亡变化,通过Caspase-Glo○R-3/7,-8和-9检测试剂盒分析caspase-3/9活性,用Western blotting技术检测p65、bcl-2和bax蛋白表达。结果:Tca8113细胞转染p65siRNA后,在48hp65 mRNA的相对表达量为0.181±0.028,显著低于未处理组0.595±0.038和对照siRNA组0.613±0.067(P<0.05)。流式细胞术结果显示,p65 siRNA能促使Tca8113细胞凋亡,其早期凋亡比率为(23.16±1.72)%,显著高于未处理组和对照siRNA组(P<0.01)。转染48h后,p65和bcl-2蛋白的相对表达水平明显下调,而促凋亡蛋白bax的表达显著上升,并伴随着caspase-3/9活性的显著上升。结论:NF-κB信号途径中的p65亚基可能在舌鳞状细胞癌凋亡中发挥重要作用,该研究有望为舌鳞状细胞癌的分子靶向治疗提供理论依据。 展开更多
关键词 核因子-κB信号途径 舌鳞状细胞癌 小干扰rna 细胞凋亡
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lncRNA SNHG15在胃癌组织中的表达及临床意义 被引量:1
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作者 冀叶 袁小笋 +6 位作者 张蕾 马慧利 董薇 李长生 张敬伟 任中海 张怡飞 《检验医学》 CAS 2022年第5期409-412,共4页
目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)在胃癌中的临床意义。方法选取行根治性手术治疗的胃癌患者97例。收集所有患者的临床资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测胃癌组织和正常胃黏膜组织SNHG15的相对表达... 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)在胃癌中的临床意义。方法选取行根治性手术治疗的胃癌患者97例。收集所有患者的临床资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测胃癌组织和正常胃黏膜组织SNHG15的相对表达量。对所有患者从术后第1天起随访5年。采用Kaplan-Meier生存曲线分析患者术后生存期,采用Cox比例风险模型对预后影响因素进行分析。结果胃癌组织SNHG15相对表达量显著高于正常胃黏膜组织(P<0.001)。不同分化程度、TNM分期、浸润深度和淋巴结转移患者之间胃癌组织SNHG15相对表达量差异均有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,低表达组(SNHG15≤2.18)平均生存时间和5年生存率均高于高表达组(SNHG15>2.18)(P<0.001)。Cox比例风险模型分析结果显示,低分化、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移和SNHG15高表达是影响胃癌患者预后的危险因素[风险比(HR)分别为0.381、2.568、2.892和4.851]。结论胃癌组织中SNHG15表达显著升高,且与患者预后有关,或可作为胃癌机制研究及预后评估的潜在标志物。 展开更多
关键词 小核仁rna宿主基因15 长链非编码rna 胃癌
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Rac1-siRNA抑制大鼠视网膜NF-κB表达的实验研究 被引量:3
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作者 李娟娟 张美霞 《眼科新进展》 CAS 2008年第9期646-648,共3页
目的观察Rac1-siRNA重组载体对大鼠视网膜核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)表达的抑制作用。方法将25只成年SD大鼠,采用光动力法诱导双眼视网膜静脉阻塞后,一眼玻璃体内转染Rac1-siRNA重组载体作为基因干预组,另一眼注射空白载体... 目的观察Rac1-siRNA重组载体对大鼠视网膜核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)表达的抑制作用。方法将25只成年SD大鼠,采用光动力法诱导双眼视网膜静脉阻塞后,一眼玻璃体内转染Rac1-siRNA重组载体作为基因干预组,另一眼注射空白载体作为空白对照组。同时选取正常同龄SD大鼠25只一眼玻璃体内转染Rac1-siRNA重组载体作为空白干预组,另一眼作为阴性对照组。免疫组织化学法和RT-PCR法检测各组NF-κB的表达情况。结果NF-κB免疫组织化学染色后,空白干预组、空白对照组、基因干预组OD值分别为:28.698±4.064、93.462±12.398、64.799±10.895,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示:在基因干预组和空白对照组中与空白干预组相比表达较强,空白对照组最强。各组NF-κB表达率差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Rac1-siRNA重组载体能有效抑制视网膜内NF-κB的表达。 展开更多
关键词 Racl-sirna 核因子-ΚB 免疫组织化学 RT—PCR
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siRNA沉默Ran基因对结肠癌细胞株凋亡和Caspase-3、PARP表达的影响 被引量:1
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作者 汪鑫 耿蕾 +3 位作者 孙丽娜 孙利慧 卢瑗瑗 王新 《胃肠病学》 2017年第3期138-142,共5页
背景:结肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一。本课题组前期研究发现结肠癌特异性抗原类硫氧还蛋白-2(Txl-2)的亚型之一Txl-2b可与Ras相关核蛋白(Ran)相互作用,但Ran在结肠癌发病过程中的作用和机制鲜有报道。目的:以RNA干扰技术靶向沉默... 背景:结肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一。本课题组前期研究发现结肠癌特异性抗原类硫氧还蛋白-2(Txl-2)的亚型之一Txl-2b可与Ras相关核蛋白(Ran)相互作用,但Ran在结肠癌发病过程中的作用和机制鲜有报道。目的:以RNA干扰技术靶向沉默结肠癌细胞株Ran基因,观察该方法对细胞凋亡和半胱天冬酶-3(caspase-3)、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)表达的影响。方法:设置si-1、si-2、si-3以及阴性对照(NC)组,分别将终浓度为20、40、60 nmol/L的Ran小干扰RNA(siRNA)-1、siRNA-2、siRNA-3以及NC siRNA转染结肠癌细胞株HCT116、DLD-1。采用蛋白质印迹法检测siRNA干扰效率以及caspase-3、PARP表达的变化;采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:20 nmol/L siRNA-1、siRNA-2抑制Ran表达的效果最佳。si-1组HCT116、DLD-1细胞的早期凋亡率较NC组显著增加(19.37%±7.57%对4.83%±1.72%;16.53%±3.38%对6.27%±3.13%;P均<0.05)。si-1组、si-2组HCT116、DLD-1细胞的晚期凋亡率较NC组显著增加(15.97%±3.31%、16.33%±5.40%对6.40%±1.05%;22.93%±1.57%、11.50%±0.70%对6.20%±0.98%;P均<0.05)。si-1组、si-2组DLD-1细胞与NC组相比,被切割的caspase-3(活性形式)和被切割的PARP(非活性形式)表达水平显著升高。结论:沉默Ran基因能明显促进结肠癌细胞凋亡,其机制与调控caspase-3、PARP表达有关。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 Ras相关核蛋白 rna 小分子干扰 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 聚ADP核糖聚合酶类
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