SNRPA对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及Snail1信号通路的影响

目的检测小核核糖核蛋白多肽A(SNRPA)在胃癌组织和胃癌细胞系中的表达,分析SNRPA调控锌指转录因子1(Snail1)对人胃癌细胞系增殖、迁移和侵袭的影响。方法通过对GAPIA数据库进行检索以及western blot验证,以确定SNRPA在胃癌组织中的表达情况,并对患者临床病理参数进行统计学分析。进一步检测胃癌细胞系AGS、HGC27、SGC7901、BGC823和MGC803中SNRPA蛋白及mRNA的表达水平。在胃癌细胞系AGS和SGC7901中分别转染SNRPA siRNA和SNRPA过表达质粒,采用CCK8及EdU细胞增殖试验检测转染后细胞的增殖活性;Transwell细胞迁移和侵袭试验检测细胞迁移能力;western blot检测相应蛋白质的表达;敲减Snail1后进一步验证SNRPA调控Snail1介导胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。结果SNRPA在胃癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。此外,在AGS细胞系中SNRPA的表达水平最高,而在SGC7901细胞系中SNRPA的表达水平最低。在AGS细胞系中,敲减SNRPA后,其细胞增殖活性显著低于阴性对照组(P<0.05),且细胞迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05),Snail1蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。在SGC7901细胞系中,转染SNRPA过表达质粒后,其增殖活性明显高于阴性对照组(P<0.05),细胞迁移和侵袭能力明显增高(P<0.05),Snail1蛋白的表达水平明显升高(P<0.05)。在AGS细胞系中,转染Snail1 siRNA后,其细胞增殖活性明显低于阴性对照组(P<0.05),细胞迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。而在SGC7901细胞系中,SNRPA过表达质粒和Snail1 siRNA共转染后,与对照组相比,其细胞增殖活性、细胞迁移和侵袭能力差异均无统计学意义(P>0.05)。结论SNRPA在胃癌组织中高表达;SNRPA通过上调Snail1表达促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。

小核核糖核蛋白多肽A对肝细胞癌细胞恶性生物学行为的影响及其机制

目的:探究小核核糖核蛋白多肽A(SNRPA)在肝细胞癌(HCC)组织和细胞中的表达及其调控HCC细胞HepG2和Hep3B恶性生物学行为的作用及其机制。方法:数据库分析SNRPA在泛癌组织中的表达及其与病理分期、HCC患者预后的相关性。常规培养HepG2和Hep3B细胞,将si-NC,si-SNRPA#1、si-SNRPA#2转染HepG2和Hep3B细胞,实验分为si-NC组、si-SNRPA#1组和si-SNRPA#2组;将SNRPA-vector和SNRPA-oe载体转染LO2细胞,分为SNRPA-vector组和SNRPA-oe组。qPCR法检测正常肝细胞和肝癌细胞以及转染各组HepG2和Hep3B细胞中SNRPA mRNA的表达,MTT法、Transwell法和WB法分别检测转染后各组HepG2和Hep3B细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及EMT相关蛋白表达的变化。结果:数据库分析显示,SNRPA mRNA在多数肿瘤组织中均呈高表达(均P<0.001)且与病理分期有关联(P<0.05或P<0.01)。SNRPA在HCC组织和细胞中均呈高表达(P<0.05或P<0.01),且与HCC患者的预后有关联(P<0.01)。敲减SNRPA表达明显抑制HepG2和Hep3B细胞增殖(P<0.05或P<0.01)而过表达SNRPA则能促进LO2细胞增殖(P<0.01),敲减SNRPA表达明显抑制HepG2和Hep3B细胞的迁移和侵袭能力(均P<0.01),明显促进E-cadherin的表达上调(P<0.01),而抑制N-cadherin、vimentin的表达(P<0.01)。结论:SNRPA在HCC组织及细胞中呈明显高表达,其可能通过调控上皮间质转化(EMT)进程进而促进HepG2和Hep3B细胞的增殖、迁移和侵袭。

环状RNA FBXO11靶向miR-376a-3p/SNRPB轴调控胃癌SNU-1细胞的增殖与凋亡

目的:探讨环状RNA FBXO11(circFBXO11)调控miR-376a-3p/小核糖核蛋白多肽B基因(SNRPB)轴对胃癌细胞增殖与凋亡的影响。方法:选取2018年1月至2019年1月华北理工大学附属医院肿瘤外科30例手术切除的胃癌患者的癌和癌旁组织标本,免疫组化染色法检测胃癌组织中SNRPB蛋白阳性表达率,qPCR法检测胃癌组织、胃癌细胞系SNU-1、AGS及HS-746T和胃黏膜细胞GES1中circFBXO11、miR-376a-3p和SNRPB mRNA的表达水平。用双荧光素酶报告基因实验验证circFBXO11与miR-376a-3p、miR-376a-3p与SNRPB之间的靶向关系。将si-NC、si-circFBXO11、miR-NC、miR-376a-3p、si-SNRPB、si-circFBXO11+anti-miR-NC、si-circFBXO11+anti-miR-376a-3p、si-circFBXO11+pcDNA-NC、si-circFBXO11+pcDNA-SNRPB等分别转染进SNU-1细胞,用CCK-8法、流式细胞术以及WB法分别检测细胞的增殖活力、凋亡率以及SNRPB、cyclin D1和C-caspase-3蛋白的表达水平。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织中circFBXO11表达水平显著升高、SNRPB蛋白阳性率升高、miR-376a-3p表达显著降低(均P<0.01);与GES1细胞比较,胃癌细胞中circFBXO11和SNRPB表达水平显著升高、miR-376a-3p表达水平显著降低(均P<0.01)。circFBXO11靶向负调控miR-376a-3p表达,miR-376a-3p靶向负调控SNRPB表达。抑制circFBXO11表达或过表达miR-376a-3p或抑制SNRPB表达后,SNU-1细胞的增殖活力降低、凋亡率升高(均P<0.01)。抑制miR-376a-3p表达可部分逆转抑制circFBXO11对SNU-1细胞增殖和凋亡的作用(均P<0.01)。过表达SNRPB可部分逆转抑制circFBXO11对SNU-1细胞增殖和凋亡的影响(均P<0.01)。结论:胃癌组织中circFBXO11呈高表达,抑制circFBXO11表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制与调控miR-376a-3p/SNRPB通路相关。

SNRPN基因在HepG2细胞中的印迹状态研究

目的:研究小核核糖核蛋白多肽N基因(SNRPN)在肝癌肿瘤HepG2细胞株的表达及基因印迹状态.方法:采用RT-PCR方法检测出SNRPN基因在肝癌肿瘤HepG2细胞株中的表达状况,对HepG2细胞株基因组DNA和cDNA中的SNRPN基因外显子4nt1654312位点用RT-PCR为基础的RFLP方法进行基因分型.结果:HepG2细胞稳定表达SNRPN,SNRPN外显子4nt1654312(数字依据NT_026446,SNPrs705)为杂合子(C/T);RT-PCR为基础的RFLP分析表明,SNRPN的双等位基因中只有T等位基因产生mRNA转录本.结论:SNRPN基因在HepG2肝癌细胞株中有表达,其基因印迹状态未丢失.

小核核糖核蛋白多肽E在肿瘤中的作用及机制

小核核糖核蛋白多肽E(small nuclear ribonucleoprotein polypeptide E,SNRPE)也称为剪接体蛋白E(spliceosomal protein E,SmE),属于剪接体蛋白家族成员,最初被确定为剪接体复合物的重要组成部分,参与前体mRNA(pre-mRNA)加工。近年来,除了作为剪接体的关键成分外,SNRPE在肿瘤发生发展中的作用也备受关注。本文就SNRPE在肿瘤发生发展中的作用进行综述,探讨SNRPE在非小细胞肺癌、肝细胞癌、前列腺癌及乳腺癌等癌症中的作用机制,并介绍了SNRPE与肿瘤的药物敏感性和临床预后之间的关系,旨在为相关肿瘤的发生、发展、治疗和预后提供更多理论依据。

冷冻复苏过程对人精子印记基因SNRPN和GRB10DNA甲基化及表达的影响

目的探讨精液冷冻复苏过程对人精子印记基因SNRPN、GRB10甲基化状态和mRNA表达的影响。方法将20份人精液标本平行分为2组:新鲜组(n=20)和冷冻组(n=20)。采用计算机辅助精子分析(CASA)进行两组精液的常规参数检测;Percoll密度梯度离心法纯化精子,SNRPN、GRB10基因的甲基化率采用Sequenom DNA测序分析;SNRPN、GRB10基因的mRNA表达采用qRT-PCR定量分析。结果冷冻组精子浓度、精子活力、前向运动精子百分比均低于新鲜组(P<0.05),冷冻组不活动精子百分比显著高于新鲜组(P<0.05);冷冻组精子SNRPN mRNA表达显著低于新鲜组(P<0.05);冷冻组精子GRB10启动子区亚片段检测的-902Cp G位点(即转录起始点上游989 bp处)的甲基化率显著下降(P<0.05);GRB10 mRNA表达较新鲜组显著升高(P<0.05)。结论冷冻复苏过程影响人精子GRB10、SNRPN基因的DNA甲基化和mRNA表达,提示精子库常规使用的精液冻储技术可能改变配子的表观遗传信息,进而调控基因的表达。

小核糖体核蛋白B对肝癌细胞增殖与转移的调控作用

目的研究小核糖体核蛋白B(SNRPB)在肝癌组织及细胞中的表达情况,以及SNRPB对肝癌细胞增殖与转移的作用。方法通过生物信息数据库starBase v3.0和GEPIA分析SNRPB在肝癌组织和正常肝脏组织中的表达,并进行肝癌患者预后生存分析;qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分析SNRPB mRNA和蛋白在肝癌细胞系中的表达;利用RNA干扰技术(siRNA)下调SNRPB蛋白的表达,通过MTT实验观察其对肝癌细胞增殖的作用,Transwell侵袭迁移实验检测下调SNRI>B后肝癌细胞转移能力的变化;利用Western blot技术检测下调SNRPB表达后肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)标志物的改变。数据两组间比较采用〖检验,多组间比较采用方差分析。结果SNRPB在肝癌组织中的表达明显高于正常肝脏组织,且其表达水平并与肝癌患者预后相关。与永生化肝细胞LO:相比,SNRPB在肝癌细胞系中的表达显著升高(P值均<0.01)。siRNA-SNRPB显著抑制肝癌细胞内SNRPB mRNA和蛋白表达。MTT结果显示SNRPB敲低组的吸光度值较阴性对照组降低,其中转染96 h的差值最显著(P值均<0.01)。Transwell实验结果显示,与阴性对照组相比,SNRPB敲低组肝癌细胞的侵袭(MHCC-97H:121.27±8.12对比46.38±7.54,Huh7:126.50±6.98对比41.10±8.01)和迁移(MHCC-97H:125.20±4.77对比43.18±7.32;Huh7:132.22±8.21对比38.00±6.78)能力显著降低(P值均<0.01)。Western blot显示下调SNRPB后上皮表型标志物E-钙黏蛋白表达水平下降,间质表型标志物N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平上升,表明下调SNRPB抑制肝癌细胞EMT。结论SNRPB在肝癌组织及细胞中表达显著升高,并且参与调控肝癌细胞的增殖与转移及EMT。