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套式PCR扩增特定SSUrDNA片段诊断恶性疟的研究 被引量:9
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作者 万磊 陈培霞 +1 位作者 薛采芳 姜绍谆 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期174-177,共4页
设计2对针对恶性疟原虫(P.f.)小亚单位核糖体核糖核酸基因(SSUrDNA)的特异引物,采用双温度点套式聚合酶链式反应(PCR)技术,从用煮沸法快速萃取的样本DNA中,扩增P.f.SSUrDNA片段,进行恶性疟原虫的检测。结果表明,该系统扩... 设计2对针对恶性疟原虫(P.f.)小亚单位核糖体核糖核酸基因(SSUrDNA)的特异引物,采用双温度点套式聚合酶链式反应(PCR)技术,从用煮沸法快速萃取的样本DNA中,扩增P.f.SSUrDNA片段,进行恶性疟原虫的检测。结果表明,该系统扩增样本DNA片段大小恒定,经限制性酶切进一步分析,证实均为P.f.SSUrDNA目的片段,其检测原虫的灵敏度为0.8×10-6,较常规镜检敏感,并具有鉴别红内期早期阶段疟原虫种类和确认有无混合感染的潜力。因而认为该系统是灵敏、准确、简易、快速的疟疾诊断新方法,值得推广使用。 展开更多
关键词 疟原虫 疟疾 聚合酶链反应 基因诊断
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我国内脏利什曼病山丘疫区与平原疫区利什曼原虫SSUrDNA多变区序列分析 被引量:7
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作者 卜玲毅 胡孝素 +1 位作者 敬保迁 易桃林 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期321-324,共4页
[目的 ]分析我国内脏利什曼病 (VL)山丘疫区与平原疫区利什曼原虫 (L .d )分离株小亚基核糖体DNA (SSUrDNA)多变区的序列差异。 [方法 ]nDNA进行PCR扩增 ,将扩增出的SSUrDNA基因的特异片段克隆于 pGEMR TEasyVector上 ,采用通用引物M 1... [目的 ]分析我国内脏利什曼病 (VL)山丘疫区与平原疫区利什曼原虫 (L .d )分离株小亚基核糖体DNA (SSUrDNA)多变区的序列差异。 [方法 ]nDNA进行PCR扩增 ,将扩增出的SSUrDNA基因的特异片段克隆于 pGEMR TEasyVector上 ,采用通用引物M 13进行PCR扩增 ,全自动测序仪测序。 [结果 ]序列分析显示 ,扩增的 5株利什曼原虫SSUrDNA序列大小均为 392bp ;序列差异均发生在两个独特序列区 (UQ Ⅰ和UQ Ⅱ ) ;山丘疫区L .d甘肃分离株和四川分离株均在UQ Ⅱ区上有 2个相同的碱基突变 ,L .d甘肃分离株UQ Ⅰ区上有 1个碱基突变 ;无移码突变。 [结论 ]山丘疫区分离株与平原疫区分离株之间的碱基序列有差异 ,平原疫区L .d山东分离株与婴儿利什曼原虫 (L .infantum) 展开更多
关键词 内脏利会曼病 利会曼原虫 ssurdna 序列分析
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利什曼原虫中国分离株SSU rDNA多变区序列分析 被引量:7
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作者 卜玲毅 胡孝素 +2 位作者 敬保迁 马莹 易桃林 《实用寄生虫病杂志》 CAS 2001年第1期1-3,共3页
目的分析我国荒漠、山丘疫区利什曼原虫分离株的 SSU r DNA多变区序列差异。方法 n DNA进行PCR扩增 ,将扩增出的 SSU r DNA基因的特异片段克隆于 p GEMR-T Easy Vector上 ,采用通用引物 M1 3进行 PCR扩增 ,全自动测序仪测序。结果序列... 目的分析我国荒漠、山丘疫区利什曼原虫分离株的 SSU r DNA多变区序列差异。方法 n DNA进行PCR扩增 ,将扩增出的 SSU r DNA基因的特异片段克隆于 p GEMR-T Easy Vector上 ,采用通用引物 M1 3进行 PCR扩增 ,全自动测序仪测序。结果序列分析显示本文报道的荒漠、山丘疫区的 2株利什曼原虫 (L.d.XJ771、L.d.SC6)的 SSU r DNA序列大小均为 3 92 bp;序列差异发生在两个独特序列区 (UQ- 和 UQ- ) ,无移码突变 ;与 Gene Bank中的利什曼原虫比较分析 ,同源性在 98%以上。结论我国荒漠、山丘疫区利什曼原虫分离株之间的 SSU r DNA多变区的碱基序列有差异 ;荒漠疫区分离株 L.d.XJ771与国际标准株 L.d.DD8的 SSU r 展开更多
关键词 利什曼原虫 小亚基核糖体核酸基因 聚合酶链反应 克隆 序列分析 基因变异
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我国新疆皮肤利什曼病病原体SSU rDNA多变区序列分析 被引量:4
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作者 章涛 胡孝素 +2 位作者 敬保迁 戴保民 郑学礼 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 1998年第4期279-283,共5页
我国新疆皮肤利什曼病病原体(CLP)种株鉴定尚有分歧。本研究用一对利什曼原虫属特异引物R222和R333,直接从皮肤利什曼病病人皮肤病变组织、热带利什曼原虫(Leishmaniatropica)和婴儿利什曼原虫(L.... 我国新疆皮肤利什曼病病原体(CLP)种株鉴定尚有分歧。本研究用一对利什曼原虫属特异引物R222和R333,直接从皮肤利什曼病病人皮肤病变组织、热带利什曼原虫(Leishmaniatropica)和婴儿利什曼原虫(L.infantum)基因组DNA中扩增出一SSUrDNA特异片段,克隆到pGEM○R-TEasyVector上,并以双脱氧链末端终止法测序。序列分析显示扩增的CLP、L.infantum和L.tropicaSSUrDNA序列皆为391bp长,L.tropica与CLP的序列之间387个碱基相同,存在4个点突变;L.infantum与CLP的序列之间383个碱基相同,存在7个点突变和2个移码突变;L.tropica与L.infantum的序列之间387个碱基相同,存在3个点突变和2个移码突变。表明扩增的CLP、L.infantum和L.tropicaSSUrD-NA多变区序列高度同源,但仍存在少数点突变,或插入/缺失;该SSUrDNA序列变异可反应种间差异;新疆皮肤利什曼病病原体与L.tropica较相近。 展开更多
关键词 皮肤利什曼病 病原体 PCR rdna 克隆 序列分析
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我国间日疟原虫地理株SSUrDNA特定序列的比较分析 被引量:3
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作者 万磊 陈培霞 +1 位作者 薛采芳 姜绍谆 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 1995年第1期1-5,共5页
用已设计的一对特异引物和建立的双温度点聚合酶链式反应(PCR)技术,分别从我国安徽、福建、海南、四川及云南五省疟区采集的间日疟患者血样DNA抽提物中,扩增出长约640个碱基对(bp)的DNA片段,经限制性酶切鉴定,证... 用已设计的一对特异引物和建立的双温度点聚合酶链式反应(PCR)技术,分别从我国安徽、福建、海南、四川及云南五省疟区采集的间日疟患者血样DNA抽提物中,扩增出长约640个碱基对(bp)的DNA片段,经限制性酶切鉴定,证实为间日疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因(SSUrDNA)目的片段。将其分别与载体M13mp18和M13mp19连接、克隆,以双脱氧末端终止法测序,并分析比较。结果表明,同一地区二份样本序列完全相同,国内间日疟原虫地理株间及其与已报道的国外虫株克隆间,该序列显示出高度的同源性,但亦存在由个别碱基置换,插入或缺失所表现出的差异。 展开更多
关键词 疟原虫 间日疟原虫 地理株 ssurdna 序列分析
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我国恶性疟原虫地理株SSUrDNA特定序列的变异分析 被引量:6
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作者 万磊 陈培霞 +1 位作者 薛采芳 姜绍谆 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 1994年第2期91-93,共3页
采用聚合酶链式反应(PCR)技术,分别从我国安徽、海南及云南三省疟区来源的恶性疟原虫株基因组DNA中,扩增出该虫小亚单位核糖体核糖核酸(SSUrRNA)基因特定片段,长约570bp,将其插入M13mp18和M13mp... 采用聚合酶链式反应(PCR)技术,分别从我国安徽、海南及云南三省疟区来源的恶性疟原虫株基因组DNA中,扩增出该虫小亚单位核糖体核糖核酸(SSUrRNA)基因特定片段,长约570bp,将其插入M13mp18和M13mp19载体中,以双脱氧末端终止法测序。读序结果分析表明,恶性疟原虫地理株间及与巴西IMTM22株7G8克隆间,SSUrDNA特定片段序列具有高度同源性,差异仅表现为个别碱基置换、插入或缺失所致的点突变,且均发生在可变区中,其发生频率亦无明显差别。 展开更多
关键词 恶性疟 dna 序列分析 疟原虫
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新疆皮肤利什曼病病原体SSU rDNA多变区PCR扩增及克隆 被引量:1
7
作者 章涛 胡孝素 +3 位作者 敬保迁 郑学礼 马莹 李凡 《福建医科大学学报》 1998年第1期1-5,共5页
目的鉴定新疆皮肤利什曼病病原体。方法用利什曼原虫属特异引物R222和R333,从皮肤利什曼病患者皮肤病变组织、婴儿利什曼原虫和热带利什曼原虫基因组DNA中扩增出一特异SSUrDNA多变区片段,将其克隆到pGEM○R-... 目的鉴定新疆皮肤利什曼病病原体。方法用利什曼原虫属特异引物R222和R333,从皮肤利什曼病患者皮肤病变组织、婴儿利什曼原虫和热带利什曼原虫基因组DNA中扩增出一特异SSUrDNA多变区片段,将其克隆到pGEM○R-TEasyVector上,并筛选和鉴定出重组质粒。结果以EcoRⅠ酶切、PCR扩增和Southern杂交证实获得的重组质粒包含SSUrDNA多变区片段。结论皮肤利什曼病病原体、婴儿利什曼原虫和热带利什曼原虫SSUrDNA多变区片段重组质粒的获得,为进一步序列分析比较提供实验材料。 展开更多
关键词 皮肤利什曼病 ssu rdna 聚合酶链反应 分子克隆
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Complete nuclear ribosomal DNA sequence amplification and molecular analyses of Bangia (Bangiales, Rhodophyta) from China 被引量:2
8
作者 徐佳杰 姜波 +4 位作者 柴三明 何渊 朱建一 沈宗根 沈颂东 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2016年第5期1044-1053,共10页
Filamentous Bangia,which are distributed extensively throughout the world,have simple and similar morphological characteristics.Scientists can classify these organisms using molecular markers in combination with morph... Filamentous Bangia,which are distributed extensively throughout the world,have simple and similar morphological characteristics.Scientists can classify these organisms using molecular markers in combination with morphology.We successfully sequenced the complete nuclear ribosomal DNA.approximately 13 kb in length,from a marine Bangia population.We further analyzed the small subunit ribosomal DNA gene(nrSSU) and the internal transcribed spacer(ITS) sequence regions along with nine other marine,and two freshwater Bangia samples from China.Pairwise distances of the nrSSU and 5.8S ribosomal DNA gene sequences show the marine samples grouping together with low divergences(0-0.003;0-0.006,respectively) from each other,but high divergences(0.123-0.126;0.198,respectively) from freshwater samples.An exception is the marine sample collected from Weihai,which shows high divergence from both other marine samples(0.063-0.065;0.129,respectively) and the freshwater samples(0.097;0.120,respectively).A maximum likelihood phylogenetic tree based on a combined SSU-ITS dataset with maximum likelihood method shows the samples divided into three clades,with the two marine sample clades containing Bangia spp.from North America,Europe,Asia,and Australia;and one freshwater clade,containing Bangia atropurpurea from North America and China. 展开更多
关键词 BANGIA molecular analysis small subunit ribosomal dna gene(nrssu) internal transcribed spacer(ITS) ribosomal dna
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云南省间日疟原虫SSUrRNA基因片段的体外扩增、克隆及序列分析 被引量:2
9
作者 万磊 智刚 +3 位作者 陈培霞 薛采芳 姜绍谆 刘珺 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1993年第2期81-85,共5页
根据已知间日疟原虫、其它相关原虫及人小亚单位核糖体核糖核酸(SSUrRNA)基因序列,借助计算机程序分析,设计一对寡聚核苷酸引物。采用聚合酶链式反应(PCR)技术,从云南省两例间日疟患者血样DNA抽提物中,均扩增出长约641个碱基对(bp)的SSU... 根据已知间日疟原虫、其它相关原虫及人小亚单位核糖体核糖核酸(SSUrRNA)基因序列,借助计算机程序分析,设计一对寡聚核苷酸引物。采用聚合酶链式反应(PCR)技术,从云南省两例间日疟患者血样DNA抽提物中,均扩增出长约641个碱基对(bp)的SSUrRNA基因特定片段;双脱氧链末端终止法测序结果表明,两份样本扩增片段DNA序列完全相同,但与背景序列比较,在第269位出现碱基置换由G变为A,而在第630位则缺失一碱基C,从而导致该两处限制性内切酶位点的改变。 展开更多
关键词 间日疟原虫 聚合酶链反应 分子克隆
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瓶囊碘泡虫的重描述及其与洪湖碘泡虫分子标记的比较
10
作者 张潇艺 丁鹏 +3 位作者 张城豪 孙荣华 杨承忠 柳阳 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期180-190,共11页
为了完善瓶囊碘泡虫的分类学特征及厘清其与洪湖碘泡虫的分类关系,实验采用形态学、组织学和分子生物学方法对瓶囊碘泡虫进行了重描述,并与洪湖碘泡虫的分子标记进行了系统比较。结果显示,瓶囊碘泡虫寄生于异育银鲫的鳃,形成乳白色的圆... 为了完善瓶囊碘泡虫的分类学特征及厘清其与洪湖碘泡虫的分类关系,实验采用形态学、组织学和分子生物学方法对瓶囊碘泡虫进行了重描述,并与洪湖碘泡虫的分子标记进行了系统比较。结果显示,瓶囊碘泡虫寄生于异育银鲫的鳃,形成乳白色的圆形或椭圆形孢囊,直径为1.2~1.4 mm。成熟孢子壳面观呈梨形,前端较尖,后端钝圆,孢子长17.3~19.6μm,孢子宽7.4~9.9μm。两个极囊呈瓶状,大小不等。大极囊长6.4~9.7μm,大极囊宽2.1~3.3μm;小极囊长5.3~8.9μm,小极囊宽2.0~3.3μm。极丝圈数为8~11圈。组织学分析显示,瓶囊碘泡虫寄生于鳃小片间的上皮组织。BLAST分析显示,本研究获得的瓶囊碘泡虫的小亚基核糖体DNA(SSU rDNA)序列与GenBank中瓶囊碘泡虫序列的相似性为99.5%~99.8%(KC425223~KC425225、MH329620、JQ690361、JQ690373、KJ725082、MN227351、DQ339482)。系统发育分析表明,瓶囊碘泡虫与洪湖碘泡虫形成姐妹支。瓶囊碘泡虫与洪湖碘泡虫分子标记序列的比较结果显示,这两种碘泡虫的序列相似性为98.2%~98.8%,遗传距离为0.014~0.018,存在27个碱基差异。SSU rRNA二级结构分析显示,瓶囊碘泡虫和洪湖碘泡虫同一物种不同群体间的二级结构一致,两个物种间的二级结构存在明显差异,表明SSU rRNA二级结构可以作为鉴别瓶囊碘泡虫和洪湖碘泡虫的分子特征。本研究完善了瓶囊碘泡虫在异育银鲫鳃部的详细寄生部位,提出SSU rRNA二级结构可以作为有效鉴别瓶囊碘泡虫和洪湖碘泡虫的分子标记。 展开更多
关键词 粘孢子虫 小亚基核糖体dna(ssu rdna) 二级结构 系统发育分析
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裳卷蛾变形孢虫SSU rRNA核心序列的克隆与系统发育分析
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作者 马露芸 涂增 +2 位作者 薛英伟 王金芳 万永继 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1439-1444,共6页
【目的】利用分子生物学手段探索裳卷蛾变形孢虫的遗传发育地位。【方法】微孢子虫的SSUr RNA序列是构建系统发育进化树的重要工具。试验通过T-A克隆法对裳卷蛾变形孢虫(Vairimorpha ceraces)SSU rRNA核心序列进行了克隆,并采用近邻法... 【目的】利用分子生物学手段探索裳卷蛾变形孢虫的遗传发育地位。【方法】微孢子虫的SSUr RNA序列是构建系统发育进化树的重要工具。试验通过T-A克隆法对裳卷蛾变形孢虫(Vairimorpha ceraces)SSU rRNA核心序列进行了克隆,并采用近邻法构建了系统发育进化树。【结果】克隆得到了长为1228bp的核苷酸序列(GenBank EU267796)。系统发育分析结果表明:裳卷蛾变形孢虫与分离于小菜蛾(Plutella xylostella)的Vairimorpha sp.Germany(GenBank AF124331)和Vairimorpha imperfecta(GenBank AJ131645)相似性最高,它们在系统发育进化树中与寄主为鳞翅目昆虫的Nosema属聚为一类,与纳卡变形孢虫(Vairimorpha necatrix)为代表的Vairimorpha属为相邻集。【结论】结合其生物学特征,裳卷蛾变形孢虫确实为Vairimorph a属的成员,但根据系统发育分析归入Nosematidae科可能更为合适。 展开更多
关键词 裳卷蛾变形孢虫 龙眼裳卷蛾 ssu RRNA 克隆 系统发育分析
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玉溪霍尔多巴吉鹅感染贝氏隐孢子虫的分子鉴定
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作者 陈俊蓉 谢昕言 +2 位作者 贺君君 杨建发 王萍 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期54-57,共4页
为了对云南省玉溪市某养殖场的霍尔多巴吉鹅进行隐孢子虫检测,本试验采集疑似感染隐孢子虫的霍尔多巴吉鹅的粪便样品,利用饱和盐水漂浮法进行镜检,并结合分子生物学鉴定方法,提取粪便样品DNA,采用巢氏PCR扩增隐孢子虫核糖体小亚基RNA(SS... 为了对云南省玉溪市某养殖场的霍尔多巴吉鹅进行隐孢子虫检测,本试验采集疑似感染隐孢子虫的霍尔多巴吉鹅的粪便样品,利用饱和盐水漂浮法进行镜检,并结合分子生物学鉴定方法,提取粪便样品DNA,采用巢氏PCR扩增隐孢子虫核糖体小亚基RNA(SSU rRNA)基因,测序后通过NCBI进行Blast在线比对,构建系统发育进化树。结果显示,所采集的鹅粪便样品中,隐孢子虫检出率为20.45%(9/44);隐孢子虫SSU rRNA基因的PCR扩增结果显示,该鹅源隐孢子虫与贝氏隐孢子虫同源性达100%;系统进化分析显示,二者位于同一分支。结果表明,该养殖场的霍尔多巴吉鹅存在贝氏隐孢子虫感染。 展开更多
关键词 核糖体小亚基RNA(ssu rRNA) 贝氏隐孢子虫 霍尔多巴吉鹅 分子鉴定
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间日疟原虫SSUrDNA特定片段的体外扩增及鉴定
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作者 万磊 智刚 +2 位作者 陈培霞 薛采芳 姜绍谆 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第2期96-99,共4页
根据已知序列,设计出一对含克隆位点的寡聚核苷酸引物,用于间日疟原虫SSUrDNA特定片段扩增;采用双温度点PCR法,从我国间日疟患者血样DNA抽提物中,直接扩增出预期大小片段(约640bp),而培养红内期恶性疟原虫株... 根据已知序列,设计出一对含克隆位点的寡聚核苷酸引物,用于间日疟原虫SSUrDNA特定片段扩增;采用双温度点PCR法,从我国间日疟患者血样DNA抽提物中,直接扩增出预期大小片段(约640bp),而培养红内期恶性疟原虫株、人源利什曼原虫株,人源弓形虫株及正常人DNA样本均无此扩增带出现。扩增片段进一步经限制性酶切和Northern印迹杂交分析,证实确为间日疟原虫SSUrDNA目的片段。 展开更多
关键词 间日 疟原虫 ssurdna 聚合酶链反应
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隐孢子虫牛源分离株的分离和鉴定 被引量:17
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作者 刘海鹏 曹建平 +8 位作者 沈玉娟 陈有贵 李小红 卢潍媛 徐馀信 刘宜升 刘述先 周晓农 汤林华 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期81-86,共6页
目的分离和鉴定采自徐州自然感染奶牛粪便中的隐孢子虫卵囊。方法在徐州某奶牛场采集经改良抗酸染色镜检确认为隐孢子虫感染的奶牛粪便,用不连续Sheather’s蔗糖密度梯度离心法纯化卵囊。采用Chelex-100方法提取卵囊基因组DNA,设计引物... 目的分离和鉴定采自徐州自然感染奶牛粪便中的隐孢子虫卵囊。方法在徐州某奶牛场采集经改良抗酸染色镜检确认为隐孢子虫感染的奶牛粪便,用不连续Sheather’s蔗糖密度梯度离心法纯化卵囊。采用Chelex-100方法提取卵囊基因组DNA,设计引物扩增小亚基核糖体RNA(SSU rRNA)基因和卵囊囊壁蛋白(COWP)基因,分别克隆到pGEM-T和pGEM-T Easy载体,测定核苷酸序列,运用BLAST和MEGA软件进行序列同源性和种系发生分析。结果分离的隐孢子虫卵囊个体大小为(7.4±0.32)μm×(5.4±0.21)μm,长宽比为1.3±0.07(n=20)。徐州牛源隐孢子虫与Gen- Bank公布的安氏隐孢子虫比较,SSU rRNA和COWP基因序列同源性分别为100%和99%。种系发生分析显示该株隐孢子虫与安氏隐孢子虫处于同一分支。结论由徐州自然感染奶牛粪便中分离获得的隐孢子虫是安氏隐孢子虫。 展开更多
关键词 安氏隐孢子虫 小亚基核糖体RNA 卵囊囊壁蛋白 种系发生分析
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南海有毒塔玛亚历山大藻的分子地理标记分析 被引量:13
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作者 陈月琴 邱小忠 +3 位作者 屈良鹄 曾陇梅 齐雨藻 郑磊 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期45-51,共7页
采用聚合酶键扩增反应(PCR)和限制性片段长度多态性分析(RFLP)方法,对1992年5月和1994年间月采自中国南海大鹏湾、大亚湾、香港海域的赤潮有毒甲藻塔玛亚历山大藻8个不同地理株的核糖体小亚基RNA基因(Ss-rDNA)进行分析,并与北... 采用聚合酶键扩增反应(PCR)和限制性片段长度多态性分析(RFLP)方法,对1992年5月和1994年间月采自中国南海大鹏湾、大亚湾、香港海域的赤潮有毒甲藻塔玛亚历山大藻8个不同地理株的核糖体小亚基RNA基因(Ss-rDNA)进行分析,并与北美、西欧等地的比较。结果表明,中国南海的塔玛亚历山大藻缺少B基因,这与北美等地的塔玛亚历山大藻(包括有毒和无毒株)不同,而与西欧、澳洲等地的有毒和无毒株相似,提示B基因的存在可以作为一种分子地理标记而不是藻种有毒的标记。 展开更多
关键词 塔玛亚历山大藻 分子地理标记 南海 有毒藻 红潮
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福建古田红曲生产用红曲霉菌主要种类的鉴别 被引量:9
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作者 李志强 刘颖 +1 位作者 林风 吴丽云 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期64-69,共6页
以购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)的5株红曲霉菌为对照,对福建省微生物研究所红曲霉菌资源库中收藏自福建省古田县的60株红曲霉菌(Monascus sp.)进行分类鉴定研究。首先根据不同菌株在麦芽汁琼脂(Wa)、察氏酵母提取物琼脂(C... 以购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)的5株红曲霉菌为对照,对福建省微生物研究所红曲霉菌资源库中收藏自福建省古田县的60株红曲霉菌(Monascus sp.)进行分类鉴定研究。首先根据不同菌株在麦芽汁琼脂(Wa)、察氏酵母提取物琼脂(CYA)和甘油硝酸盐琼脂(G25N)培养基上的菌落形态特征进行初步分类,进而基于核糖体DNA内转录间隔区(rDNA internal transcribed spacer,rDNA ITS)、核糖体大亚基(28S nuclear ribosomal large subunit rRNA gene,LSU)和核糖体小亚基(18S nuclear ribosomal small subunit r RNA gene,SSU)的基因片段的测序结果,在Gen Bank中通过BLAST进行分子生物学方面的鉴定研究,并用ITS序列构建系统发育树。通过形态特征及3个基因序列的比对,认为所选取的60株古田红曲霉菌分别归属红色红曲霉菌(M.ruber)、丛毛红曲霉菌(M.pilosus)或紫色红曲霉菌(M.purpureus)3个种。 展开更多
关键词 红曲霉菌 ITS LSU ssu 鉴定
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套式PCR检测滤纸干血滴中恶性疟原虫的研究 被引量:12
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作者 孙明林 陈培霞 +2 位作者 薛采芳 万磊 刘忠湘 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期197-200,共4页
目的:建立简易、实用的套式PCR检测恶性疟原虫(P.f.)的方法。方法:以小亚单位核糖体核糖核酸基因(SSUrDNA)为目的片段的双温度点套式PCR扩增滤纸干血滴中P.f.DNA,并将结果与镜检法进行比较研究。结果:... 目的:建立简易、实用的套式PCR检测恶性疟原虫(P.f.)的方法。方法:以小亚单位核糖体核糖核酸基因(SSUrDNA)为目的片段的双温度点套式PCR扩增滤纸干血滴中P.f.DNA,并将结果与镜检法进行比较研究。结果:143例标本中两法均阳性和均阴性分别有55份和51份,镜检阴性而PCR阳性者34份,镜检阳性而PCR法阴性3份。套式PCR总阳性率为62%,显著高于镜检法的41%,两者符合率为74%。结论:本法简便、快速,敏感性高、特异性强,具有一定的现场应用价值。 展开更多
关键词 恶性 疟原虫 滤纸干血滴 检测
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实时荧光定量PCR检测柞蚕微孢子虫的方法 被引量:5
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作者 米锐 冀万杰 +9 位作者 赵振军 王旭达 李佩佩 李青峰 孙永欣 王鹤 王凤成 李亚洁 朱有敏 范琦 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期260-267,共8页
提高柞蚕微孢子虫检测技术的准确性和灵敏度,对控制柞蚕微孢子虫的胚种传染至关重要。以柞蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA(SSU rRNA)基因为靶基因,建立柞蚕微孢子虫的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示:该方法能够特异性检测柞蚕微孢子... 提高柞蚕微孢子虫检测技术的准确性和灵敏度,对控制柞蚕微孢子虫的胚种传染至关重要。以柞蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA(SSU rRNA)基因为靶基因,建立柞蚕微孢子虫的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示:该方法能够特异性检测柞蚕微孢子虫基因组DNA,而对柞蚕基因组DNA无扩增产物。依据标准曲线确定荧光定量PCR的Ct值≤35作为检测的敏感度区间,对柞蚕微孢子虫基因组DNA的最低检出限为0.004 6 ng。应用该方法对100粒柞蚕蛹样本进行检测,共检出54个样本呈柞蚕微孢子虫感染阳性,而采用普通显微镜镜检与采用常规PCR方法检测呈阳性的样本数量分别为2个和34个。应用该方法对生产中的柞蚕种茧和雌蛾进行抽样检测,柞蚕微孢子虫感染阳性检出率显著高于用普通显微镜镜检的阳性检出率(P<0.05)。建立的柞蚕微孢子虫实时荧光定量PCR检测方法提高了检测的灵敏度。 展开更多
关键词 柞蚕微孢子虫 SYBR Green荧光定量PCR 小亚单位核糖体RNA
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新科Rhizoplacopsidaceae中的新属及新种Rhizoplacopsis weichingii(英文) 被引量:1
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作者 周启明 魏江春 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期376-385,共10页
本文描述了位于新科盾叶科 Rhizoplacopsidaceae(Umbilicariales,Lecanoromycetes,Ascomycota)中的新属盾叶属 Rhizoplacopsis 和新种蔚青盾叶 Rhizoplacopsis weichingii。蔚青盾叶取名于著名中国真菌学家王云章教授之字“蔚青”,作为... 本文描述了位于新科盾叶科 Rhizoplacopsidaceae(Umbilicariales,Lecanoromycetes,Ascomycota)中的新属盾叶属 Rhizoplacopsis 和新种蔚青盾叶 Rhizoplacopsis weichingii。蔚青盾叶取名于著名中国真菌学家王云章教授之字“蔚青”,作为庆祝教授百岁生日之纪念。该新种在外形上与 Rhizoplaca 属地衣极为相似,但位于地衣体上的子囊盘却为网衣型。此外,它的子囊顶器结构非常接近于 Umbilicaria-type。基于分子数据,对 Rhizoplacopsis weichingii 及其它相关地衣进行的系统发育分析支持成立新属盾叶属 Rhizoplacopsis 和新科盾叶科 Rhizoplacopsidaceae。 展开更多
关键词 ITS LSU rdna ssu rdna 形态特征 具脐地衣
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子囊菌的一个新目Umbilicariales J.C.Wei & Q.M.Zhou 被引量:1
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作者 周启明 魏江春 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期40-45,共6页
本文基于核糖体SSUrDNA序列对石耳科Umbilicariaceae的系统地位进行了研究。将所获得的石耳科地衣中6个种的SSUrDNA序列与GenBank中其它地衣型及非地衣型真菌的相关序列进行比对用于系统发育研究。结果表明长期以来系统地位不够明确而... 本文基于核糖体SSUrDNA序列对石耳科Umbilicariaceae的系统地位进行了研究。将所获得的石耳科地衣中6个种的SSUrDNA序列与GenBank中其它地衣型及非地衣型真菌的相关序列进行比对用于系统发育研究。结果表明长期以来系统地位不够明确而暂时被置于茶渍目Lecanorales的石耳科不能被包括在茶渍目中,分子数据支持成立石耳目Umbilicariales。基于分子数据并结合形态学和解剖学特征描述了新目Umbilicariales J.C.Wei&Q.M.Zhou(Lecanoromycetes,Ascomycota)。 展开更多
关键词 ssu rdna 分子系统学 石耳科
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