sn-1,3位专一性脂肪酶在食品中的应用

脂肪酶在食品中的应用已有几十年的历史,由于油脂中三酰甘油的1,3位和2位的脂肪酸对油脂的理化、营养和生理特性方面有较大的差异,因此专一性水解三酰甘油1,3位的脂肪酶成为研究的热点。由于sn-1,3位专一性脂肪酶选择性地水解三酰甘油的1位和3位,因此广泛的用于三酰甘油的修饰。国内外大量的研究表明,sn-1,3位专一性脂肪酶适用于生产结构脂质、母乳脂肪替代品、类可可脂和甘油二酯等,获得价格低廉而活性高的酶、高效的酶固定化技术和研发酶反应器是今后研究的重点。

pH值对Klebsiella pneumoniae合成1,3-丙二醇中心碳代谢的影响

目的:生物法合成1,3-丙二醇时,pH值对于产物谱有着显著影响。本文将研究不同pH值对克雷伯氏肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae)的中心碳代谢的影响。方法:设计单因素试验,控制发酵pH值,用5L Braun发酵罐进行批次发酵,分析发酵过程中产物时序性合成的特性。结果:pH 6.2到7.4适合菌体生长;不同pH值对于葡萄糖消耗无明显差异;pH6.8时能在较长时间保持在高水平的甘油比消耗速率;在偏碱性条件下,有机酸丁二酸、乳酸、乙酸的比生长速率显著增大;而2,3-丁二醇在偏碱性的pH7.4和8.0时根本不能合成。pH6.8时1,3-丙二醇的得率最大,不同pH条件下碳回收率相当。结论:证明了pH值对K. pneumoniae中心碳代谢具有显著影响,不同产物呈现不同的合成动力学特性,其详细机理有带进一步深入研究。

人乳脂替代品1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的研究进展

母乳是婴儿最理想的营养来源,母乳脂肪酸在甘油三酯骨架上具有高度特异性的位置分布,其70%为sn-2棕榈酸酯。棕榈酸在甘油三酯中酰基化位置的不同直接影响棕榈酸在人体内的生理功能,sn-2棕榈酸酯易被人体吸收。1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯(1,3-dioleoyl-2-palmitoyl triglyceride,OPO)是一种典型的sn-2棕榈酸酯。普通婴儿配方奶粉主要以牛乳为原料,虽然牛乳脂肪酸组成与母乳脂肪酸接近,但其脂肪酸结构与母乳存在显著差异,牛乳中的sn-2棕榈酸酯远低于母乳中sn-2棕榈酸酯含量。以牛乳为基础,在奶粉中加入1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯(OPO),较之一般的配方奶粉更加接近母乳,更宜作为人乳脂替代品?本文介绍了人乳脂替代品1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯(OPO)的研究意义、结构特点、制备方法和分析测定方法等研究进展,旨在为婴儿配方奶粉的开发提供有益参考。

pH对克雷伯氏菌1,3-丙二醇合成关键酶酶活及发酵特性的影响

在5 L发酵罐进行甘油脉冲流加发酵,分析了不同pH值对克雷伯氏肺炎杆菌发酵特性的影响,pH 6.5为菌体最佳生长条件,克雷伯氏肺炎杆菌合成1,3-丙二醇的产量最高。在1,3-丙二醇合成速率较大的对数中前期,进行甘油脉冲流加发酵,提高甘油浓度促进甘油脱水酶、1,3-丙二醇氧化还原酶和甘油脱氢酶活性。不同pH值的脉冲试验表明,甘油脱水酶,2,3-丁二醇脱氢酶比酶活随着pH值的升高而升高,1,3-丙二醇氧化还原酶,乳酸脱氢酶比酶活在pH6.5最高,因此偏酸性的发酵条件和对数期维持一定的甘油浓度能够促进1,3-丙二醇的合成。

1，3-β-D葡聚糖在侵袭性真菌感染临床诊断中的价值研究

目的探讨血浆1,3-β-D葡聚糖检测在侵袭性真菌感染临床诊断中特异性和敏感性及其价值。方法2013年10月至2014年10月我院收治的70例侵袭性真菌感染患者作为观察组，选取我院同期收治的70例非侵袭性真菌感染患者作为对照组，比较观察组与对照组血浆1，3-β-D葡聚糖检测结果，并分析血浆1,3-β-D葡聚糖检测的敏感性、特异性和准确度。结果观察组以白色假丝酵母菌（28．57％）、卡氏肺孢子菌为主（24．28％），两组菌种分类比较差异有统计学意义（P〈0．05）。观察组组患者血清1，3-β-D葡聚糖浓度显著高于对照组，两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。1,3-β-D葡聚糖在侵袭性真菌感染临床诊断的敏感性为89．83％，特异性为81．81％，准确性为88．57％。结论1,3-β-D葡聚糖检测在侵袭性真菌感染早期诊断中敏感性和特异性均较好，尤其适用于白色假丝酵母菌和菌烟曲霉菌等引起的侵袭性真菌感染，临床应用价值较高。

补料分批发酵过程中两阶段发酵生产1,3-丙二醇

在补料分批发酵过程中提高比生长速率不仅减少乙醇、甲酸的生成,而且提高1,3-丙二醇的得率和比生产速率。发酵后期甘油的浓度在15～26g/L时有利于提高1,3-丙二醇的生产。采取在发酵前期控制菌体较高比生长速率和发酵后期控制适宜甘油浓度相结合的策略,有效地提高了1,3-丙二醇的生产,降低副产物乳酸和乙醇的生成。

（1,3）-β-D葡聚糖检测对侵袭性真菌感染早期诊断的意义

目的 探讨血浆（1,3）β D葡聚糖检测（G试验）在侵袭性真菌感染（IFI）早期诊断中的价值.方法 选择2012年1月-12月间在新疆医科大学第一附属医院住院的疑似IFI患者204例,根据IFI诊断标准,将研究对象分为IFI组和非IFI组,应用MB-80微生物动态快速检测系统定量检测血浆（1,3）-β-D葡聚糖（BDG）的含量,比较两组BDG的阳性率,及不同真菌感染者BDG浓度的差异,用ROC曲线法确定BDG的最佳诊断值,并评价G试验对IFI早期诊断的价值.结果 204例患者中血浆BDG阳性117例,总阳性率为57.4％,其中ICU病房阳性率最高,为90.7％.204例患者中,临床诊断IFI患者99例,真菌培养阳性标本主要来源于呼吸道,占75.8％.其中白假丝酵母菌感染者BDG高于曲霉菌感染者（t=2.514,P＜0.05）.以厂家给定的值10 pg/ml为诊断界值,IFI组BDG阳性率明显高于非IFI组（χ^2=127.069,P＜0.01）.BDG用于IFI诊断的灵敏度和特异度分别为98.0％和80.8％.ROC曲线法确定的最佳诊断界值为16.2 pg/ml,以该值为阈值,特异度可提高到81.7％,ROC曲线下面积为0.920.结论 血浆BDG葡聚糖检测可用于IFI的早期诊断.以16.2 pg/ml为阈值可适当提高诊断效率.

气相色谱-质谱法快速测定食品接触用塑料中2,2,4-三甲基-1,3-戊二醇双异丁酸酯的特定迁移量

采用气相色谱-质谱法快速测定从食品接触用塑料中迁移至水、4%(体积分数,下同)乙酸溶液、20%(体积分数,下同)乙醇溶液、50%乙醇溶液、异辛烷和橄榄油等6种食品模拟物中2,2,4-三甲基-1,3-戊二醇双异丁酸酯的含量。在气相色谱分离中采用DB-5MS色谱柱(30m×0.25mm,0.25μm),在质谱分析中采用选择离子监测模式。食品模拟物为水、4%乙酸溶液、20%乙醇溶液和50%乙醇溶液时,萃取溶剂为正己烷,萃取次数为1,萃取时间为10min;食品模拟物为异辛烷时无需萃取;食品模拟物为橄榄油时,萃取溶剂为甲醇,萃取次数为3,萃取时间为10min。TXIB的质量浓度在0.03~1.00mg·L^(-1)(食品模拟物为橄榄油:0.10~2.00mg·kg^(-1))内与其对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为0.01mg·kg^(-1)(食品模拟物为橄榄油:0.03mg·kg^(-1)),测定下限(10S/N)为0.03mg·kg^(-1)(食品模拟物为橄榄油:0.10mg·kg^(-1))。以空白食品模拟物为基体进行加标回收试验,所得回收率为82.7%~110%,测定值的相对标准偏差(n=6)为2.3%~10%。

米黑根毛霉脂肪酶基因的酵母重组表达和Kex2位点改造

米黑根毛霉脂肪酶(RML)具有较高的合成活性、热稳定性、溶剂耐受性以及sn-1,3位置专一性等一系列适合工业化推广的特点。本研究通过密码子优化改造RML编码基因,并将其克隆、转化到毕赤酵母GS115菌株,经诱导发酵156 h,酶活达到3.77 U/mL。为了进一步改善RML脂肪酶的重组表达,通过定点突变的方式去掉潜在的Kex2酶切位点,结果显示:RML突变体表达量均显著低于野生型的RML脂肪酶,表明"-Arg196-Arg197-"序列并不影响RML的重组表达。通过对RML蛋白结构分析,Kex2酶切位点的肽键被包埋在蛋白内部,这表明该位点区域的折叠在进入分泌途径时已基本完成。本研究对异源蛋白的酵母重组表达具有一定参考价值。

鱼油中EPA和DHA的酶法富集工艺研究

利用Sn-1,3特异性脂肪酶对食品级鱼油中的二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)进行富集,而后利用偏甘油酯脂肪酶除去上述步骤产生的甘油二酯、甘油一酯,后处理得到具有天然属性的精制鱼油。采用单因素实验考察特异性脂肪酶富集EPA和DHA过程中脂肪酶用量、纯化水加入量、水解时间及水解温度对富集EPA和DHA的影响。运用气相色谱分析精制鱼油的脂肪酸组成。结果表明:特异性脂肪酶富集过程的最优工艺条件为在pH 6条件下固定化Sn-1,3特异性脂肪酶用量1%～15%、纯化水加入量1%～10%、水解时间2～6 h、水解温度30～70℃,富集后EPA和DHA总量为40%～60%,产品收率在48%～75%;精制鱼油含有21种主要脂肪酸,其中EPA和DHA含量最多。

转几丁质酶和葡聚糖酶基因棉花的获得及其对黄萎病的抗性

通过根癌杆菌介导法 ,将维管束特异启动子 (竹节花黄斑病毒启动子CoYMV)启动的几丁质酶和CaMV3 5S启动的 β 1,3 葡聚糖酶嵌合双价基因 ,导入陆地棉品种冀合 3 2 1和中棉所 3 5。利用卡那霉素涂抹法对转基因株的卡那霉素抗性进行初步鉴定 ,再经PCR和Southern杂交确证 ,结果显示双价抗病基因分别以 1～ 2个拷贝整合到棉花基因组内。对转基因株系T3 幼苗进行无底塑钵菌液浇根法鉴定和大田病圃鉴定 ,结果显示 :7个转化株系均表现不同程度的抗或耐黄萎病性 ,苗期鉴定结果和大田病圃调查结果基本一致 ;其中D9910、D9915和D9919等 3个转基因纯合系的大田病情指数分别为 6 5、9 4和 9 5,均达到高抗水平。对以上 3个高抗黄萎病的纯合系进行遗传分析 ,结果显示这 3个抗病纯合系的卡那霉素抗性符合一对显性基因分离规律 ,结合分子杂交验证结果 ,可以认为这3个转基因株均含有一个拷贝的双抗病基因。

克雷伯氏肺炎杆菌HR526快速合成1,3-丙二醇发酵特性研究

研究了实验室筛选的一株高产1,3-丙二醇(PDO)菌株克雷伯氏肺炎杆菌HR526(Klebsiella pneumoniae HR526),在5LB.Braun发酵罐进行甘油补料流加发酵30h,PDO达到91.47g/L,胞外代谢通量分析显示,PDO在对数中期通量达到最大,而乳酸在稳定期通量达到最大。结合酶学检测分析了PDO合成关键酶PDO氧化还原酶(PDOR)、甘油脱水酶(GDHt)和甘油脱氢酶(GDH)酶活的变化,PDO氧化还原酶活性在对数中期达到最高,甘油脱水酶/甘油脱氢酶在对数期远大于稳定期、衰退期,与代谢通量变化一致甘油脱水酶/甘油脱氢酶活性比例不均衡是3-HPA对数期积累的原因,PDO合成主要集中在对数期,是生长偶联的代谢产物。

非特异性二元醇氧化还原酶的克隆与表达

利用PCR技术分别从克雷伯氏产酸杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌中扩增出基因yqhD,编码非特异性二元醇氧化还原酶(OX)。并利用强启动子使重组质粒OX1-pDK、OX2-pDK在生产菌株K.pneumoniaeAC01中得到高效表达。DNA测序结果表明,扩增的序列与已报道的yqhD阅读框同源性分别为80.84%和80.67%。在有氧条件下摇瓶发酵培养,含OX1-pDK的基因工程菌1,3-PDO产量比对照菌株增长了8.18%,含OX2-pDK的基因工程菌1,3-PDO产量比对照菌株增长了14.33%。

磷脂酶法改性

磷脂来源很广,对其改性可采用的工具酶有磷脂酶A1、A2、D、C以及1,3特异性脂肪酶,这些工具酶的综合应用,给天然磷脂提供了方便灵活和安全的改性途径;在保持磷脂分子手性方面,酶法改性有着比化学改性无可比拟的优越性.工具酶的来源很广,在动物、植物和微生物中都能提取到磷脂酶,不同来源的酶的性质不同.影响非水相酶催化性质的关键因素包括:反应体系的水分活度、溶剂的效应、反应体系相态.

脂肪酶在食用油脂工业上的应用

脂肪酶按其对底物的特异性不同可分为非特异性酶、１，３—定向酶和脂肪酸特异性酶，在食用油脂工业上具有较大应用价值的是１，３—定向脂肪酶。介绍了脂肪酶（主要是１，３—定向脂肪酶）在油脂水解、酯交换和生物精炼三个方面的应用原理、特点及实例。

GC-MS法测定白酒接触塑料材料中非邻苯类塑化剂TXIB的迁移量

该研究采用液液萃取结合气相色谱-质谱(GC-MS)法建立了白酒接触用塑料材料中2,2,4-三甲基-1,3-戊二醇双异丁酸酯(TXIB)迁移量的测定方法。方法采用食品模拟物对常见塑料材料样品进行迁移试验后,得到模拟浸泡液,选择正己烷作为萃取溶剂对模拟浸泡液进行萃取,萃取溶剂体积为2 mL,震荡萃取时间为1 min,萃取液用HP-5ms(30 m×0.25 mm×0.25μm)毛细管色谱柱进行分离,采用GC-MS选择离子模式(SIM)进行分析,外标法定量。该方法可快速定量分析白酒接触用塑料材料中TXIB迁移量,线性关系良好(r=0.9975),定量限为0.02 mg/kg,加标回收率为106.60%~119.90%,相对标准偏差为2.30%~6.50%。该方法快速、灵敏、准确,适用于白酒接触用塑料材料中TXIB迁移量的检测。

疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达和性质鉴定

通过密码子优化改造编码sn-1,3位置专一性疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶(TLL)基因,同时通过重叠PCR技术合成该基因,并将其克隆到巴斯德毕赤酵母的表达载体p PIC9K中。结果表明,TLL脂肪酶被高效胞外表达,在摇瓶中发酵168 h得到的发酵液的上清脂肪酶表达量达到0.1 mg/m L,对应的p NPP水解酶活达到312.72U/m L。与对应的原始编码基因重组菌酶活(179.42 U/m L)相比,密码子优化后酶活提高74.29%,表明密码子优化策略成功提高了TLL在巴斯德毕赤酵母中的重组表达。比较毕赤酵母来源的重组TLL与商业化的米曲霉酶学性质发现它们具有相似的最适p H和温度耐受范围。另外,它们在有机溶剂耐受性、表面活性剂和金属离子效应以及位置选择性方面均较为相似,表明毕赤酵母来源的重组TLL同样具有商业化应用的潜力。